牛角瓜、白花牛角瓜、大牛角瓜的组培苗快速繁殖栽培方法
【专利摘要】本发明涉及一种牛角瓜、白花牛角瓜、大牛角瓜的组培苗快速繁殖栽培方法。它包括，步骤一：牛角瓜外植体的取材；步骤二：培养基配制；步骤三：牛角瓜外植体材料灭菌；步骤四：无菌接种；步骤五：培养基培养；步骤六：炼苗驯化移栽。本发明主要解决野生牛角瓜植物的规模化种植中，从种子播种到成苗时间较长，育苗数量有限，难以满足人工大规模种植苗种需求的技术问题，它采用牛角瓜植物组织培养或离体培养，从牛角瓜植物体分离出符合需要的各部分组织或器官、细胞，原生质体、形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等等，通过无菌操作，从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成牛角瓜再生植物。
【专利说明】牛角瓜、白花牛角瓜、大牛角瓜的组培苗快速繁殖栽培方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物的育苗栽培方法，特别是一种牛角瓜、白花牛角瓜、大牛角瓜的组培苗快速繁殖栽培方法。
【背景技术】
[0002]科名:萝蘑科。
[0003]属名:牛角瓜属。
[0004]中文种名:牛角瓜、白花牛角瓜、大牛角瓜。
[0005]拉丁学名:Apocynaceae;别称:Calotropis R.Br。
[0006]牛角瓜直立灌木，多年生高达3米-4米，全年花、果同期约11个月。
[0007]上述各地各国的牛角瓜、白花牛角瓜、大牛角瓜为野生植物，原在农林业种植产业中牛角瓜大规模种植为空白。
[0008]从2005年开始本发明人发现牛角瓜野生物种后，进行野生人工驯化，经多年培育，已可达到大规模人工栽培。目前，野生牛角瓜植物的规模化种植中，从种子播种到成苗时间较长，育苗数量有限，难以满足人工大规模种植苗种需求的问题。
【发明内容】
[0009]本发明的目的在于提供一种牛角瓜、白花牛角瓜、大牛角瓜的组培苗快速繁殖栽培方法,主要解决野生牛角瓜植物的规模化种植中，从种子播种到成苗时间较长,育苗数量有限，难以满足人工大规模种植苗种需求的的技术问题，它采用牛角瓜植物组织培养或离体培养，从牛角瓜植物体分离出符合需要的各部分组织或器官、细胞，原生质体、形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等等，通过无菌操作，从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成牛角瓜再生植物。
[0010]为实现上述目的，本发明是这样实现的。
[0011]一种牛角瓜、白花牛角瓜、大牛角瓜的组培苗快速繁殖栽培方法，其特征在于:它包括如下步骤:
步骤一:牛角瓜外植体的取材
牛角瓜生长季节或新萌发的2-4厘米侧芽或顶芽或其他部位新芽或新萌发的茎段、茎尖、根系、叶片或新开花的花序、花瓣、子房、花药、花托及果实、种子；
步骤二:培养基配制培养基A:牛角瓜诱导培养基
MS (大量元素母液)600-700mg/L,6-BA (细胞分裂素/6-苄基嘌呤)0.3-2 mg/L、NAA(生长素)0.3 mg/L、糖25 mg/L、琼脂粉5 mg/L，用精密试纸或酸度计调整浓度达到pH6.2 ；
培养基B:牛角瓜丛生芽增殖培养基
MS 750 mg/L、6-BA 0.3-2 mg/L,NAA 0.2 mg/L、糖 25-35 mg/L、琼脂 5 mg/L，用精密试纸或酸度计调整浓度达到PH6.2 ； 培养基C:牛角瓜生根培养基
