本发明涉及一种荔枝树苗的培养方法。
背景技术：
荔枝(学名：Litchi chinensis Sonn.)无患子科，荔枝属常绿乔木，高约10米。果皮有鳞斑状突起，鲜红，紫红。成熟时至鲜红色；种子全部被肉质假种皮包裹。花期春季，果期夏季。果肉产鲜时半透明凝脂状，味香美，但不耐储藏。分布于中国的西南部、南部和东南部，广东和福建南部栽培最盛。亚洲东南部也有栽培，非洲、美洲和大洋洲有引种的记录。荔枝与香蕉、菠萝、龙眼一同号称“南国四大果品”。荔枝味甘、酸、性温，入心、脾、肝经；可止呃逆，止腹泻，是顽固性呃逆及五更泻者的食疗佳品，同时有补脑健身，开胃益脾，有促进食欲之功效。因性热，多食易上火。荔枝木材坚实，纹理雅致，耐腐，历来为上等名材。
荔枝树木的幼树生长期长，遗传组成高度杂合，传统的育种技术来改良荔枝形状及培育新品种费时、费力，难以满足荔枝产业发展的需要。因此，亟需一种快速高效地培育荔枝幼苗的方法。
技术实现要素：
本发明的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优点。
本发明还有一个目的是提供一种荔枝树苗的培养方法。
本发明提供的技术方案为：
一种荔枝树苗的培养方法，包括：
步骤一、荔枝外植体获取：在荔枝花芽萌发期，取荔枝花芽作为外植体，首先将荔枝花芽使用体积百分比9％的酒精溶液浸泡5-15min，之后使用自来水冲洗10-20min，然后用质量体积分数0.1％的次氯酸钠溶液消毒8-10min，最后用无菌水冲洗3-5次，除去表面水分得到荔枝外植体；
步骤二、分化培养：将步骤一中得到的荔枝外植体接种于MS分化培养基中培养25～35天直至荔枝外植体的侧芽分化长出丛生芽，其中，分化培养中的培养温度为23-27℃，光照强度为2000-2500lux，光照周期为10-15小时/天；
步骤三、壮苗培养：将步骤二中经过分化培养的荔枝外植体在MS壮苗培养基中培养35～45天得到荔枝健壮植株，其中，壮苗培养中的培养温度为23-27℃，光照强度为2000-2500lux，光照周期为10-15小时/天；
步骤四、生根培养：将经步骤三中得到的荔枝健壮植株置于MS生根培养基中培养45～55天得到带根的荔枝树苗，其中，生根培养中的培养温度为23-27℃，光照强度为2000-2500lux，光照周期为10-15小时/天。
优选的是，所述的荔枝树苗的培养方法中，所述步骤二中，MS分化培养基包含：MS，椰子乳30～40mg/L，0.1-0.4mg/L ZT，0.2～1mg/L 6-BA，0.2-0.8mg/L NAA，纳米活性炭颗粒1～2g/L，25-30g/L蔗糖和4.8-5.8g/L琼脂，并调节初始pH值为5.8。
优选的是，所述的荔枝树苗的培养方法中，所述步骤三中，MS壮苗培养基包含：MS，椰子乳40～50mg/L，0.3-1.0mg/L 6-BA、0.2-0.8mg/L IAA，纳米活性炭颗粒1～2g/L，25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L琼脂，并调节初始pH值为5.8。
优选的是，所述的荔枝树苗的培养方法中，所述步骤三中，MS生根培养基包含：1/2MS，椰子乳50～60mg/L，1.0-2.0mg/L NAA，纳米活性炭颗粒1～2g/L，25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L琼脂，并调节初始pH值为5.8。
优选的是，所述的荔枝树苗的培养方法中，在所述步骤四之后还进行步骤五，所述步骤五包括：炼苗和移栽：先将步骤四中得到的带根的木鳖植株在温度25℃下炼苗2-4天，之后再移栽到沙土壤中生长45天，然后再移栽至大田生长，其中，大田的生长条件为：温度为20-28℃，相对湿度为75-80％，遮阳率为70％。
优选的是，所述的荔枝树苗的培养方法中，所述椰子乳为椰子经100目纱布过滤之后得到的液体。
本发明至少包含如下优点：
本发明的培养基中含有大量的椰子乳，椰子乳中含有蛋白质、脂肪、维生素C及钙、磷、铁、钾、镁、钠等矿物质，同时含有较多的水分和驱虫物质，使得培养基的营养更加丰富，且能够促进荔枝外植体的生长。本发明的培养基中含有的纳米活性炭颗粒能够通气透风，同时不易滋生细菌，使得培养基的营养成分分布更加均匀，不易板结，通风透气，利于荔枝外植体的生根发芽。
本发明通过组织培养技术对荔枝进行组织培养快速繁殖，在短时间内培育出大量可供大田栽培的荔枝幼苗，提高了荔枝种苗的繁殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。
