一种含脂肪酶和乳酸菌的复合饲料添加剂制备方法
【专利摘要】本发明提供一种含脂肪酶和乳酸菌的复合饲料添加剂及其制备方法，按重量百分比计，包含下列组分：饲用脂肪酶70%-85%，乳酸菌10%-20%，氯化钾1%-2%，柠檬酸钠1%-2%，乳酸钙 1%-2%，硫酸镁1%-2%，无水葡萄糖1%-2%。本发明具有如下有益效果：1.幼体动物（乳小猪）内源脂肪酶的分泌不足，促进脂肪的消化吸收；2.营养性腹泻，减少配方中对抗生素控制腹泻率的依赖，从而提高幼体日增重和采食量，提高饲料利用率；3.毛亮，改善肉品质和风味，提高养殖综合效益；4.胃肠道环境，增强动物机体免疫力，减少消化道疾病；5.氨气的排放，减少粪便臭味，改善养殖环境。
【专利说明】一种含脂肪酶和乳酸菌的复合饲料添加剂制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种饲料添加剂及其制备方法，尤其涉及一种着眼于改善脂肪消化率 和降低腹泻率，根据动物不同阶段的胃肠道特点而研发的一款极具针对性和功效性的饲用 脂肪酶和乳酸菌复合产品及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 随着现代养猪业的快速发展，猪的生产性能越来越高，如何在有效的配方容量里 配制出更高营养水平的饲粮，对饲料原料提出了更高的要求。在众多饲料营养中，能量显 得特别常见也特别重要。处于泌乳高峰期的母猪，当日粮所提供的能量不能满足其维持和 泌乳的需要时，机体的脂肪组织就会主动分解，甚至动员体蛋白以提供泌乳所需的能量， 这就对母猪后面繁殖性能的继续发挥产生了严重影响，导致母猪使用年限缩短。
[0003] 关注词料脂肪的消化率不仅能提高脂肪营养的效率，还能使饲料整体效能进一 步的提高。日粮中添加脂肪酶的价值在于弥补内源性脂肪酶分泌的不足，促进脂肪的消化 吸收，防止胃肠道疾病的发生，来达到以最低的饲料成本，使猪健康快速生长的目的，降 低饲料成本。目前，通过微生物发酵技术，已发生产出适用于饲料工业的脂肪酶，但相对 于非淀粉多糖酶制剂等的应用，脂肪酶尚属新品。迄今为止，也有不少学者对脂肪酶在动 物营养上的应用进行了研究，但是这些研究大多数是词养效果试验，对脂肪酶的作用机理 研究较少，而且以鱼方面的研究为多，对猪方面的研究则几乎是空白，
[0004] 因此很有必要对脂肪酶在母猪及断奶仔猪日粮中的应用做一系统的研究。另外一 方面，针对目前脂肪粉价格居高不下的形势，试验对脂肪酶及其在日粮中减少脂肪粉的应 用对母猪和断奶仔猪生产性能的影响进行了系统的研究，以为脂肪酶在猪词料中合理应 用提供试验依据，为养猪生产者们节约能量饲料，降低饲料成本，为提高养猪生产效益提 供合理建议。
【发明内容】
[0005] 为了解决以上技术问题，本发明依托领先的生物工程技术，着眼于改善脂肪消化 率和降低腹泻率，根据动物不同阶段的胃肠道特点而研发的一款极具针对性和功效性的饲 用脂肪酶和乳酸菌复合产品。它对提高脂肪的利用率、降低腹泻率、改善胃肠道环境及养殖 环境等方面具有明显的功效。
[0006] 本发明提供一种含脂肪酶和乳酸菌的复合饲料添加剂，按重量百分比计，包含下 列组分：
[0007] 饲用脂肪酶 70%-85%， 乳酸菌 10%-20%， 氯化钾 1%-2%， 柠檬酸钠 1%-2% , 乳酸钙 1%-2%， 硫酸镁 1%-2%, 无水葡萄糖 1°/。-2%。
