一种复合乳酸菌微生物肥料及其制备与应用
【专利摘要】本发明公开了一种复合乳酸菌微生物肥料，属于肥料技术领域。该生物肥料由四株植物乳杆菌P?8、PB?1、PY?1和SCI?02发酵制备而来。本发明采用乳酸菌混菌发酵，特殊的组方及配比能够提供高整个发酵体系生产苯乳酸的能力，并进一步在农作物种植过程中起到降低植株感染病害的风险，延缓或减轻病害加重进程；使植株增产，增加甜度，改善口感的作用；提高土壤中有益微生物，抑制土传病害真菌，改善土壤微生态环境；以及提高作物对恶劣环境的抗逆性的作用。CGMCC No.1193120151224
【专利说明】
一种复合乳酸菌微生物肥料及其制备与应用
技术领域：
[0001 ]本发明属于肥料技术领域，具体涉及一种复合乳酸菌微生物肥料的制备及应用。
【背景技术】：
[0002] 乳酸菌作为农业有益微生物和植物促生长细菌中的成员，是自然环境中普遍存在 的一种安全且可食用微生物，在农产品种植及其质量安全中发挥着独有的优势。随着对乳 酸菌抗致病性真菌特性研究的深入和乳酸菌降解重金属、农药残留等安全性方面研究的探 索，减少农药和化学肥料种植的植物性农产品受到人们越来越多的关注。微生态制剂与土 壤中固有的微生物协同作用可抑制植物地下部分致病性真菌、细菌病原体和线虫，甚至地 上食草性昆虫对植物造成的损害。农业有益微生态制剂是由乳酸菌、酵母菌、光合细菌和放 线菌等组成的复合益生菌制剂。该制剂具有促进植物健康生长、增加植物产量和光合速率、 加速土壤中有机质分解和营养物质的释放、利于植物吸收、减少化学药剂使用、改善土壤质 量等作用。
[0003] 乳酸菌作为益生菌，是植物促生长细菌中的一类，是公认的安全级(GRAS)菌株，研 究发现，植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌和德氏乳杆菌是微生物肥料生产中常用的 乳酸菌种。苹果中存在乳杆菌属、片球菌属和明串珠菌属等乳酸菌。葡萄表面的乳酸菌约为 100CFU/g，随着贮运过程的延长而逐渐降低。自不同植物和农产品中分离鉴定乳酸菌研究 发现，乳酸菌是最大的细菌种群(约占30%)，其中乳球菌属是优势菌属。乳酸菌应用于植物 性农产品中具有抑制致病菌、腐败菌的增殖，降解重金属、农药残留，减少农药和化学肥料 的使用等诸多优点，而越来越多的被人们所重视。
[0004] 本发明针对上述课题，对分离自自然植物表面和根际中的植物乳杆菌，进行产抑 菌物质、抑制腐败病真菌和致病菌等一系列试验，筛选出1株具有抑制植物致病真菌和常见 食物污染病原菌的植物乳杆菌L.plantarum SCI-02。然后与具有良好腐败真菌抑制能力的 3株乳酸菌（L.plantarum P_8、L.plantarum PB_l、L.plantarum PY-1)混合发酵，制备成复 合乳酸菌微生态肥料。研究复合乳酸菌微生态肥料在改善土壤微生态环境、促进植物生长、 调控植物病害、增强植物抗逆性及改善植物性农产品品质等方面的应用，旨在促进乳酸菌 在农产品中的应用发展，并提高农产品质量及其食用安全，以期更好的提高人们的健康水 平。
【发明内容】
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[0005] 为了解决上述问题本发明提供一种复合乳酸菌微生物肥料，所述复合乳酸菌微生 物肥料的制备方法如下：
[0006] (1)将四株植物乳杆菌P-8、PB-1、PY-1和SCI-02按总接种量为7%接入发酵培养基 进行发酵，发酵条件如下：发酵罐初始pH为7.0，发酵温度为30°C，恒pH 5.7-5.9，流加碱液 4_5h后，自然发酵至pH 4.3-4.7后，流加碱液维持发酵液恒pH 5.7-5.9至发酵液自身pH不 变化时为发酵终点；
[0007] (2)发酵完成后，将复合乳酸菌发酵液与无菌处理后的蔗糖和大豆粉混合均匀即 得复合乳酸菌微生物肥料；
[0008] 所述 P-8、PB-1、PY-1 和 SCI-02 的接种比例为：1:1:1:2;