采用本发明的方法，获得的组培苗生根率在90％以上，每株平均带3-4个根，根长为2-3厘米，移栽沙床成活率在95％以上；快速、便捷、高效地进行荔枝组织培养，实现荔枝组培种苗的规模化生产。
具体实施方式
下面对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
本发明提供一种荔枝树苗的培养方法，包括：
步骤一、荔枝外植体获取：在荔枝花芽萌发期，取荔枝花芽作为外植体，首先将荔枝花芽使用体积百分比9％的酒精溶液浸泡5-15min，之后使用自来水冲洗10-20min，然后用质量体积分数0.1％的次氯酸钠溶液消毒8-10min，最后用无菌水冲洗3-5次，除去表面水分得到荔枝外植体；
步骤二、分化培养：将步骤一中得到的荔枝外植体接种于MS分化培养基中培养25～35天直至荔枝外植体的侧芽分化长出丛生芽，其中，分化培养中的培养温度为23-27℃，光照强度为2000-2500lux，光照周期为10-15小时/天；
步骤三、壮苗培养：将步骤二中经过分化培养的荔枝外植体在MS壮苗培养基中培养35～45天得到荔枝健壮植株，其中，壮苗培养中的培养温度为23-27℃，光照强度为2000-2500lux，光照周期为10-15小时/天；
步骤四、生根培养：将经步骤三中得到的荔枝健壮植株置于MS生根培养基中培养45～55天得到带根的荔枝树苗，其中，生根培养中的培养温度为23-27℃，光照强度为2000-2500lux，光照周期为10-15小时/天。
在本发明的其中一个实施例中，作为优选，所述步骤二中，MS分化培养基包含：MS，椰子乳30～40mg/L，0.1-0.4mg/L ZT，0.2～1mg/L 6-BA，0.2-0.8mg/L NAA，纳米活性炭颗粒1～2g/L，25-30g/L蔗糖和4.8-5.8g/L琼脂，并调节初始pH值为5.8。
在本发明的其中一个实施例中，作为优选，所述步骤三中，MS壮苗培养基包含：MS，椰子乳40～50mg/L，0.3-1.0mg/L 6-BA、0.2-0.8mg/L IAA，纳米活性炭颗粒1～2g/L，25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L琼脂，并调节初始pH值为5.8。
在本发明的其中一个实施例中，作为优选，所述步骤三中，MS生根培养基包含：1/2MS，椰子乳50～60mg/L，1.0-2.0mg/L NAA，纳米活性炭颗粒1～2g/L，25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L琼脂，并调节初始pH值为5.8。
在本发明的其中一个实施例中，作为优选，在所述步骤四之后还进行步骤五，所述步骤五包括：炼苗和移栽：先将步骤四中得到的带根的木鳖植株在温度25℃下炼苗2-4天，之后再移栽到沙土壤中生长45天，然后再移栽至大田生长，其中，大田的生长条件为：温度为20-28℃，相对湿度为75-80％，遮阳率为70％。
在本发明的其中一个实施例中，作为优选，所述椰子乳为椰子经100目纱布过滤之后得到的液体。
实施例1
椰子乳为椰子经100目纱布过滤之后得到的液体。
本发明提供一种荔枝树苗的培养方法，包括：
步骤一、荔枝外植体获取：在荔枝花芽萌发期，取荔枝花芽作为外植体，首先将荔枝花芽使用体积百分比9％的酒精溶液浸泡5min，之后使用自来水冲洗10min，然后用质量体积分数0.1％的次氯酸钠溶液消毒8min，最后用无菌水冲洗3次，除去表面水分得到荔枝外植体；
步骤二、分化培养：将步骤一中得到的荔枝外植体接种于MS分化培养基中培养25天直至荔枝外植体的侧芽分化长出丛生芽，其中，分化培养中的培养温度为23℃，光照强度为2000lux，光照周期为10小时/天；MS分化培养基包含：MS，椰子乳30mg/L，0.1mg/L ZT，0.2mg/L 6-BA，0.2mg/L NAA，纳米活性炭颗粒1g/L，25g/L蔗糖和4.8g/L琼脂，并调节初始pH值为5.8。
步骤三、壮苗培养：将步骤二中经过分化培养的荔枝外植体在MS壮苗培养基中培养35天得到荔枝健壮植株，其中，壮苗培养中的培养温度为23℃，光照强度为2000lux，光照周期为10小时/天；MS壮苗培养基包含：MS，椰子乳40mg/L，0.3mg/L 6-BA、0.2mg/L IAA，纳米活性炭颗粒1g/L，25g/L蔗糖和3.8g/L琼脂，并调节初始pH值为5.8。
