本发明涉及到楠木繁育领域，尤其是一种楠木组培快繁方法。
背景技术：
楠木生长在南方，以云南、贵州、四川、广东、广西、海南省为主，楠木高大、枝叶互不相碍，叶如桑叶，大如中耳，四季不凋，新旧相换，城市绿化首选树。它的花呈黄色，实似丁香，青色，不可食用。树干高的达十多丈，树径 粗，气味芳香，木质坚硬耐水浸，是制作栋梁器物的上等好材料，这是城市绿化树木的好品种。楠木性味辛，性温，无毒。功能主治：霍乱吐下不止，煮汁服。枝可园功，治水肿，削楠木，桐木汁泡足。随着市场的发展，对楠木良种壮苗的需求日益增加，因此，如何快速扩繁楠木优良基因型显得十分必要。近年来，尤其是生物工程技术的快发展，组培快繁体系的建立，为林木的无性选育提供了一定的技术支撑。利用组织培养技术进行珍稀濒危物种及优良品系树种繁育，具有加速育种、缩短繁殖过程、节省空间、减少劳动、周年生产等特点。而目前楠木主要采用扦插、嫁接和播种等传统方式进行育苗，存在育苗成本高，苗木长势不好、参差不齐、良种潜力未能得到充分发挥等缺点，使得目前楠木优质壮苗的供应还无法满足市场的需求。为了满足市场对楠木苗的巨大需求，本发明以优良无性系嫩枝为外植体，通过外植体消毒、诱导培养、丛生芽增殖、不定根发生、炼苗移栽等过程获得了楠木离体再植株，建立楠木组织培养快速繁殖技术体系，不仅能有效地克服楠木传统育苗中的一些缺缺陷，而且对繁育出的无性系苗木在保持母本的优良性状起到一定的作用，有利于楠木优良无性系苗木的规模化生产。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供出一种楠木组培快繁方法，本发明以优良无性系嫩枝为外植体，通过外植体消毒、诱导培养、丛生芽增殖、不定根发生、炼苗移栽等过程获得了楠木离体再植株，建立楠木组织培养快速繁殖技术体系，从而实现了本发明的目的。
本发明的技术解决方案是这样的，一种楠木组培快繁方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）外植体采集及消毒：采取楠木树桩基部形态表征一致的当年生萌动状态的饱满嫩枝作为外植体，在流水下冲洗 4h，浸泡于6%洗衣粉溶液13分钟，用软毛刷6%洗衣粉溶液轻轻刷洗材料，再用自来水以滴水的形式冲洗 95min，用蒸馏水冲洗 6次，于超净工作台中以75%乙醇溶液浸泡62s，无菌水冲洗6次，再用含有0.06%吐温-20的0.6%升汞溶液消毒16min，无菌水冲洗6次后用无菌滤纸吸干表面的水分备用;
（2）诱导培养：将经步骤（1）处理后的嫩枝剪成约2cm的茎段并接种到诱导培养基进行丛生芽诱导培养,接种后每天光照15小时，光照强度为2300lx，培养温度为24℃，空气相对湿度为75%的条件下培养32天后统计诱导情况;
（3）丛生芽增殖：将步骤（2）诱导培养得到丛生芽接种到增殖培养基进行不定芽增殖培养,接种后每天光照15小时，光照强度为2300lx，培养温度为24℃，空气相对湿度为75%的条件下培养42天后统计发芽数;
（4）生根培养：将步骤（3）增殖中获得的植株从基部切下并接种至生根培养基中进行诱导生根,接种后置于每天光照15小时，光照强度为3200lx，置于培养温度为24℃，空气相对湿度为75%的条件下培养32天后统计生根情况;
（5）炼苗移栽：将生根培养基上获得的具备移栽条件的瓶苗进行炼苗，瓶苗移至常温下 6天后，打开瓶盖 4天，然后洗去附着于苗根系上的培养基，在 1000 倍的生物菌剂中浸泡 15min，然后移栽至盛有所设计的移栽培养基质的容器袋中进行培养，每个容器袋移栽1株生根苗,置于带有遮阴网的自动喷雾的塑料大棚内保温保湿温度控制在 36℃，湿度应保持在 75％左右，避免阳光直射，移栽32天后统计成活率。
步骤（2）所述的诱导培养基为：MS+1.1mg/L NAA+8.1mg/L 6-BA+3.1mg/L KT+1.6g/L AC+32g/L蔗糖+6.1g/L琼脂，pH为5.9。
步骤（3）所述的增殖培养基为：MS+0.6mg/L 2,4-D+6.0mg/L 6-BA+1.1mg/L NAA+1.6g/L AC+31g/L蔗糖+6.3g/L琼脂，pH为5.9。
步骤（4）所述的生根培养基为：White+1.1mg/L NAA+3.1mg/L IBA+31g/L蔗糖+6.1g/L琼脂，pH为5.9。
步骤（5）所述的移栽培养基质为由泥炭土:蛭石:珍珠炭:椰糠＝1:2:2:2混合而成基质。
与现有技术相比本发明的优点是：楠木为我国南方特有的主要造林树种。近年来随着集体林权制度改革的推进和商品材价格的上涨，林农经营楠木的积极性加大，楠木经营水平和良种意识的不断提高，对楠木良种壮苗的需求日益增加。而目前楠木主要采用扦插、嫁接和播种等传统方式进行育苗，存在育苗成本高，苗木长势不好、参差不齐、良种潜力未能得到充分发挥等缺点，使得目前楠木优质壮苗的供应还无法满足市场的需求。为了满足市场对楠木苗的巨大需求，本发明以优良无性系嫩枝为外植体，通过外植体消毒、诱导培养、丛生芽增殖、不定根发生、炼苗移栽等过程获得了楠木离体再植株，建立楠木组织培养快速繁殖技术体系，可以保持楠木无性系母本的优良性状，有利于楠木优良无性系苗木的规模化生产。