[0009] 所述发酵培养基组成如下：大豆蛋白粉20-40g，蔗糖40-80g，柠檬酸0.7-1.0g， K2HP〇4 l_4g，柠檬酸钠8-12g，吐温-80 l-3g，蒸馏水lL，pH 7.0;
[0010] 所述蔗糖的添加量与发酵液质量体积比为0.1% ;
[0011] 所述大豆粉的添加量与发酵液质量体积比为0.1 % ;
[0012] 所述植物乳杆菌P-8,保藏编号CGMCC No.6312;
[0013] 所述植物乳杆菌PB-1，保藏编号CGMCC No.5399;
[0014] 所述植物乳杆菌PY-1，保藏编号CGMCC No.5358
[0015] 所述植物乳杆菌SCI-02具体为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum)SCI-02， 该菌株已于2015年12月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址 为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号 CGMCC No.11931；
[0016] 所述SCI-02菌株由抑制植物致病真菌(寄生曲霉、黄曲霉、娄地青霉、番茄早疫、甜 瓜枯萎、苹果炭疽、甜瓜疫霉)和肠道致病细菌(大肠杆菌、鼠伤沙门氏菌、弗氏志贺氏菌、金 黄色葡萄球菌、单胞李斯特氏菌)筛选而来，且能够代谢高产广谱抑菌物质一苯乳酸；
[0017] 所述P-8、PB-1、PY-1菌株对常见腐败霉菌具有良好的控制效果。
[0018] 表1 L.plantarum SCI-02真菌抑制试验
[0019]
[0020] 表2 L.plantarum SCI-02致病细菌抑制试验
[0021]
[0022]本发明提供的技术方案二是将上述复合乳酸菌微生物肥料应用于农作物生产中， 具体如下：每15-30天，叶面喷施按照100-200ml/亩/次(将肥料100倍稀释后进行使用），根 部浇灌按照500-1000ml/亩/次(将肥料100倍稀释后进行使用）。
[0023] 有益效果：
[0024] 1、本发明所提供的微生态复合肥料中添加有L.plantarum SCI-02,该菌株具有良 好的抑菌性能，并且高产苯乳酸。
[0025] 2、本发明采用乳酸菌混菌发酵，特殊的组方及配比能够提供高L. plantarum SCI- 02及整个发酵体系生产苯乳酸的能力。
[0026] 3、本发明提供的微生态复合肥料a.具有降低植株感染病害的风险，对植株具有保 护作用，可延缓或减轻病害加重进程;b.具有使植株增产，增加甜度(含糖量增高），改善口 感的作用;c.有利于提高土壤中有益微生物，抑制土传病害真菌，改善土壤微生态环境的效 果:减少土壤中真菌数量;增加土壤中放线菌、芽孢杆菌和细菌总数增加(分别增加6.88%、 10.70 %和46.06 % ); d.提高作物对恶劣环境的抗逆性。
【附图说明】
[0027] 图1:复合乳酸菌微生物肥料能够降低黄瓜植株感染病害的风险
[0028] 图2:复合乳酸菌微生物肥料能够延缓黄瓜植株病害加重进程
[0029] 图3:复合乳酸菌微生物肥料能够预防、缓解黄瓜植株病害
[0030] 图4:复合乳酸菌微生物肥料能够提高西红柿产量
[0031] 图5:复合乳酸菌微生物肥料能够提高西红含糖量、改善西红柿口感品质和土壤理 化性状
[0032]图6:复合乳酸菌微生物肥料能够显著改善西红植株根系发育生长
[0033]图7:复合乳酸菌微生物肥料能够显著促进西红柿植株生长
[0034]图8:复合乳酸菌微生物肥料能够改善土壤微生态环境
[0035]图9:复合乳酸菌微生物肥料能够促进土壤中有机质分解和氮磷养分释放
【具体实施方式】：
[0036]下面结合实施例对本发明作进一步说明；以下实施例仅为说明性的，本发明并不 受这些实施例的限制。
[0037] 下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法。
[0038] 复合乳酸菌（L.plantarum P-8、L.plantarum PB-l、L.plantarum PY-1 和 L.plantarum SCI-02)混合发酵制备微生物肥料及其应用。
