一种绣球菌液体菌种培养基及培养方法
【专利摘要】本发明属于食用菌工厂化栽培【技术领域】，具体涉及一种绣球菌液体菌种培养基及培养方法。所述培养基的配方为：葡萄糖0-145g/L，糯米粉0-70g/L，鱼粉蛋白胨1-6g/L，KH2PO40-5g/L，MgSO4·7H2O0-3g/L，初始pH5-6，通过绣球菌液体母种制备和绣球菌液体原种制备进行培养。本发明针对绣球菌液体培养基成本高、原料来源受限制等缺点，提供了一种绣球菌液体菌种培养基及培养方法，降低生产成本，提高生产效率。本发明液体培养基配方简单，原料来源方便，适宜规模化生产。液体菌种培养过程简单，操作方便。
【专利说明】一种绣球菌液体菌种培养基及培养方法
【技术领域】
[0001]本发明属于食用菌工厂化栽培【技术领域】，具体涉及一种绣球菌液体菌种培养基及培养方法。
【背景技术】
[0002]绣球菌73 6//0773)又名绣球蕈、绣球燕，因其子实瓣片曲折、形似巨大绣球而得名，在日本被誉为梦幻神奇的菇，是一种新近开发的食(药)食用菌新品种，其名贵程度可比肩冬虫夏草、羊肚菌、块菌等珍品。据测定，绣球菌子实体干品中粗蛋白含量12.9 %，粗纤维13.7 %，氨基酸种类较为齐全，并且含有大量的矿物质，如铁(48.1呢/^)、锌(38.5呢/1?)、锰(30.6呢/匕)等含量都较高，维生素含量也很丰富，如维生素0、维生素0、维生素2等，其中维生素2含量位居《食物成分表》中菌藻类食物前列。绣球菌不仅味道鲜美、营养价值高，而且具有很好的医疗、保健功效。日本食品研究中心(了叩册^00(11？68681~011 1^301^1:0:^168)的研究结果表明，绣球菌子实体中多糖含量丰富，每100克含有3 -葡聚糖为43.6克，高于灵芝、姬松茸、蛹虫草等食药用菌。绣球菌中的13 -葡聚糖能提高人体免疫力及机体造血功能，具有抗癌、防癌的功效，可预防及改善由于血酸、过敏及生活习惯产生的高血压、高血糖等诸多疾病，对某些肿瘤也有一定的预防和抑制作用，绣球菌和灰树花的混合提取物还可以治疗癌症和艾滋病0？ 2003265139-^).,因此，绣球菌是一种“食药同源”的健康和保健食品。
[0003]由于绣球菌具有良好的营养价值和保健功效，近年来已逐渐受到国内外学者和消费者的极大关注。经多年研究，福建省农业科学院食用菌研究所已能够人工栽培绣球菌，并且实现了规模化、工厂化生产(专利:一种绣球菌工厂化栽培基质配方及生产工艺，申请号:201010286462.6),但所述生产工艺中仍然采用固体菌种。液体菌种较传统的固体菌种具有诸多优势，如:菌种生产周期短、成本低；生产的菌种活力强、纯度高；接种方便，且接种后菌丝萌发点多、蔓延迅速、适宜食用菌规模化栽培等。因此，采用液体菌种已成为食用菌工厂化发展的必然趋势。
[0004]通过文献调查，目前绣球菌栽培所用菌种均为固体菌种，虽然有关于绣球菌液体发酵技术的报道，但应用于栽培仍有许多局限性，如贾培培等筛选出的最佳液体培养基，其菌丝生物量仅为4.28/1，且配方中需加入蜂蜜粉、啤酒酵母等营养物质。通过配方改良，国内部分专利虽然在菌丝生物量方面已有很大提高，但仍较难应用于规模化栽培。如专利【珍稀食药用菌绣球菌的液体发酵培养方法及其专用培养基】(申请号:201110220578.4)所述培养基需松针等原料，且松针使用前需经过前处理，不利于操作；而专利【一种广叶绣球菌合成培养基】(申请号:201210370266.6)所述的合成培养基具有成分清楚、质量稳定、杂质少等优点，但仅适宜用于绣球菌代谢产物合成的定向调控和代谢流分析，以及下游代谢产物的分离提取。
[0005]综上所述，目前关于绣球菌液体菌种的研究存在如下问题:1、菌丝生物量低；2、培养基原料来源不便，原材料供应受限；3、操作不便，不利于规模化生产。因此，研发出一种原材料来源广泛、方便操作、适宜绣球菌规模化生产的液体菌种配方方法具有重要的意义。
【发明内容】
[0006]本发明针对绣球菌液体培养基成本高、原料来源受限制等缺点，提供了一种绣球菌液体菌种培养基及培养方法，降低生产成本，提高生产效率。
