一种简易的瓜实蝇温度胁迫处理装置及方法与流程

本发明是一种简易的瓜实蝇温度胁迫处理装置及方法，属于害虫抗逆性技术研究领域，尤其涉及一种利用简易装置进行瓜实蝇温度胁迫的方法。

背景技术：

瓜实蝇（Bactrocera(Zeugodacus)cucurbitae）属实蝇科（Tephritidae），广泛分布于亚热带地区，是一种重要的入侵性害虫。其把卵产在芦科和茄科植物如南瓜、甜瓜、苦瓜、西瓜、桃和番茄等内为害并随其运输扩散。环境温度是影响昆虫生命活动的重要因素，昆虫的地理分布和扩散都直接受到环境温度的影响。温度胁迫耐受性的研究在预测害虫发生分布区、建立物候学模型、模拟种群动态、检疫处理、引进天敌、改进害虫控制策略和评估其地理扩散能力等方面具有重要的指导意义。研究表明，昆虫对高温或低温的耐受性同体内热激蛋白家族部分基因的表达有着密切的关系，因此研究者通过研究在特定的高温或低温下短时间胁迫昆虫，然后研究其体内那种热激蛋白基因发生了上调或下调表达，从而进一步了解昆虫的温度耐受性。

对昆虫进行温度胁迫的仪器主要是人工气候箱，但人工气候箱价格较为昂贵且占用空间较大，对于短时间温度胁迫处理昆虫来说，使用起来并不方便。因此，研究出一种简易方便的昆虫温度胁迫处理方法对于从事此方面的研究来说是非常有必要的。

技术实现要素：

针对现有技术存在的不足，本发明目的是提供一种简易的瓜实蝇温度胁迫处理装置及方法，以解决上述背景技术中提出的问题,本发明使用方便，便于操作，稳定性好，可靠性高。

为了实现上述目的，本发明是通过如下的技术方案来实现：一种简易的瓜实蝇温度胁迫处理装置，包括水浴锅、玻璃瓶以及LED潜水灯，所述玻璃瓶以及LED潜水灯放置在水浴锅内，所述玻璃瓶的底部安装有铁片，所述玻璃瓶的上方安装有瓶盖，所述瓶盖的顶部开有圆孔，所述圆孔内放置有塑料管以及温度计探针，所述温度计探针通过连接线连接温度计，所述LED潜水灯的外表面安装有潜水灯吸盘，所述LED潜水灯的上端连接有电源线。

进一步地，所述水浴锅的底部放置有磁铁。

进一步地，开设在瓶盖上方的圆孔设有三个，所述圆孔的直径为6mm，塑料管设有两个，两个塑料管放置在两个圆孔内，剩余一个圆孔内放置有温度计探针。

进一步地，所述塑料管的外径、内径以及长分别为6mm、4mm和50mm，塑料管的底部连接有纱网，所述纱网的目数为为40目。

进一步地，所述塑料管和温度计探针是利用热熔胶进行黏结封闭在圆孔内。

进一步地，所述LED潜水通过电源线连接外部电路。

进一步地，所述铁片通过热熔胶进行黏结在玻璃瓶的下方，所述铁片呈圆形，所述铁片的直径为2.5cm。

进一步地，所述水浴锅为一种冷热型水浴锅。

进一步地，所述玻璃瓶为透明玻璃瓶，玻璃瓶的体积为100ml。

一种简易的瓜实蝇温度胁迫处理方法，包括以下步骤：

步骤一、在100ml透明带盖玻璃瓶的瓶盖顶部开三个直径6mm直径的圆孔；

步骤二、把两根外径、内径以及长分别为6mm、4mm以及50mm的塑料管底部封上40目的纱网，然后将塑料管用热熔胶黏结在瓶盖上的两个圆孔内，用热熔胶把温度计探针黏结在剩余的一个圆孔中且深入瓶盖中50mm；

步骤三、在玻璃瓶外底部黏贴一块直径2.5cm的圆铁片；

步骤四、将待处理的瓜实蝇引入玻璃瓶中，盖上瓶盖，在其中一个塑料管中放入一个棉球，并滴加5%-10%的蜂蜜水作为食物；

步骤五、在水浴锅内壁放置LED潜水灯，作为光源；

步骤六、把水浴锅调制所需温度，采用磁铁把玻璃瓶固定在水浴锅中，倒入水，水淹过瓶盖，根据设置的光照和处理时间，完后取出试虫；

步骤七、采用荧光定量PCR技术分析瓜实蝇热胁迫后体内hsp90基因的相对表达量。

进一步地，在步骤四中，具体的步骤为，把待处理羽化3-5天的瓜实蝇成虫雌雄各4头引入到玻璃瓶中，盖上瓶盖。

进一步地，在步骤五中，玻璃瓶与LED潜水灯的距离在5-10cm之间。

进一步地，在步骤六中，水浴锅设定的温度40℃，对照温度为26℃，待玻璃瓶内温度达到所需温度后开始计时，处理时间分别为1h、3h和5h，处理结束后取出瓜实蝇，室温恢复1h，进行后续步骤。

进一步地，在步骤七中，室温恢复1h后的瓜实蝇采用Trizol试剂提取其总RNA，反转录合成cDNA，根据瓜实蝇hsp90和actin基因序列， 以各个处理样本的cDNA为模板，荧光定量PCR分析温度胁迫后hsp90基因的相对表达量。