[0039]实施例1、试验方法 [0040] 1.1菌种活化
[0041 ]冷冻干燥保存的菌株L.plantarum P_8、L.plantarum PB_l、L.plantarum PY-1 和 L·plantarum SCI-02菌种接种于MRS液体培养基中，37°C恒温培养18h，传代2次。
[0042] 1.2活菌计数
[0043] -般采用倾注平板计数法，操作步骤为:依据国标方法，摇匀发酵液，吸取lmL发酵 液置于9mL的无菌生理盐水中，进行10倍稀释，随后依次稀释至所需梯度。将最后稀释梯度 试管稀释振匀后，吸取lmL稀释液倾注至平板中，到入培养基，摇匀，置凝固，于37 °C培养箱 培养48h。平板分别做两个梯度，每个梯度两个平行。
[0044] 测定乳酸菌活菌数培养基:MRS固体培养基
[0045] 1.3pH测定:使用精确pH计直接测定发酵液pH值
[0046] 1.4苯乳酸含量测定（LC-MS法）：LC条件：色谱柱BEH C18;流0.4ml/min;柱温:45 °C ;进样量:4μ1;流动相A:水+0.1 %甲酸;流动相B:乙腈+0.1 %甲酸；梯度洗脱3min JS条 件:正离子模式、ESI离子源，锥孔电压20V;碰撞能4V。
[0047] 实施例2接种比例对混菌发酵的影响
[0048] 研究不同接种比例，对菌种混合发酵的影响。
[0049]培养基配方如下：大豆蛋白粉30g，蔗糖60g，柠檬酸0.8g，K2HP〇4 2g，柠檬酸钠10g， 吐温-80 2g，蒸馏水lL，pH 7.0;
[0050] 发酵罐初始pH:为7.0,发酵温度为30°C，恒pH 5.7-5.9,流加碱液维持发酵液恒pH 5.7-5.9至发酵液自身pH不再变化时为发酵终点；
[0051] a·当L·plantarum P-8、L·plantarum PB-1、L·plantarum PY-1和L·plantarum SCI-02的总接种量为6% (接种比例1:1:1:1)，30°C，80r/min发酵，测定乳酸菌活菌数为 0.72X1010CFU/mL；
[0052] b·当L·plantarum P-8、L·plantarum PB-1、L·plantarum PY-1和L·plantarum SCI-02的总接种量为6% (接种比例2:1:1:1)，30°C，80r/min发酵，测定乳酸菌活菌数为 0.84X1010CFU/mL；
[0053] c·当L·plantarum P-8、L·plantarum PB-1、L·plantarum PY-1和L·plantarum SCI-02的总接种量为7% (接种比例1:1:1:2)，30°C，80r/min发酵，测定乳酸菌活菌数为 1.03X1010CFU/mL；
[0054] 依据实验结果，当L.plantarum P-8、L.plantarum PB-l、L.plantarum PY-1 和 L.plantarum SCI-02的总接种量为7% (接种比例1:1:1: 2)，利于复合乳酸菌微生物肥料的 发酵。
[0055] 实施例3发酵工艺对发酵液中苯乳酸的影响
[0056] 研究不同发酵工艺，对混合发酵液中抑菌物质(苯乳酸)的影响：
[0057]发酵培养基：大豆蛋白粉30g，蔗糖60g，柠檬酸0.8g，K2HP04 2g，柠檬酸钠10g，吐 温-80 2g，蒸馈水lL，pH T.OeL.plantarum P-8、L.plantarum PB-l、L.plantarum PY-1 和 L.plantarum SCI-02的总接种量为7% (接种比例1:1:1:2);
[0058] a.发酵罐初始pH为7.0，发酵温度为30°C，恒pH 5.9，全程流加碱液至发酵液自身 pH不再变化时为发酵终点；取样检测发酵液中的广谱抑菌物质一苯乳酸含量为25.7mg/L， 活菌数为1.10 X 101()CFU/mL;