[0007]本发明提供的绣球菌液体菌种培养基优选配方如下:葡萄糖0-1458/1，糯米粉0-708/1，鱼粉蛋白胨 1-68/1，狃2？04 0-5^/1,18804.7！！20 0-38凡，初始邱 5-6。
[0008]更优选地，所述培养基的配方为:葡萄糖10-1458/1，糯米粉35-608凡，鱼粉蛋白胨 2-38/1，狃2？04 0-38/1，%304.7！！20 0-1.58凡，初始邱 5.5-6。
[0009]该培养基具有原料来源方便，操作简单等优点。
[0010]本发明的绣球菌液体菌种培养方法包括如下步骤:
(1)绣球菌液体母种制备:首先制备液体母种培养基，液体母种培养基的配方为:去皮马铃薯2008/1，葡萄糖208/1，蛋白胨38凡，初始邱5-6 ；然后接种活化的试管斜面母种，培养温度23-251，摇瓶转速15011)111，培养7-10天，得液体母种；
(2)绣球菌液体原种制备:首先制备液体原种培养基，液体原种培养基的配方为:葡萄糖 0-1458/1，糯米粉 0-708/1，鱼粉蛋白胨 1-68凡，狃2？04 0-5^/1, 18804 - 7！！20 0-38凡，初始邱5-6 ；然后接种液体母种，培养温度23-251，转速150印111，培养15-20天后即为绣球菌液体原种。
[0011]更具体地，所述培养方法的具体步骤如下:
1、绣球菌液体母种制备
(1)称取马铃薯(去皮)2008，葡萄糖208，鱼粉蛋白胨28，狃2？0438，18804.7！！20 18 ；
(2)马铃薯切片，加水1匕煮沸20-=后用四层纱布过滤，得马铃薯汁备用；
(3)马铃薯汁中按上述配方加入葡萄糖、鱼粉蛋白胨、狃2？04，1叻04- 7！！20溶解，用水定容至1匕调节为5-6，即得液体母种培养基；
(4)将上述液体母种培养基分装入25001三角瓶中，装液量为10001，瓶口塞硅胶塞，
0.11即，121高压蒸汽灭菌30111111 ；
(5)无菌条件下，向冷却后的液体母种培养基中接种？0八斜面菌块(0.5(311^0.50111)5-8块，置于摇床中培养，转速15011)111，温度23-251，培养7-10天后即为绣球菌液体母种。
[0012]2、绣球菌液体原种制备
绣球菌液体母种培养结束后，进行原种的制备，具体如下:
(1)葡萄糖 0-1458/1，糯米粉 0-708/1，鱼粉蛋白胨 1-68凡，狃2？04 0-5^/1, %804 ?7！！200-38/1:(2)向糯米粉中加水0.81充分搅拌，边搅拌边加热至沸腾；
^将葡萄糖、!^#^^和1叻04 ?7！！20加入糯米粉溶液中，搅拌均匀后定容至11，调节邱为5-6，即为液体原种培养基；
(4)将上述液体原种培养基分装入25001三角瓶中，装液量10001，瓶口塞硅胶塞，
0.11即，121高压蒸汽灭菌30111111 ；
(5)无菌条件下，按8%“八)的接种量将液体母种接入液体原种培养基中，接种后摇床培养，转速15011)111，温度23-251，培养15-20天后即为绣球菌液体原种。
[0013]本发明的有益效果: 本发明的方法具有以下优点:
1、液体培养基配方简单，原料来源方便，适宜规模化生产。
[0014]2、液体菌种培养过程简单，操作方便。
【具体实施方式】
[0015]本发明所用绣球菌菌种为‘闽绣1号’，来源于福建省农业科学院食用菌研究所。
[0016]实施例一:
1、绣球菌液体母种培养
(1)母种活化。将绣球菌接种于？0八(去皮土豆2008，葡萄糖208，琼脂粉160斜面培养基中，23-251培养25天，即得活化的绣球菌母种；
(2)制备液体母种。去皮土豆2008切片，加水11煮沸，过滤后加入葡萄糖208，蛋白胨28，狃2？04 38，18804.7！！20 18，搅拌均匀后定容至1匕调节邱为5.5 ；
(3)将上述液体培养基分装入2501111三角瓶中，装液量1001111，高压蒸汽灭菌30-11；
(4)灭菌后接种活化的斜面母种菌块(0.50111^0.50111) 5~8块，摇床中培养，转速150印111，温度23-251，培养10天后即得液体母种。
[0017]2、绣球菌液体原种培养
(1)液体原种培养基:葡萄糖208，鱼粉蛋白胨68，狃2？04 58，18804.7！！20 38，初始邱为5。