具体实施方式
下面实施例是对本发明的进一步说明。
实施例1
（1）外植体采集及消毒：采取楠木树桩基部形态表征一致的当年生萌动状态的饱满嫩枝作为外植体，在流水下冲洗 2h，浸泡于4%洗衣粉溶液6min，用软毛刷3%洗衣粉溶液轻轻刷洗材料，再用自来水以滴水的形式冲洗 62min，用蒸馏水冲洗 4次，于超净工作台中以75%乙醇溶液浸泡21s，无菌水冲洗6次，再用含有0.02%吐温-20的0.2%升汞溶液消毒6min，无菌水冲洗4次后用无菌滤纸吸干表面的水分备用。
（2）诱导培养：将经步骤（1）处理后的嫩枝剪成约2cm的茎段并接种到诱导培养基进行丛生芽诱导培养。接种后置于每天光照15小时，光照强度为1600lx，置于培养温度为22℃，空气相对湿度为75%的条件下培养32天后诱导率达100%。所述的诱导培养基为：MS+0.3mg/L NAA+6.0mg/L 6-BA+1.6mg/L KT+1.0 g/L AC+26g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.6。
（3）丛生芽增殖：将步骤（2）诱导培养得到丛生芽接种到增殖培养基进行不定芽增殖培养。接种后置于每天光照12小时，光照强度为1600lx，培养温度为22℃，空气相对湿度为75%的条件下培养43天后芽数10个以上。所述的增殖培养基为：MS+0.3mg/L 2,4-D+3.8mg/L 6-BA+0.8mg/L NAA+1.5g/L AC+ 28g/L蔗糖+5.0g/L琼脂，pH为5.6。
（4）生根培养：将步骤（3）增殖中获得的植株从基部切下并接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后每天光照15小时，光照强度为2100lx，培养温度为22℃，空气相对湿度为75%的条件下培养32天后生根达到96%以上。所述的生根培养基为：White+0.5mg/L NAA+1.8mg/LIBA+19g/L蔗糖+3.9g/L琼脂，pH为5.6。
（5）炼苗移栽：将生根培养基上获得的具备移栽条件的瓶苗进行炼苗，瓶苗移至常温下 5天后，打开瓶盖 3天，然后洗去附着于苗根系上的培养基，在 1000 倍的生物菌剂中浸泡 6min，然后移栽至盛有所设计的移栽培养基质的容器袋中进行培养，每个容器袋移栽1株生根苗。置于带有遮阴网的自动喷雾的塑料大棚内保温保湿温度控制在 26℃，湿度应保持在 75％左右，避免阳光直射，移栽32天后成活率达到93以上。所述的移栽培养基质为由泥炭土:蛭石:珍珠炭:椰糠＝1:2:2:2混合而成基质。
实施例2
（1）外植体采集及消毒：采取楠木树桩基部形态表征一致的当年生萌动状态的饱满嫩枝作为外植体，在流水下冲洗 4h，浸泡于4%洗衣粉溶液9min，用软毛刷4%洗衣粉溶液轻轻刷洗材料，再用自来水以滴水的形式冲洗 72min，用蒸馏水冲洗 5次，于超净工作台中以75%乙醇溶液浸泡32s，无菌水冲洗6次，再用含有0.02%吐温-20的0.2%升汞溶液消毒8min，无菌水冲洗6次后用无菌滤纸吸干表面的水分备用。
（2）诱导培养：将经步骤（1）处理后的嫩枝剪成约2.5cm的茎段并接种到诱导培养基进行丛生芽诱导培养。接种后每天光照15小时，光照强度为2300lx，培养温度为24℃，空气相对湿度为75%的条件下培养32天后诱导率达98%。所述的诱导培养基为：MS+0.5mg/LNAA+6.5mg/L6-BA+2.5mg/L KT+1.5g/LAC+33g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.6。
（3）丛生芽增殖：将步骤（2）诱导培养得到丛生芽接种到增殖培养基进行不定芽增殖培养。接种后每天光照15小时，光照强度为2600lx，培养温度为24℃，空气相对湿度为75%的条件下培养42天后芽数10个以上。所述的增殖培养基为：MS+0.3mg/L 2,4-D+3.8mg/L 6-BA+0.55mg/L NAA+1.25g/L AC+ 26g/L蔗糖+4.8g/L琼脂，pH为5.6。
（4）生根培养：将步骤（3）增殖中获得的植株从基部切下并接种至生根培养基中进行诱导生根。接种后每天光照15小时，光照强度为2300lx，培养温度为22℃，空气相对湿度为75%的条件下培养32天后生根达到96%以上。所述的生根培养基为：White+1.2mg/LNAA+2.2mg/LIBA+22g/L蔗糖+4.2g/L琼脂，pH为5.6。
（5）炼苗移栽：将生根培养基上获得的具备移栽条件的瓶苗进行炼苗，瓶苗移至常温下 5天后，打开瓶盖 4天，然后洗去附着于苗根系上的培养基，在 1000 倍的生物菌剂中浸泡 8min，然后移栽至盛有所设计的移栽培养基质的容器袋中进行培养，每个容器袋移栽1株生根苗。置于带有遮阴网的自动喷雾的塑料大棚内保温保湿温度控制在 24℃，湿度应保持在 75％左右，避免阳光直射，移栽32天后成活率达到98以上。所述的移栽培养基质为由泥炭土:蛭石:珍珠炭:椰糠＝1:2:2:2混合而成基质。