[0059] 其他条件不变，接入菌种改为L.plantarum SCI-02接种量为7%时，实验结果为： 苯乳酸含量为8.6mg/L，活菌数为1.01 X 101()CFU/mL。
[0060] 其他条件不变，接入菌种改为L.plantarum PY-1接种量为7%时，实验结果为:苯 乳酸含量为3 · 2mg/L，活菌数为0 · 98 X 101QCFU/mL
[0061 ]其他条件不变，接入菌种改为L.plantarum P-8接种量为7%时，实验结果为:苯乳 酸含量为8 · 3mg/L，活菌数为1 · 21 X 101()CFU/mL
[0062] 其他条件不变，接入菌种改为L.plantarum ro-1接种量为7%时，实验结果为:苯 乳酸含量为3 · 7mg/L，活菌数为0 · 87 X 101()CFU/mL
[0063] b.发酵罐初始pH为7.0,发酵温度为30°C，恒pH 5.9,流加碱液7h后，自然发酵至pH 不再变化时为止(约PH4.2-4.5)视为发酵终点；取样检测发酵液中的广谱抑菌物质一苯乳 酸含量为 30 · 6mg/L，活菌数为 0 · 72 X 101QCFU/mL;
[0064] 其他条件不变，接入菌种改为L.plantarum SCI-02接种量为7%时，实验结果为： 苯乳酸含量为1 〇. 3mg/L，活菌数为0.71 X 101()CFU/mL;
[0065] 其他条件不变，接入菌种改为L.plantarum ΡΥ-l种量为7%时，实验结果为:苯乳 酸含量为 5 · 2mg/L，活菌数为 0 · 78 X 101()CFU/mL;
[0066] 其他条件不变，接入菌种改为L.plantarum P-8种量为7%时，实验结果为:苯乳酸 含量为8 · lmg/L，活菌数为0 · 65 X 101()CFU/mL;
[0067] 其他条件不变，接入菌种改为L.plantarum ro-1种量为7%时，实验结果为:苯乳 酸含量为 4 · 7mg/L，活菌数为 0 · 72 X 101()CFU/mL。
[0068] c.发酵罐初始pH为7.0，发酵温度为30°C，恒pH 5.9，流加碱液4.5h后，自然发酵至 pH 4.5后，流加碱液维持发酵液恒pH 5.9至发酵液自身pH不再变化时为发酵终点。取样检 测发酵液中的广谱抑菌物质一苯乳酸含量为49.2mg/L，活菌数为1.06X 101()CFU/mL;
[0069] 其他条件不变，接入菌种改为L.plantarum SCI-02种量为7%时，实验结果为：苯 乳酸含量为15 · 3mg/L，活菌数为0 · 96 X 101()CFU/mL;
[0070] 其他条件不变，接入菌种改为L.plantarum PY-1种量为7%时，实验结果为:苯乳 酸含量为1〇.111^/1，活菌数为0.78\101(^?1]/1^;
[0071]其他条件不变，接入菌种改为L.plantarum P-8种量为7%时，实验结果为:苯乳酸 含量为 12 · 4mg/L，活菌数为 1 · 01 X 101QCFU/mL;
[0072]其他条件不变，接入菌种改为L.plantarum ro-1种量为7%时，实验结果为:苯乳 酸含量为 9 · 8mg/L，活菌数为 0 · 79 X 101()CFU/mL。
[0073] d.发酵罐初始pH为7.0，发酵温度为30°C，自然发酵24h为终点。取样检测发酵液中 的广谱抑菌物质一苯乳酸含量为50. lmg/L，活菌数为0.50 X 101()CFU/mL;
[0074] 其他条件不变，接入菌种改为L.plantarum SCI-02种量为7%时，实验结果为：苯 乳酸含量为12.5mg/L，活菌数为0.45 X 101QCFU/mL;
[0075] 其他条件不变，接入菌种改为L.plantarum PY-1种量为7%时，实验结果为:苯乳 酸含量为 12 · lmg/L，活菌数为0 · 56 X 101QCFU/mL;
[0076] 其他条件不变，接入菌种改为L.plantarum P-8种量为7%时，实验结果为:苯乳酸 含量为 9 · 4mg/L，活菌数为 0· 42 X 101QCFU/mL;