[0018]对照培养基:马铃薯2008，葡萄糖208，鱼粉蛋白胨2运，邱值自然，定容至11。
[0019](2)将培养好的液体母种培养基接种于上述液体原种培养基中，接种量为8%，培养温度23?251，摇瓶转速15011)111，自然光照条件下进行振荡培养15天，得绣球菌液体原种，测定菌球直径、菌球密度及菌丝体生物量，具体测定方法如下:
菌球直径(皿):从培养基中随机取出若干菌丝球排成直线，测总长度，取平均值。
[0020]菌球密度(个/“):用移液枪从培养基中随机取样，测定菌球个数。
[0021]菌丝体生物量(8/1):将培养基用双层纱布过滤，过滤后的菌丝球用清水充分冲洗，放入40 I烘箱中烘干至恒重，用电子天平称重后即为菌丝生物量。
[0022]经测定，菌球直径为2.7臟，菌球密为5.1个加1，菌丝生物量1.38凡。
[0023](3)按8%接种量将液体母种培养基接种于对照培养基中，培养温度23?251，摇瓶转速15011)111，自然光照条件下振荡培养15天。经测定，菌球直径为2.0臟，菌球密度为12.5个加1，菌丝体生物量为0.68/1。
[0024]实施例二:
1、绣球菌液体母种培养
母种活化与液体母种培养按实施例一中的方法。
[0025]2、绣球菌液体原种培养
(1)液体原种培养基:糯米粉708，鱼粉蛋白胨匕，狃2？04 1.58，％304 - 7！！20 38，初始邱为5。
[0026]对照培养基:马铃薯2008，葡萄糖208，鱼粉蛋白胨28，邱值自然，定容至11。
[0027](2)将培养好的液体母种培养基接种于上述液体原种培养基中，接种量为8%，培养温度23?251，摇瓶转速15011)111，自然光照条件下进行振荡培养15天，得绣球菌液体原种。按实施例一中的方法，经测定，菌球直径为1.9111111，菌球密为49.3个/1111，菌丝生物量6.7^/1。
[0028](3)按8%接种量将液体母种培养基接种于对照培养基中，培养温度23?251，摇瓶转速15011)111，自然光照条件下振荡培养15天。经测定，菌球直径为2.0臟，菌球密度为12.5个加1，菌丝体生物量为0.68/1。
[0029]实施例三:
1、绣球菌液体母种培养
母种活化与液体母种培养按实施例一中的方法。
[0030]2、绣球菌液体原种培养
(1)液体原种培养基:葡萄糖108，糯米粉608，鱼粉蛋白胨28，1012？04 38，1叻04 - 7！！201.58，初始邱为5.5。
[0031]对照培养基:马铃薯2008，葡萄糖208，鱼粉蛋白胨2邑,邱值自然，定容至11。
[0032](2)将培养好的液体母种培养基接种于上述液体原种培养基中，接种量为8%，培养温度23?251，摇瓶转速15011)111，自然光照条件下进行振荡培养15天，得绣球菌液体原种。按实施例一中的方法，经测定，菌球直径为1.7111111，菌球密为48.0个加1，菌丝生物量7.6^/1。
[0033](3)按8%接种量将液体母种培养基接种于对照培养基中，培养温度23?251，摇瓶转速15011)111，自然光照条件下振荡培养15天。经测定，菌球直径为2.0臟，菌球密度为12.5个加1，菌丝体生物量为0.68/1。
[0034]实施例四:
1、绣球菌液体母种培养
母种活化与液体母种培养按实施例一中的方法。
[0035]2、绣球菌液体原种培养
(1)液体原种培养基:葡萄糖408，糯米粉208，鱼粉蛋白胨38，初始邱为6。
[0036]对照培养基:马铃薯2008，葡萄糖208，鱼粉蛋白胨2邑,邱值自然，定容至11。
[0037](2)将培养好的液体母种培养基接种于上述液体原种培养基中，接种量为8%，培养温度23?251，摇瓶转速15011)111，自然光照条件下进行振荡培养15天，得绣球菌液体原种。按实施例一中的方法，经测定，菌球直径为1.9111111，菌球密为15.3个/1111，菌丝生物量5.8^/1。
[0038](3)按8%接种量将液体母种培养基接种于对照培养基中，培养温度23?251，摇瓶转速15011)111，自然光照条件下振荡培养15天。经测定，菌球直径为2.0臟，菌球密度为12.5个加1，菌丝体生物量为0.68/1。