步骤四、生根培养：将经步骤三中得到的荔枝健壮植株置于MS生根培养基中培养45天得到带根的荔枝树苗，其中，生根培养中的培养温度为23℃，光照强度为2000lux，光照周期为10小时/天。MS生根培养基包含：1/2MS，椰子乳50mg/L，1.0mg/L NAA，纳米活性炭颗粒1g/L，25g/L蔗糖和3.8g/L琼脂，并调节初始pH值为5.8。
步骤五：炼苗和移栽：先将步骤四中得到的带根的木鳖植株在温度25℃下炼苗2天，之后再移栽到沙土壤中生长45天，然后再移栽至大田生长，其中，大田的生长条件为：温度为20℃，相对湿度为75％，遮阳率为70％。
实施例2
椰子乳为椰子经100目纱布过滤之后得到的液体。
本发明提供一种荔枝树苗的培养方法，包括：
步骤一、荔枝外植体获取：在荔枝花芽萌发期，取荔枝花芽作为外植体，首先将荔枝花芽使用体积百分比9％的酒精溶液浸泡15min，之后使用自来水冲洗20min，然后用质量体积分数0.1％的次氯酸钠溶液消毒10min，最后用无菌水冲洗5次，除去表面水分得到荔枝外植体；
步骤二、分化培养：将步骤一中得到的荔枝外植体接种于MS分化培养基中培养35天直至荔枝外植体的侧芽分化长出丛生芽，其中，分化培养中的培养温度为27℃，光照强度为2500lux，光照周期为15小时/天；MS分化培养基包含：MS，椰子乳40mg/L，0.4mg/L ZT，1mg/L 6-BA，0.2-0.8mg/L NAA，纳米活性炭颗粒2g/L，30g/L蔗糖和5.8g/L琼脂，并调节初始pH值为5.8。
步骤三、壮苗培养：将步骤二中经过分化培养的荔枝外植体在MS壮苗培养基中培养45天得到荔枝健壮植株，其中，壮苗培养中的培养温度为27℃，光照强度为2500lux，光照周期为15小时/天；MS壮苗培养基包含：MS，椰子乳50mg/L，1.0mg/L 6-BA、0.8mg/L IAA，纳米活性炭颗粒2g/L，30g/L蔗糖和4.8g/L琼脂，并调节初始pH值为5.8。
步骤四、生根培养：将经步骤三中得到的荔枝健壮植株置于MS生根培养基中培养55天得到带根的荔枝树苗，其中，生根培养中的培养温度为27℃，光照强度为2500lux，光照周期为15小时/天。MS生根培养基包含：1/2MS，椰子乳60mg/L，2.0mg/L NAA，纳米活性炭颗粒2g/L，30g/L蔗糖和4.8g/L琼脂，并调节初始pH值为5.8。
步骤五：炼苗和移栽：先将步骤四中得到的带根的木鳖植株在温度25℃下炼苗2-4天，之后再移栽到沙土壤中生长45天，然后再移栽至大田生长，其中，大田的生长条件为：温度为28℃，相对湿度为80％，遮阳率为70％。
实施例3
椰子乳为椰子经100目纱布过滤之后得到的液体。
本发明提供一种荔枝树苗的培养方法，包括：
步骤一、荔枝外植体获取：在荔枝花芽萌发期，取荔枝花芽作为外植体，首先将荔枝花芽使用体积百分比9％的酒精溶液浸泡10min，之后使用自来水冲洗15min，然后用质量体积分数0.1％的次氯酸钠溶液消毒9min，最后用无菌水冲洗4次，除去表面水分得到荔枝外植体；
步骤二、分化培养：将步骤一中得到的荔枝外植体接种于MS分化培养基中培养30天直至荔枝外植体的侧芽分化长出丛生芽，其中，分化培养中的培养温度为25℃，光照强度为2250lux，光照周期为12.5小时/天；MS分化培养基包含：MS，椰子乳35mg/L，0.25mg/L ZT，0.6mg/L 6-BA，0.5mg/L NAA，纳米活性炭颗粒1.5g/L，27.5g/L蔗糖和5.3g/L琼脂，并调节初始pH值为5.8。
步骤三、壮苗培养：将步骤二中经过分化培养的荔枝外植体在MS壮苗培养基中培养30天得到荔枝健壮植株，其中，壮苗培养中的培养温度为25℃，光照强度为2250lux，光照周期为12.5小时/天；MS壮苗培养基包含：MS，椰子乳45mg/L，0.65mg/L 6-BA、0.5mg/L IAA，纳米活性炭颗粒1.5g/L，27.5g/L蔗糖和4g/L琼脂，并调节初始pH值为5.8。
步骤四、生根培养：将经步骤三中得到的荔枝健壮植株置于MS生根培养基中培养50天得到带根的荔枝树苗，其中，生根培养中的培养温度为25℃，光照强度为2250lux，光照周期为12.5小时/天。MS生根培养基包含：1/2MS，椰子乳55mg/L，1.5mg/L NAA，纳米活性炭颗粒1.5g/L，28g/L蔗糖和4g/L琼脂，并调节初始pH值为5.8。
步骤五：炼苗和移栽：先将步骤四中得到的带根的木鳖植株在温度25℃下炼苗3天，之后再移栽到沙土壤中生长45天，然后再移栽至大田生长，其中，大田的生长条件为：温度为24℃，相对湿度为80％，遮阳率为70％。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出的实施例。