[0077] 其他条件不变，接入菌种改为L.plantarum ro-1种量为7%时，实验结果为:苯乳 酸含量为1〇.111^/1，活菌数为0.51\101(^?1]/111匕
[0078] 结论：综上所述，经不同接种比例，不同发酵工艺研究，考虑4株乳酸菌混合发酵 时，对乳酸菌活菌数和抑菌物质产量的影响，综合优选:L.plantarum P-8、L.plantarum PB-1、L.plantarum ΡΥ-1和L.plantarum SCI-02的总接种量为7% (接种比例1:1:1:2) [0079] 发酵罐初始pH为7.0,发酵温度为30°C，恒pH 5.7-5.9,流加碱液4-5h后，自然发酵 至pH 4.3-4.7后，流加碱液维持发酵液恒pH 5.7-5.9至pH不再变化时为发酵终点，为最佳 发酵工艺。
[0080]实施例4复合乳酸菌微生物肥料的制备：
[0081 ] (1)将四株植物乳杆菌P-8、PB-1、PY-1和SCI-02按总接种量为7%，接种比例为：1: 1:1:2，接入发酵培养基进行发酵；
[0082]发酵条件如下：发酵罐初始pH:为7.0，发酵温度为30 °C，恒pH 5.7-5.9，流加碱液 4h后，自然发酵至pH 4.3-4.7后，流加碱液维持发酵液恒pH 5.7-5.9至发酵液自身pH不再 变化时为发酵终点；
[0083] 发酵培养基组成如下:大豆蛋白粉20g，蔗糖40g，柠檬酸0.7g，K2HP〇4 lg，柠檬酸钠 8g，吐温-80 lg，蒸馏水lL，pH 7.0;
[0084] (2)发酵完成后，将复合乳酸菌发酵液与无菌处理后的蔗糖和大豆粉混合均匀后 包装冷藏即得复合乳酸菌微生物肥料;蔗糖的添加量与发酵液质量体积比为〇. 1 % ;大豆粉 的添加量为0.1%。
[0085] 实施例5复合乳酸菌微生物肥料的制备：
[0086] (1)将四株植物乳杆菌P-8、PB-1、PY-1和SCI-02按总接种量为7%，接种比例为：1: 1:1:2，接入发酵培养基进行发酵；
[0087]发酵条件如下：发酵罐初始pH:为7.0，发酵温度为30 °C，恒pH 5.7-5.9，流加碱液 5h后，自然发酵至pH 4.3-4.7后，流加碱液维持发酵液恒pH 5.7-5.9至pH不在变化时为酵 餘占. ，-、，
[0088] 发酵培养基组成如下:大豆蛋白粉40g，蔗糖80g，柠檬酸1.0g，K2HP〇4 4g，柠檬酸钠 12g，吐温-80 3g，蒸馏水lL，pH 7.0;
[0089] (2)发酵完成后，将复合乳酸菌发酵液与无菌处理后的蔗糖和大豆粉混合均匀后 包装冷藏即得复合乳酸菌微生物肥料;蔗糖的添加量与发酵液质量体积比为〇. 1 % ;大豆粉 的添加量为0.1%。
[0090] 实施例6复合乳酸菌微生物肥料的制备：
[0091] (1)将四株植物乳杆菌P-8、PB-1、PY-1和SCI-02按总接种量为7%，接种比例为：1: 1:1:2，接入发酵培养基进行发酵；
[0092]发酵条件如下：发酵罐初始pH:为7.0，发酵温度为30 °C，恒pH 5.7-5.9，流加碱液 4.5h后，自然发酵至pH 4.3-4.7后，流加碱液维持发酵液恒pH 5.7-5.9至pH不在变化时为 发酵终点；
[0093]发酵培养基组成如下:大豆蛋白粉30g，蔗糖60g，柠檬酸0.8g，K2HP〇4 2g，柠檬酸钠 l〇g，吐温-80 2g，蒸馏水lL，pH 7.0;
[0094] (2)发酵完成后，将复合乳酸菌发酵液与无菌处理后的蔗糖和大豆粉混合均匀后 包装冷藏即得复合乳酸菌微生物肥料;蔗糖的添加量与发酵液质量体积比为〇. 1 % ;大豆粉 的添加量为0.1%。
[0095] 实施例7复合乳酸菌微生物肥料的应用
[0096] a.将实施例6所得复合乳酸菌微生态肥料应用于黄瓜病害抑制
[0097] 试验分组:黄瓜植株随机分为试验组和对照组，每组各9株。
[0098] 试验方法:试验组黄瓜每隔15天叶面喷施和根部灌溉复合乳酸菌微生物肥料一 次。叶面喷施按照150ml/亩/次(将肥料100倍稀释后进行使用），根部浇灌1000ml/亩/次(将 肥料100倍稀释后进行使用）。