MS 700 mg/L>6-BA 1 mg/L、NAA 0.3 mg/L、糖 35 mg/L、琼脂粉 5 mg/L,用精密试纸或酸度计调整浓度达到PH6.2 ；
上述培养基中的溶剂为水或蒸馏水；
步骤三:牛角瓜外植体材料灭菌；
步骤四:无菌接种
将已消毒好的牛角瓜外植体材料，经切割或剪裁成小段或小块，放入培养基A中； 步骤五:培养基培养培养基A培养15天-20天；
培养基B培养15天-20天；
培养基C培养20天-30天；
步骤六:炼苗驯化移栽。
[0012]所述的牛角瓜、白花牛角瓜、大牛角瓜的组培苗快速繁殖栽培方法，其特征在于:所述的牛角瓜生根培养步骤为:
(a)将新梢基部浸入培养基C中处理4?8小时后取出24小时；
(b)再浸入培养基C中处理2?4天。
[0013]所述的牛角瓜、白花牛角瓜、大牛角瓜的组培苗快速繁殖栽培方法，其特征在于:所述的牛角瓜生根培养步骤为:
(a)将新梢基部浸入培养基C中处理6?8天；
(b)切割粗壮的嫩枝在营养钵基质中直接生根；当牛角瓜增殖的芽体长至1-3厘米，可切下转入生根培养，芽体外观生长状态正常，接种后约30天可顺利生根；按照大苗生根，幼嫩苗进行增殖的原则进行，牛角瓜可顺利发根。
[0014]所述的牛角瓜、白花牛角瓜、大牛角瓜的组培苗快速繁殖栽培方法，其特征在于:所述的牛角瓜生根培养步骤为牛角瓜瓶外生根及组培苗移栽管理:
将牛角瓜增殖瓶苗中切下诱根培养的壮苗，取出瓶并在苗基部切一新鲜切口将新梢基部浸入培养基c中处理4?8小时,洗净根系附着的培养基后直接插于苗床的基质中，大约经过25-35天，便开始长根，扦插发根率达95%以上。
[0015]所述的牛角瓜、白花牛角瓜、大牛角瓜的组培苗快速繁殖栽培方法，其特征在于:所述的炼苗驯化移栽的具体做法是:
(a)取出牛角瓜瓶苗，用自来水洗净根系附着的培养基，自然晾干水分后，假植于基质中，遮荫通风；
(b)以河砂、泥炭土、珍珠岩以体积比2:1:1混合基质最适宜牛角瓜组培苗的过渡栽培；在培养基质中可掺入75%的百菌清可湿性粉剂200?500倍液，以进行灭菌处理；
(c)必须通过炼苗，根系生长良好优质的牛角瓜壮苗，可全年进行移栽，主要是温度适宜在10°C -20°C以上；有水分或水源或雨水即可。
[0016](d)牛角瓜移栽苗的水肥管理:
当第一次栽下苗床后必须浇水，为定根水；
后期掌握不干不浇的原则，牛角瓜多数叶片肥厚，体内贮水多，相对耐干不耐湿，过于潮湿会出现叶片发黄脱落现象； 牛角瓜移栽苗施肥应薄肥勤施，成苗后提供人工种植。
[0017]所述的牛角瓜、白花牛角瓜、大牛角瓜的组培苗快速繁殖栽培方法，其特征在于:所述的牛角瓜外植体材料灭菌包括:
取下的牛角瓜侧芽或顶芽或新萌发的2-4厘米侧芽或顶芽或其他部位新芽或新萌发的茎段、茎尖、根系、叶片、或新开花的花序、花瓣、子房、花药、花托及果实、种子等离体器官，进行灭菌处理；或
冼洁精洗涤或自来水清冼10 -20分钟或75%乙醇无菌水冲冼1次，或0.1%升汞10分钟-20分钟或无菌水冲冼6遍；或
使用升汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏水、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精等等化学药品进行配制灭菌处理。
[0018]初代培养-继代培养，牛角瓜继代培养是继初代培养之后的连续数代的扩繁殖培养过程。
