一种全缘叶细筒苣苔叶片组培两步成苗法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及一种全缘叶细筒苣苔叶片组培两步成苗 法。
【背景技术】
[0002] 全缘叶细筒苣苔为苦苣苔科细筒苣苔属多年生草本植物，根状茎近圆柱形，叶片 草质，基部近圆形或浅心形，边缘全缘，花冠紫色，花期6月，果期6月。中国特有珍稀植物，特 产广西龙州，生于石灰岩山地林下岩壁上，海拔约为530m。
[0003] 全缘叶细筒苣苔分布区域极其狭窄，目前仅在广西龙州地区石灰岩山陡崖上发现 少量植株，由于生长环境恶劣缺少水肥，加之其种子细小，萌发需要的温度范围、湿度范围 和土壤酸碱度范围比较小，自然界难以进行有性繁殖，急需建立有效的繁育和保护体系，本 发明旨在通过组织培养技术叶片两步成苗法对全缘叶细筒苣苔种质资源进行有效的繁育 和保护，是目前对全缘叶细筒苣苔育苗最便捷、稳定的手段，可以节约大量的人力、物力和 场地，便于种质交换和转移，避免有害病虫的人为传播。
【发明内容】
[0004] 本发明目的在于提供一种全缘叶细筒苣苔叶片组培两步成苗法，能够短时间内提 供大量优质适合栽培的全缘叶细筒苣苔种苗。
[0005] 为了实现上述目的，本发明提供了如下技术方案： 全缘叶细筒苣苔叶片组培两步成苗法，其特征在于： (1) 叶片诱导分化不定芽培养:取全缘叶细筒苣苔幼嫩叶片，在75%乙醇中表面消毒30~ 45s，无菌水2~3次，投入0.1% Hgcl2 5min,无菌水2~3次，0.1% Hgch 3min，无菌水2~3次冲 洗干后切分为0.5 cmX I cm大小接种在诱导及分化培养基上，在温度为22~26°C，光照强度 1800~26001ux，光照时间为8~10小时/天的条件下，10~15天叶片分化出不定芽； (2) 不定芽壮苗生根培养:选择全缘叶细筒苣苔叶片分化1~1.5个月，具有2片以上叶 子、高1.5~3cm不定芽接种到壮苗生根培养基，在温度为22~26° C，光照强度2000~28001UX， 光照时间为8~10小时/天的条件下进行培养，1~2个月不定芽长至高4~6cm的无菌苗。
[0006] 采用本发明方法得到的种苗健壮、成活率高，可在短期内提供大量全缘叶细筒苣 苔的优质种苗，并减少了配制培养基和转瓶的步骤，节约了大量人力物力，因此简单易行、 生产成本降低，有效解决了全缘叶细筒苣苔规模化育苗及种质资源保存问题。
【具体实施方式】
[0007] 下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。
[0008] 全缘叶细筒苣苔叶片组培两步成苗法法，包括以下步骤： (1)叶片诱导分化不定芽培养:取全缘叶细筒苣苔幼嫩叶片，在75%乙醇中表面消毒30~ 45s，无菌水2~3次，投入0.1% Hgcl2 5min,无菌水2~3次，0.1% Hgch 3min，无菌水2~3次冲 洗干后切分为0.5 cmX I cm大小接种在诱导及分化培养基上，在温度为22~26°C，光照强度 1800~26001ux，光照时间为8~10小时/天的条件下，10~15天叶片分化出不定芽。
[0009] 表1不同激素对不定芽数的影响
注:芽增殖倍数=(30天后芽数一接种时芽数)/接种时芽数 (2)不定芽壮苗生根培养:选择全缘叶细筒苣苔叶片分化1~1.5个月高1.5~3cm不定芽 接种到壮苗生根培养基，在温度为22~26° C，光照强度2000~28001UX，光照时间为8~10小时/ 天的条件下进行培养，1~2个月不定芽长至高4~6cm的无菌苗。
[0010] 表2不同激素水平对不定芽生根效果的影响
当无菌苗每株生根4条以上、根长达2.5~4cm时，打开瓶盖，在室内炼苗3~4天后，将组培 苗从培养瓶中取出，洗去培养基，将其移栽至灭菌的栽培基质中。
[0011] 备注：6-BA(6-苄氨基嘌呤），NAA(萘乙酸），KT(激动素），IAA(B引噪乙酸），AC (活性炭）。
【主权项】
1. 一种全缘叶细筒苣苔叶片组培两步成苗法，其特征在于： (1) 叶片诱导分化不定芽培养:取全缘叶细筒苣苔幼嫩叶片，在75%乙醇中表面消毒30~ 45s，无菌水2~3次，投入0.1% Hgcl2 5min,无菌水2~3次，0.1% Hgcl2 3min，无菌水2~3次冲 洗干后切分为0.5 cmX 1 cm大小接种在诱导及分化培养基上，在温度为22~26°C，光照强度 1800~26001ux，光照时间为8~10小时/天的条件下，10~15天叶片分化出不定芽； (2) 不定芽壮苗生根培养:选择全缘叶细筒苣苔叶片分化1~1.5个月，具有2片以上叶 子、高1.5~3cm不定芽接种到壮苗生根培养基，在温度为22~26° C，光照强度2000~28001UX， 光照时间为8~10小时/天的条件下进行培养，1~2个月不定芽长至高4~6cm的无菌苗。
【专利摘要】一种全缘叶细筒苣苔叶片组培两步成苗法：取全缘叶细筒苣苔幼嫩叶片作为外植体进行灭菌处理，然后将其切分后接种到诱导及分化培养基上，1~1.5个月后选择幼嫩叶片上分化出的具有2片以上叶子、高1.5~3cm的无菌芽苗转接到壮苗生根培养基上；当无菌苗每株生根4条以上、根长达2.5~４cm时，打开瓶盖，在室内炼苗３~４天后，将组培苗从培养瓶中取出，洗去培养基，将其移栽至灭菌的栽培基质中。采用本发明方法得到的种苗健壮、成活率高，可在短期内提供大量全缘叶细筒苣苔的优质种苗，并减少了配制培养基和转瓶的步骤，节约了大量人力物力，因此简单易行、生产成本降低，有效解决了全缘叶细筒苣苔规模化育苗及种质资源保存问题。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105706930
【申请号】CN201610108544
【发明人】李翠, 张占江, 吕惠珍, 缪剑华, 韦莹, 韦坤华, 李林轩, 王一诺, 肖冬
【申请人】广西壮族自治区药用植物园