[0099] 试验观察:每隔15d观察记录黄瓜植株的病害发生情况和植株的生长情况。
[0100] 试验管理:试验全程不使用任何农药和抗菌类物质，不施用任何肥料，试验组和对 照组黄瓜管理情况相同。
[0101] 试验结果：
[0102] 复合乳酸菌微生物肥料能够降低黄瓜植株病害感染的几率和延缓病害加重进程， 使用15d后降低植株染病几率33.4%，使用30d后降低病害程度25%。复合乳酸菌微生物肥 料具有降低黄瓜植株感染病害的风险，对黄瓜植株具有保护作用；可延缓或减轻黄瓜植株 病害加重进程，对黄瓜植株具有保护作用。见图1 -3。
[0103] b.将实施例5所得复合乳酸菌微生态肥料应用于西红柿增产
[0104] 试验分组:西红柿随机分为试验组和对照组，每组各0.5亩。
[0105] 试验方法:试验组西红柿每隔15天叶面喷施和根部灌溉复合乳酸菌微生物肥料一 次。叶面喷施按照150ml/亩/次(将肥料100倍稀释后进行使用），根部浇灌1000ml/亩/次(将 肥料100倍稀释后进行使用）。
[0106] 试验观察:每天观察记录西红柿植株的的生长情况和产量。
[0107] 试验管理:试验全程不使用任何农药和抗菌类物质，试验组和对照组西红柿管理 情况相同。
[0108]试验结果：
[0109] 乳酸菌肥料能够显著促进西红柿根系发育，加快植株生长，提高西红柿单株平均 产量，试验组较对照组株产提高14.34%。试验后对西红柿种植土壤和西红柿的含糖量进行 了比较发现:试验组pH6.57，显著低于对照组(pH6.97)，蔬菜生长最佳pH为6.5-6.8，使用乳 酸菌肥料对土壤具有一定的改善效果。此外，使用乳酸菌肥料后，西红柿的甜度(含糖量)增 高，口感改善。使用乳酸菌肥料对西红柿的品质具有改善作用。见图4-7.
[0110] c.将实施例4所得复合乳酸菌微生态肥料应用于土壤微生态环境和肥效的改善
[0111] 试验分组:西红柿、黄瓜随机分为试验组和对照组，每组各1亩。
[0112] 试验方法:试验组每隔15天叶面喷施和根部灌溉复合乳酸菌微生物肥料一次。叶 面喷施按照150ml/亩/次（将肥料100倍稀释后进行使用），根部浇灌700ml/亩/次(将肥料 100倍稀释后进行使用）。
[0113] 土壤检测：试验前期和后期采集试验组和对照组土壤样本，检测土壤中的微生物 含量及肥力指标。
[0114] 试验管理:试验全程不使用任何农药和抗菌类物质，试验组和对照组西红柿管理 情况相同。
[0115] 试验结果：
[0116]西红柿种植使用复合乳酸菌微生物肥料后，土壤微生物分析发现:土壤中真菌数 量显著减少（减少28.57%);土壤中放线菌、芽孢杆菌和细菌总数增加（分别增加6.88%、 10.70%和46.06% )。复合乳酸菌微生物肥料有利于提高土壤中有益微生物，抑制土传病害 真菌，改善土壤微生态环境。
[0117]复合乳酸菌微生物肥料能够显著减少土壤中有机质（指:土壤中含碳的有机化合 物)含量(减少27.31%)，速效磷含量(减少33.67%)和碱解氮含量(减少27.68%)。有利于 促进土壤中有机质分解和氮磷养分释放，促进植物对营养元素的吸收。见图8-9。
[0118] d.将实施例6所得复合乳酸菌微生态肥料应用于植物抗逆性试验
[0119] 试验分组:西红柿和油菜植株随机分为试验组和对照组，每组各1亩。
[0120] 试验方法:试验组每隔15天叶面喷施和根部灌溉复合乳酸菌微生物肥料一次。叶 面喷施按照150ml/亩/次(将肥料100倍稀释后进行使用），根部浇灌1000ml/亩/次(将肥料 100倍稀释后进行使用）。
[0121 ]试验观察:每天观察记录西红柿和油菜植株的的生长情况。
[0122] 试验管理:试验全程不使用任何农药和抗菌类物质，不施用任何肥料，试验组和对 照组管理情况相同。
[0123] 试验结果：