[0008] 优选的，所述饲用脂肪酶为高活性的饲用脂肪酶，酶活至少为2000U/g。
[0009] 优选的，所述乳酸菌选自微囊化的复合乳酸菌，包括嗜酸乳杆菌、粪链球菌，每克 含菌量为l〇 8-l〇1Qcfu。
[0010] 本发明还提供一种制备用于饲用含脂肪酶和乳酸菌的复合饲料添加剂的方法，包 括以下几个步骤：
[0011] 步骤A :提取高活性饲用脂肪酶，其提取的工艺路线为：将发酵液用板框过滤去除 菌体，滤液进行超滤浓缩后加硫胺进行沉淀，再进行过滤，获得酶泥，采取低温流化干燥造 粒技术将酶泥干燥，即得高活性的干燥酶颗粒。
[0012] 其中，脂肪酶采用假丝酵母菌进行发酵，其发酵产酶工艺及脂肪酶提取为：20m3发 酵罐在通风量为0. 4?0. 8V/V/min、搅拌转速为180r/min、发酵温度为35°C、培养过程中添 加棉籽油和橄榄油复合物（1:1)以控制发酵终点，PH值为5.5?6.5的条件下，发酵72h， 成熟发酵酶活为4000U/mL。发酵液经过滤、超滤浓缩、硫铵沉淀、干燥造粒等过程制得颗粒 碱性脂肪酶成品，酶的提取总收率在70%以上，颗粒酶活力单位为4. OX 104U/g。
[0013] 步骤B :将乳酸菌放在培养基中进行培养活化，然后进行纯化培养，得到相应的浓 缩菌悬液，最后制备成微胶囊。
[0014] 步骤C :将饲用脂肪酶、乳酸菌、氯化钾、柠檬酸钠、乳酸钙、硫酸镁和无水葡萄糖 按所述比例混合均匀后，制备成预混剂。
[0015] 优选的，所述步骤B包括以下几个步骤：
[0016] 步骤a :将于-70°C保存的乳杆菌分别接种于MRS液体培养基中，37°C静置培养 24h，连续传代2-3次，使菌种完全活化；
[0017] 步骤b:所将活化好的乳杆菌，分别以体积比10%接种量接种于300mLMRS液体培 养中，37°C静置培养18h。将此培养液于4°C条件下4000g离心20min收集菌体，将收集的 菌泥用无菌生理盐水清洗，再分散于3mL无菌水中制成浓缩菌悬液；
[0018] 步骤c:将制备的菌悬液2mL加入到IOOmL海藻酸钠和黄原胶混合溶液中（比例 为2:1)，搅拌均匀，将料液用蠕动泵输送到雾化器中，将料液喷雾至0. IM CaCl2溶液中，搅 拌固化30min。用滤纸过滤收集湿微胶囊，用无菌水清洗2次后，-70°C冷冻过夜，然后真空 冷冻干燥制得微胶囊粉末。
[0019] 优选的，所述步骤c中，所述滤纸采用Whatman4号滤纸。
[0020] 本发明具有如下有益效果：
[0021] 1、补充幼体动物（乳小猪）内源脂肪酶的分泌不足，促进脂肪的消化吸收；
[0022] 2、降低营养性腹泻，减少配方中对抗生素控制腹泻率的依赖，从而提高幼体日增 重和采食量，提高饲料利用率；
[0023] 3、皮红毛亮，改善肉品质和风味，提高养殖综合效益；
[0024] 4、改善胃肠道环境，增强动物机体免疫力，减少消化道疾病；
[0025] 5、降低氨气的排放，减少粪便臭味，改善养殖环境。
【具体实施方式】
[0026] 下面对本发明的较优的实施例作进一步的详细说明：
[0027] 实施例1
[0028] 步骤A :提取制备高酶活的饲用脂肪酶。其提取的工艺路线为：将发酵液用板框 过滤去除菌体，滤液进行超滤浓缩后加硫胺进行沉淀，再进行过滤，获得酶泥，采取低温流 化干燥造粒技术将酶泥干燥，即得高活性的干燥酶颗粒。