本发明的有益效果：本发明的一种简易的瓜实蝇温度胁迫处理装置及方法，灵活简单，不仅仅可以用于瓜实蝇，也可以用于其它昆虫的胁迫处理。

附图说明

通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显：

图1为本发明一种简易的瓜实蝇温度胁迫处理装置及方法的LED潜水灯结构示意图；

图2为本发明一种简易的瓜实蝇温度胁迫处理装置及方法的结构爆炸图；

图3为40℃高温分别胁迫1h、3h和5h下瓜实蝇成虫hsp90基因相对表达量结果图。26℃处理的虫子作为对照，每个处理三个重复，图中柱子表示相对表达量±SE，柱上不同字母表示在5%水平（Tkey’s test）上差异显著。Hsp90基因相对定量表达量采用2^-△△t分析方法，其中A为雌成虫，B为雄成虫。

图中： 1-水浴锅、2-玻璃瓶、3-LED潜水灯、21-铁片、22-磁铁、23-瓶盖、24-圆孔、25-塑料管、26-温度计探针、27-连接线、28-温度计、31-电源线、32-潜水灯吸盘。

具体实施方式

为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。

请参阅图1、图2，本发明提供一种技术方案：一种简易的瓜实蝇温度胁迫处理装置，包括水浴锅1、玻璃瓶2以及LED潜水灯3，玻璃瓶2以及LED潜水灯3放置在水浴锅1内，玻璃瓶2的底部安装有铁片21，玻璃瓶2的上方安装有瓶盖23，瓶盖23的顶部开有圆孔24，圆孔24内放置有塑料管25以及温度计探针26，温度计探针26通过连接线27连接温度计28，LED潜水灯3的外表面安装有潜水灯吸盘32，LED潜水灯3的上端连接有电源线31。

水浴锅1的底部放置有磁铁22，铁片21通过热熔胶进行黏结在玻璃瓶2的下方，铁片21呈圆形，铁片21的直径为2.5cm，水浴锅1为一种冷热型水浴锅。

开设在瓶盖23上方的圆孔24设有三个，圆孔24的直径为6mm，塑料管25设有两个，两个塑料管25放置在两个圆孔24内，剩余一个圆孔24内放置有温度计探针26。

塑料管25的外径、内径以及长分别为6mm、4mm和50mm，塑料管25的底部连接有纱网，纱网的目数为为40目，塑料管25和温度计探针26是利用热熔胶进行黏结封闭在圆孔24内。

LED潜水通过电源线31连接外部电路，玻璃瓶2为透明玻璃瓶2，玻璃瓶2的体积为100ml。

做为本发明的一个实施例，提供一种简易的瓜实蝇温度胁迫处理方法，包括以下步骤：

步骤一、在100ml透明带盖玻璃瓶2的瓶盖23顶部开三个直径6mm直径的圆孔24；

步骤二、把两根外径、内径以及长分别为6mm、4mm以及50mm的塑料管25底部封上40目的纱网，然后将塑料管25用热熔胶黏结在瓶盖23上的两个圆孔24内，用热熔胶把温度计探针26黏结在剩余的一个圆孔24中且深入瓶盖23中50mm；

步骤三、在玻璃瓶2外底部黏贴一块直径2.5cm的圆铁片；

步骤四、将待处理的瓜实蝇引入玻璃瓶2中，盖上瓶盖23，在其中一个塑料管25中放入一个棉球，并滴加5%-10%的蜂蜜水作为食物；

步骤五、在水浴锅1内壁放置LED潜水灯3，作为光源；

步骤六、把水浴锅1调制所需温度，采用磁铁把玻璃瓶2固定在水浴锅1中，倒入水，水淹过瓶盖23，根据设置的光照和处理时间，完后取出试虫；

步骤七、采用荧光定量PCR技术分析瓜实蝇热胁迫后体内hsp90基因的相对表达量。

在步骤四中，具体的步骤为，把待处理羽化3-5天的瓜实蝇成虫雌雄各4头引入到玻璃瓶2中，盖上瓶盖23。

在步骤五中，玻璃瓶2与LED潜水灯3的距离在5-10cm之间。

在步骤六中，水浴锅1设定的温度40℃，对照温度为26℃，待玻璃瓶2内温度达到所需温度后开始计时，处理时间分别为1h、3h和5h，处理结束后取出瓜实蝇，室温恢复1h，进行后续步骤。

在步骤七中，室温恢复1h后的瓜实蝇采用Trizol试剂提取其总RNA，反转录合成cDNA，根据瓜实蝇hsp90和actin基因序列， 采用primer5.0软件设计合成用于荧光定量分析的引物：hsp90-F/R：ACTTCCACTATGGGCTAC/ CCACCGCTTTGAGTATCT, actin-F/R：ATGAATTGCCTGATGGTC/ GAATGAGGGTTGGAAGAGT; 以各个处理样本的cDNA为模板，荧光定量PCR分析温度胁迫后hsp90基因的相对表达量。

瓜实蝇热胁迫后hsp90基因表达结果见图3。结果显示在40℃分别热胁迫瓜实蝇1h、3h和5h后，在雌雄虫体内hsp90基因相对表达量同26℃对照相比较均发生了显著性上调表达；表达量最高的均为40℃胁迫1h处理，雌虫体内hsp90表达量上调了11.25倍，雄虫体内hsp90表达量上调了7.64倍；当40℃胁迫3h处理时，雌虫体内hsp90表达量上调了5.42倍，雄虫体内hsp90表达量上调了4.98倍；当40℃胁迫5h处理时，雌虫体内hsp90表达量上调了4.21倍，雄虫体内hsp90表达量上调了4.96倍。实例结果表明，瓜实蝇体内hsp90基因的上调表达可能和其耐热性相关，且其上调表达并不是随热胁迫的时间延长而升高，反而随时间的增加而下降。

以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点,对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。

此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。