[0124] 1)油菜试验发现:冬季2月份低温时，由于温室南边1米范围内温度较低，与温室内 北面种植的油菜，植株生长差异显著。对照组温室南边1米范围内的油菜平均株高为 12. lcm，北面油菜平均株高为14.8cm(两者相差2.7cm，差异显著）；试验组温室南边1米范围 内的油菜平均株高为14.2cm，北面油菜平均株高为14.7cm(两者相差0.5cm，差异不显著）。 喷施复合乳酸菌微生物肥料能够增强油菜对低温的抗性。
[0125] 2)西红柿实验发现:夏季8月份高温时，温室温度高于38度时，实验区的番茄叶片 正常，对照区的叶片出现避热现象，叶片上卷。说明喷施复合乳酸菌微生物肥料能够增强西 红柿对高温的抗性。
[0126] 结果分析:复合乳酸菌微生物肥料能够显著促进促进西红柿植株地上部分(株高、 地径)的生长和根系发育，提高西红柿平均单株产量，试验组较对照组株株产提高14.34%。 复合乳酸菌微生物肥料有利于提高土壤中有益微生物，抑制土传病害真菌，改善土壤微生 态环境。复合乳酸菌微生物肥料有利于促进土壤中有机质分解和氮磷养分释放，促进植物 对营养元素的吸收。。此外，使用乳酸菌肥料后，植物对高温、低温和病害的抗性得到增强， 有利于植株的健康生长。此外，西红柿的甜度(含糖量)增高，口感改善，对西红柿的品质具 有改善作用。见附图4-9。
[0127] 结论：
[0128] 4株乳酸菌经复合发酵制得发酵液，乳酸菌活菌数达到1.06X 101QCFU/mL以上。混 合发酵液与载体混合均匀后制成复合乳酸菌微生物肥料。
[0129] 复合乳酸菌微生物肥料能够显著促进植物地上部分(株高、地径)的生长和根系发 育，提高作物产量。复合乳酸菌微生物肥料有利于提高土壤中有益微生物，抑制土传病害真 菌，改善土壤微生态环境。复合乳酸菌微生物肥料有利于促进土壤中有机质分解和氮磷养 分释放，促进植物对营养元素的吸收。。此外，使用乳酸菌肥料后，植物对高温、低温和病害 的抗性得到增强，有利于植株的健康生长。此外，果实甜度(含糖量)增高，口感改善，对品质 具有改善作用。
【主权项】
1. 一种复合乳酸菌微生物肥料，其特征在于，所述复合乳酸菌微生物肥料的制备方法 如下： (1) 将四株植物乳杆菌P-8、PB-1、PY-1和SCI-02按总接种量为7%接入发酵培养基进行 发酵，发酵条件如下：发酵罐初始pH为7.0，发酵温度为30°C，恒pH 5.7-5.9，流加碱液4-5h 后，自然发酵至pH 4.3-4.7后，流加碱液维持发酵液恒pH 5.7-5.9至发酵液自身pH不变化 时为发酵终点； (2) 发酵完成后，将复合乳酸菌发酵液与无菌处理后的蔗糖和大豆粉混合均匀即得复 合乳酸菌微生物肥料。2. 如权利要求1所述的一种复合乳酸菌微生物肥料，其特征在于，所述植物乳杆菌SCI-02具体为植物乳杆菌(LactobaciIlus plantarum)SCI_02，保藏编号CGMCC No · 11931。3. 如权利要求1所述的一种复合乳酸菌微生物肥料，其特征在于，所述植物乳杆菌P-8、 PB-I、PY-1 和SCI-02的接种比例为：1: 1:1: 2。4. 如权利要求1所述的一种复合乳酸菌微生物肥料，其特征在于，所述发酵培养基组成 如下：大豆蛋白粉20-40g，蔗糖40-80g，柠檬酸0 · 7-1 · Og，K2HPO4 l_4g，柠檬酸钠8-12g，吐 温-80 l-3g，蒸馏水IUpH 7.0。5. 如权利要求1所述的一种复合乳酸菌微生物肥料，其特征在于，所述蔗糖的添加量与 发酵液质量体积比为〇. 1 % ;所述大豆粉的添加量与发酵液质量体积比为〇. 1 %。6. 权利要求1所述复合乳酸菌微生物肥料在农作物种植过程中的应用。7. 如权利要求6所述的复合乳酸菌微生物肥料在农作物种植过程中的应用，其特征在 于，每15-30天，将肥料100倍稀释后，叶面喷施按照100-200ml/亩/次使用，根部浇灌按照 500-1000ml/亩 / 次使用。
【文档编号】C05F11/08GK105948838SQ201610265043
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2016年4月26日
【发明人】刘晓军, 张建军
【申请人】北京科拓恒通生物技术开发有限公司