[0029] 其中，脂肪酶采用假丝酵母菌进行发酵，其发酵产酶工艺及脂肪酶提取为：20m3发 酵罐在通风量为0. 4?0. 8V/V/min、搅拌转速为180r/min、发酵温度为35°C、培养过程中添 加棉籽油和橄榄油（1:1)以控制发酵终点，PH值为5. 5?6. 5的条件下，发酵72h，成熟 发酵酶活为4000U/mL。发酵液经过滤、超滤浓缩、硫铵沉淀、干燥造粒等过程制得颗粒碱性 脂肪酶成品，酶的提取总收率在70%以上，颗粒酶活力单位为4. OX 104U/g。
[0030] 步骤B :制备微囊化的复合乳杆菌，具体包括以下几个方面。
[0031] 乳杆菌的活化方法为：取少量_70°C保存的乳杆菌分别接种于MRS液体培养基中， 37°C静置培养24h，连续传代2-3次，使菌种完全活化。
[0032] 乳杆菌的浓缩菌悬液的制备方法为：将活化好的乳杆菌分别以体积比10%接种 量接种于300mL MRS液体培养中，37°C静置培养18h。将此培养液于4°C条件下4000g离心 20min收集菌体，将收集的菌泥用无菌生理盐水清洗2次，再分散于3mL无菌水中制成浓缩 菌悬液，备用。
[0033] 乳杆菌的微胶囊化的制备方法为：制备的菌悬液2mL加入到IOOmL海藻酸钠和黄 原胶混合溶液中（体积比例为2:1)，搅拌均匀，将料液用蠕动泵输送到雾化器中，将料液喷 雾至0. IM CaCl2溶液中，搅拌固化30min。用Whatman4号滤纸过滤收集湿微胶囊。用无菌 水清洗2次后，-70°C冷冻过夜，然后真空冷冻干燥制得微胶囊粉末。
[0034] 步骤C :将按重量百分比：饲用脂肪酶70%、乳酸菌20%、氯化钾2%、柠檬酸钠 2%、乳酸钙2%、硫酸镁2%和无水葡萄糖2%按比例混合均匀后，制备成预混剂。
[0035] 实施例2
[0036] 步骤A :脂肪酶采用假丝酵母菌，其发酵产酶工艺及脂肪酶提取为：20m3发酵罐在 通风量为〇. 4?0. 8V/V/min、搅拌转速为180r/min、发酵温度为35°C、培养过程中流加棉籽 油和橄榄油（1:1)以控制发酵终点，PH值为5. 5?6. 5的条件下，发酵72h，成熟发酵酶 活为4000U/mL。发酵液经过滤、超滤浓缩、硫铵沉淀、干燥造粒等过程制得颗粒碱性脂肪酶 成品，酶的提取总收率在70%以上，颗粒酶活力单位为4. OX 104U/g。
[0037] 步骤B :制备微囊化的复合乳杆菌，具体包括以下几个方面。
[0038] 乳杆菌的活化方法为：取少量_70°C保存的乳杆菌分别接种于MRS液体培养基中， 37°C静置培养24h，连续传代2-3次，使菌种完全活化。
[0039] 乳杆菌的浓缩菌悬液的制备方法为：将活化好的乳杆菌以体积比10%接种量接 种于300mL MRS液体培养中，37°C静置培养18h。将此培养液于4°C条件下4000g离心20min 收集菌体，将收集的菌泥用无菌生理盐水清洗2次，再分散于3mL无菌水中制成浓缩菌悬 液，备用。
[0040] 乳杆菌的微胶囊化的制备方法为：制备的菌悬液2mL加入到IOOmL海藻酸钠和黄 原胶混合溶液中（体积比例为2:1)，搅拌均匀，将料液用蠕动泵输送到雾化器中，将料液喷 雾至0. IM CaCl2溶液中，搅拌固化30min。用Whatman4号滤纸过滤收集湿微胶囊。用无菌 水清洗2次后，-70°C冷冻过夜，然后真空冷冻干燥制得微胶囊。
