一种褐变率低的蝴蝶兰组培方法与流程

文档序号:12309399阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种褐变率低的蝴蝶兰组培方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)材料选取:选取生长期为45d且无病虫害长势良好的蝴蝶兰花梗,采用花梗为外植体进行组织培养;

(2)材料制作:将花梗切成带腋芽的3cm节段,节上平切,节下呈45°斜切;

(3)材料消毒:用软刷毛将选取的蝴蝶兰花梗在水池中进行初步清洗,去除表面的泥沙,然后用洗洁精清洗干净,置于流水下冲洗60min,用蜡封蝴蝶兰花梗伤口,将蝴蝶兰花梗置于超净工作台上用经高温灭菌过的体积分数为75%的酒精消毒30s,再用无菌水冲洗5次,然后用质量分数为0.1%的氯化汞溶液加4~5滴吐温-20消毒12min,消毒后用无菌水冲洗6~8次,用消毒滤纸吸干表面水分后放置于培养皿中备用;

(4)材料预处理:将消毒后的蝴蝶兰花梗进行高温处理,温度为45℃,时间为10min,然后无菌条件下常温放置48h;

(5)诱导培养:将预处理后的蝴蝶兰花梗,接种在诱导培养基中进行培养,先进行7d的暗培养,然后每天增加2小时的光照时间进行光培养,直到每天光照时间为12h/d为止,光照强度为1300~1500lx;前7~14d采用低温培养,培养温度为15~25℃,低温培养后,采用常温培养,培养温度为25~28℃;所述诱导培养基为:MS+0.4~0.8mg/L 6-BA+0.05~0.08mg/L NAA+10~15g/L蔗糖+6~8g/L琼脂+10~15%椰汁+290~310mg/L柠檬酸+1~2g/L活性炭,pH值为5.4~5.5;

(6)增殖培养:将诱导培养后的蝴蝶兰花梗转移至增殖培养基中,先进行7d的暗培养,然后每天增加2小时的光照时间进行光培养,直到每天光照时间为12h/d为止,光照强度为1300~1500lx;前7~14d采用低温培养,培养温度为15~25℃,低温培养后,采用常温培养,培养温度为25~28℃;所述增殖培养基为:MS+1~2mg/L 6-BA+0.1~0.2mg/L NAA+10~15g/L蔗糖+6~8g/L琼脂+10~15%椰汁+290~310mg/L柠檬酸+1~2g/L活性炭,pH值为5.4~5.5;

(7)壮苗生根:增殖培养后,选择高2cm以上、外植体上有明显突起的小苗转入生根培养基中,所述生根培养基为:MS+1.4~1.6mg/L 6-BA+0.05~0.08mg/LNAA+10~15g/L蔗糖+6~8g/L琼脂+10~15%椰汁+8~12%香蕉汁+7~10%土豆泥,pH值为5.4~5.5;培养条件:培养温度25~28℃,光照时间为13h/d,光照强度为1300~1500lx;

(8)移栽:当试管苗生长至4~5cm高,根2~4条,叶1~2片时,将试管苗放在自然光下炼苗5~7天,打开瓶盖炼苗1~2天;然后取出培养苗,用清水洗净附着在根部的培养基,清洗时注意不要损害根部,然后移栽至水苔和腐殖土质量比为1:2的混合基质中,保持湿度和通风,空气湿度为75~85%,温度为20~25℃。

2.根据权利要求1所述的一种褐变率低的蝴蝶兰组培方法,其特征在于:所述诱导培养基为:MS+0.6mg/L 6-BA+0.07mg/L NAA+13g/L蔗糖+7g/L琼脂+13%椰汁+300mg/L柠檬酸+1.5g/L活性炭。

3.根据权利要求1所述的一种褐变率低的蝴蝶兰组培方法,其特征在于:所述增殖培养基为:MS+1.5mg/L 6-BA+0.15mg/L NAA+13g/L蔗糖+7g/L琼脂+13%椰汁+300mg/L柠檬酸+1.5g/L活性炭。

4.根据权利要求1所述的一种褐变率低的蝴蝶兰组培方法,其特征在于:所述生根培养基为:MS+1.5mg/L 6-BA+0.07mg/L NAA+13g/L蔗糖+7g/L琼脂+13%椰汁+10%香蕉汁+9%土豆泥。

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