[0019]目的是繁殖出几何级数增加的相当数量牛角瓜无根苗，最后能达到边繁殖边生根的目的。例如以2株牛角瓜经10代将生成210株牛角瓜株苗。
[0020]本发明方法是进行牛角瓜组织培养作为快速繁殖牛角瓜新植株的一项生物工程重要技术，在发展牛角瓜人工大面积种植生产实践中发挥良好的作用。本发明为发展牛角瓜种植产业取得更快、更大、更多的经济效益服务，为造福人类作出贡献。
【具体实施方式】
[0021 ] 以下通过实施例来进一步介绍本发明方法，以下实施例均使用了如上述
【发明内容】
中所述的方法。
[0022]实施例1:
2009年在云南昆明的苗圃基地组培苗车间，进行牛角瓜组培苗试验中，利用茎杆侧芽取得，通过步骤一:牛角瓜外植体的取材；步骤二:培养基配制；步骤三:牛角瓜外植体材料灭菌；步骤四:无菌接种；步骤五:培养基培养；步骤六:炼苗驯化移栽。得到210株组培苗植株，进行苗圃育苗成功。
[0023]新植株成苗出圃移栽，191株组培苗植株存活，生长10个月开花结果，存活率94%。
[0024]实施例2:
2010年在云南昆明市东川区种植科研所，借用其设备进行牛角瓜组培苗实验，利用牛角瓜花托取得，通过步骤一:牛角瓜外植体的取材；步骤二:培养基配制；步骤三:牛角瓜外植体材料灭菌；步骤四:无菌接种；步骤五:培养基培养；步骤六:炼苗驯化移栽。得到260株组培苗植株，在蔬菜地进行抚育成功。存活247株，7个月开花9个月结果，存活率约95%以上。
[0025]实施例3:
2012年在广西玉林林场种苗场，进行牛角瓜组培苗操作利用牛角瓜萌发新叶取得，通过步骤一:牛角瓜外植体的取材；步骤二:培养基配制；步骤三:牛角瓜外植体材料灭菌；步骤四:无菌接种；步骤五:培养基培养；步骤六:炼苗驯化移栽。得到420株组培苗植株，进行苗圃育苗成功。移栽在移栽在桉树林旁的山坡上存活371株，6个月开花8个月结果，存活率约83%以上。
[0026]综上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用来限定本发明的实施范围。即凡依本发明申请专利范围的内容所作的等效变化与修饰，都应为本发明的技术范畴。
【权利要求】
1.一种牛角瓜、白花牛角瓜、大牛角瓜的组培苗快速繁殖栽培方法，其特征在于:它包括如下步骤: 步骤一:牛角瓜外植体的取材 牛角瓜生长季节或新萌发的2-4厘米侧芽或顶芽或其他部位新芽或新萌发的茎段、茎尖、根系、叶片或新开花的花序、花瓣、子房、花药、花托及果实、种子； 步骤二:培养基配制 培养基A:牛角瓜诱导培养基 MS 600-700mg/L、6-BA 0.3-2 mg/L、NAA 0.3 mg/L、糖 25 mg/L、琼脂粉5 mg/L，用精密试纸或酸度计调整浓度达到PH6.2 ； 培养基B:牛角瓜丛生芽增殖培养基 MS 750 mg/L、6-BA 0.3-2 mg/L,NAA 0.2 mg/L、糖 25-35 mg/L、琼脂 5 mg/L，用精密试纸或酸度计调整浓度达到PH6.2 ； 培养基C:牛角瓜生根培养基 MS 700 mg/L>6-BA I mg/L、NAA 0.3 mg/L、糖 35 mg/L、琼脂粉 5 mg/L,用精密试纸或酸度计调整浓度达到PH6.2 ； 上述培养基中的溶剂为水或蒸馏水； 步骤三:牛角瓜外植体材料灭菌； 步骤四:无菌接种 将已消毒好的牛角瓜外植体材料，经切割或剪裁成小段或小块，放入培养基A中； 步骤五:培养基培养 培养基A培养15天-20天； 培养基B培养15天-20天； 培养基C培养20天-30天； 步骤六:炼苗驯化移栽。