[0041] 步骤C :将按重量百分比：85%饲用脂肪酶、10%乳酸菌、1%氯化钾、1%柠檬酸 钠、1 %乳酸钙、1 %硫酸镁和1 %无水葡萄糖按比例混合均匀后，制备成预混剂。
[0042] 实施例3
[0043] 1.供试动物：21日龄断奶仔猪180头，随机分成2个处理组，每个处理5个重复， 每个重复18头仔猪，处理A组为对照组，B组为采用实施例1所制备的预混剂的试验组（添 加 I. Okg/T饲料）。C组为采用实施例2所制备的预混剂的试验组（添加 I. Okg/T饲料）。
[0044] 2.试验期为42天。
[0045] 3.测定指标：日增重；料肉比；腹泻率；死淘率。
[0046] 4.试验如表1所示
[0047] 表 1
[0048]
【权利要求】
1. 一种含脂肪酶和乳酸菌的复合饲料添加剂，其特征在于，按重量百分比计，包含下 列组分： 饲用脂肪酶 70%-85%， 乳酸菌 10%-20%， 氯化钾 1%-2%， 柠檬酸钠 1%-2%， 乳酸钙 1%-2%， 硫酸镁 1%-2%， 无水甸萄糖 1%-2%。
2. -种含脂肪酶和乳酸菌的复合饲料添加剂，其特征在于，所述饲用脂肪酶为高活性 的饲用脂肪酶，酶活至少为2000U/g。
3. -种含脂肪酶和乳酸菌的复合饲料添加剂，其特征在于，所述乳酸菌选自微囊化的 复合乳酸菌，包括嗜酸乳杆菌、粪链球菌，每克含菌量为l〇 8-l〇1(l cfu。
4. 一种制备如权利要求1所述的含脂肪酶和乳酸菌的复合饲料添加剂的方法，其特征 在于，包括以下几个步骤： 步骤A :提取高活性饲用脂肪酶； 步骤B :将乳酸菌放在培养基中进行培养活化，然后进行纯化培养，得到相应的浓缩菌 悬液，最后制备成微胶囊粉末； 步骤C :将饲用脂肪酶、乳酸菌、氯化钾、柠檬酸钠、乳酸钙、硫酸镁和无水葡萄糖按所 述比例混合均匀后，制备成预混剂。
5. 如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤B包括以下几个步骤： 步骤a:将于-70°C保存的乳杆菌分别接种于MRS液体培养基中，37°C静置培养24h， 连续传代2-3次，使菌种完全活化； 步骤b:所将活化好的乳杆菌以体积比10%接种量接种于300mL MRS液体培养中， 37°C静置培养18h;将此培养液于4°C条件下4000g离心20min收集菌体，将收集的菌 泥用无菌生理盐水清洗，再分散于3mL无菌水中制成浓缩菌悬液； 步骤c:将制备的菌悬液2mL加入到100mL海藻酸钠和黄原胶混合溶液中（2::1)， 搅拌均匀，将料液用蠕动泵输送到雾化器中，将料液喷雾至0.1M CaCl2溶液中，搅拌固化 30min;用滤纸过滤收集湿微胶囊，用无菌水清洗2次后，-70°C冷冻过夜，然后真空冷冻干 燥制得微胶囊粉末。
6. 如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤c中，所述滤纸采用Whatman 4号 滤纸。
【文档编号】A23K1/175GK104273342SQ201410532300
【公开日】2015年1月14日 申请日期:2014年10月10日 优先权日:2014年10月10日
【发明者】李美娣, 武力, 涂玉蓉, 王昌库 申请人:广州华农大实验兽药有限公司