[0039]实施例五:
1、绣球菌液体母种培养
母种活化与液体母种培养按实施例一中的方法。
[0040]2、绣球菌液体原种培养
(1)液体原种培养基:葡萄糖1458，糯米粉358，鱼粉蛋白胨38，初始邱为6。
[0041]对照培养基:马铃薯2008，葡萄糖208，鱼粉蛋白胨2邑,邱值自然，定容至11。
[0042](2)将培养好的液体母种培养基接种于上述液体原种培养基中，接种量为8%，培养温度23?251，摇瓶转速15011)111，自然光照条件下进行振荡培养15天，得绣球菌液体原种。按实施例一中的方法，经测定，菌球直径为2.1111111，菌球密为18.8个/1111，菌丝生物量9.5^/1。
[0043](3)按8%接种量将液体母种培养基接种于对照培养基中，培养温度23?251，摇瓶转速15011)111，自然光照条件下振荡培养15天。经测定，菌球直径为2.0臟，菌球密度为12.5个加1，菌丝体生物量为0.68/1。
[0044]实施例六
1、绣球菌液体母种培养
母种活化与液体母种培养按实施例一中的方法。
[0045]2、绣球菌液体原种培养
(1)液体原种培养基:葡萄糖558，糯米粉408，鱼粉蛋白胨38，狃2？04 38，％304 - 7！！2018，初始邱为5.5。
[0046](2)将培养好的液体母种培养基接种于上述液体原种培养基中，接种量为8%，培养温度23?251，摇瓶转速15011)111，自然光照条件下进行振荡培养15天，得绣球菌液体原种。按实施例一中的方法，经测定，菌球直径为1.5111111，菌球密为48.7个加1，菌丝生物量9.7^/1。
[0047]结果分析:
液体菌种应用于食用菌工厂化栽培，在菌种自身特性方面，需具备如下特性:首先，菌球直径应越小越好，这样可避免接种过程中堵塞接种枪；其次，菌球密度越大越好，接种后菌丝萌发点多，菌丝封面时间缩短，降低污染几率；第三，在具备以上两点的同时，尽可能提高培养基中菌丝体的生物量。在生产工艺方面，所需原材料应来源广泛，且操作过程简单。
[0048]从以上实例可以看出，在生产成本方面，本发明所述培养基成分简单(仅需2种碳源，1种氮源),材料来源方便，适宜大规模的发酵生产，同时，所述培养基使用时无需前处理，使用简单，方便操作。通过本发明所述培养基进行发酵培养，绣球菌菌丝生物量可达9.78/1，高于对照(0.68/1)及贾培培等的研究结果(4.菌球密度为48.7个加1，适宜规模化生产。
【权利要求】
1.一种绣球菌液体菌种培养基，其特征在于:所述培养基的配方为:葡萄糖0-145g/L,糯米粉 0-70g/L，鱼粉蛋白胨 l_6g/L，KH2P04 0_5g/L，MgS04.7H20 0_3g/L，初始 pH 5-6。
2.根据权利要求1所述的绣球菌液体菌种培养基，其特征在于:所述绣球菌菌种为‘闽绣1号’。
3.—种绣球菌液体菌种培养方法，其特征在于:所述培养方法包括如下步骤: (1)绣球菌液体母种制备:首先制备液体母种培养基，液体母种培养基的配方为:去皮马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，蛋白胨3g/L，初始pH 5-6 ;然后接种活化的试管斜面母种，培养温度23-25°C，摇瓶转速150rpm，培养7_10天，得液体母种； (2)绣球菌液体原种制备:首先制备液体原种培养基，液体原种培养基的配方为:葡萄糖 0-145g/L，糯米粉 0-70g/L，鱼粉蛋白胨 l_6g/L，KH2P04 0_5g/L，MgS04.7H20 0_3g/L，初始pH 5-6 ;然后接种液体母种，培养温度23-25°C，转速150rpm，培养15_20d后即为绣球菌液体原种。
【文档编号】C05G1/00GK104429604SQ201410725242
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年12月4日 优先权日:2014年12月4日
【发明者】马璐, 林衍铨, 江晓凌, 应正河 申请人:福建省农业科学院食用菌研究所