2.根据权利要求1所述的牛角瓜、白花牛角瓜、大牛角瓜的组培苗快速繁殖栽培方法，其特征在于:所述的牛角瓜生根培养步骤为: Ca)将新梢基部浸入培养基C中处理4?8小时后取出24小时； (b)再浸入培养基C中处理2?4天。
3.根据权利要求1所述的牛角瓜、白花牛角瓜、大牛角瓜的组培苗快速繁殖栽培方法，其特征在于:所述的牛角瓜生根培养步骤为: Ca)将新梢基部浸入培养基C中处理6?8天； (b)切割粗壮的嫩枝在营养钵基质中直接生根；当牛角瓜增殖的芽体长至1-3厘米，可切下转入生根培养，芽体外观生长状态正常，接种后约30天可顺利生根；按照大苗生根，幼嫩苗进行增殖的原则进行，牛角瓜可顺利发根。
4.根据权利要求1所述的牛角瓜、白花牛角瓜、大牛角瓜的组培苗快速繁殖栽培方法，其特征在于:所述的牛角瓜生根培养步骤为牛角瓜瓶外生根及组培苗移栽管理: 将牛角瓜增殖瓶苗中切下诱根培养的壮苗，取出瓶并在苗基部切一新鲜切口将新梢基部浸入培养基C中处理4?8小时,洗净根系附着的培养基后直接插于苗床的基质中，大约经过25-35天，便开始长根，扦插发根率达95%以上。
5.根据权利要求1或2或3或4所述的牛角瓜、白花牛角瓜、大牛角瓜的组培苗快速繁殖栽培方法，其特征在于:所述的炼苗驯化移栽的具体做法是: (a)取出牛角瓜瓶苗，用自来水洗净根系附着的培养基，自然晾干水分后，假植于基质中，遮荫通风； (b)以河砂、泥炭土、珍珠岩以体积比2:1:1混合基质最适宜牛角瓜组培苗的过渡栽培；在培养基质中可掺入75%的百菌清可湿性粉剂200?500倍液，以进行灭菌处理； 同时基质或可以用椰子木屑、河砂、有机液肥以体积比5:1:1混合基质； (C)必须通过炼苗，根系生长良好优质的牛角瓜壮苗，可全年进行移栽，主要是温度适宜在10°C -20°C以上；有水分或水源或雨水即可； Cd)牛角瓜移栽苗的水肥管理: 当第一次栽下苗床后必须浇水，为定根水； 后期掌握不干不浇的原则，牛角瓜多数叶片肥厚，体内贮水多，相对耐干不耐湿，过于潮湿会出现叶片发黄脱落现象； 牛角瓜移栽苗施肥应薄肥勤施，成苗后提供人工种植。
6.根据权利要求1或2或3或4所述的牛角瓜、白花牛角瓜、大牛角瓜的组培苗快速繁殖栽培方法，其特征在于:所述的牛角瓜外植体材料灭菌包括: 取下的牛角瓜侧芽或顶芽或新萌发的2-4厘米侧芽或顶芽或其他部位新芽或新萌发的茎段、茎尖、根系、叶片、或新开花的花序、花瓣、子房、花药、花托及果实、种子等离体器官，进行灭菌处理；或 冼洁精洗涤或自来水清冼10 -20分钟或75%乙醇无菌水冲冼I次，或0.1%升汞10分钟-20分钟或无菌水冲冼6遍；或 使用升汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏水、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精等等化学药品进行配制灭菌处理； 凡是在人工控制条件下进行培养以获得再生完整牛角瓜、白花牛角瓜、大牛角瓜新植株技术与方法均为权利范围； 凡利用各地各国各种牛角瓜、白花牛角瓜、大牛角瓜组织培养操作主要步骤的或增加或减少步骤的: 牛角瓜的外植体-培养基配制-灭菌-接种-培养-驯化移栽一栽培牛角瓜、白花牛角瓜、大牛角瓜组培苗技术过程的技术与方法均为权利范围。
【文档编号】A01H4/00GK104255501SQ201410525036
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年10月9日 优先权日:2014年10月9日
【发明者】黄惠民 申请人:黄惠民