本发明涉及五加皮树种植领域，特别是一种五加皮组培快繁方法。
背景技术：
五加皮为五加科植物，细柱五加 Acanthopanaxgracilistylus W.W.Smith 的干燥根皮。主产湖北、河南、四川、湖南、安徽。夏、秋两季挖根，趁鲜用刀剥皮或将根打裂剥皮，洗净晒干。药性：根皮呈不规则卷筒状，长5~15cm，直径0.4~1.4cm,厚约0.2cm。外表面灰褐色，有稍扭曲的纵皱纹及横长皮孔，内表面淡黄色或灰黄色，有细纵纹。体轻，质脆，易折断，断面不整齐，灰白色。气微香，味微辣而苦。以皮厚、粗长、气香、断面色灰白，无木心者为佳。主要成价份：根皮含挥发油及树脂。油中主要成份为4-甲基水杨醛等。此外，尚含鞣质、棕榈酸、亚麻酸及维生素A及B1等。主治功用：祛风湿，补肝肾，强筋骨，利水。用于风湿痹证，筋骨痿软，体虚乏力，小儿行迟，水肿，脚气。五加皮是一种具有多种药理功效的珍稀名贵药用植物，也是一种最为理想的人体抗衰老保健中药材。其干燥树皮可入药，具有补肾、健腰、强筋、壮骨、利水等功效。且久服轻身耐老、延年益寿，因此被称为中药之上品。由于五加皮种子发芽率低下，远远不能满足大规模生产的需要。利用植物组织培养技术能有效解决濒危珍稀物种拯救和野生植物资源匮乏的问题。因此很有必要建立五加皮组织培养技术，为其大规模工厂化生产奠定基础。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供出一种五加皮组培快繁方法，以五加皮树带芽茎段为外植体，经过芽诱导、芽增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等过程实现了五加皮的离体再生，从而实现了本发明的目的。
本发明的一种五加皮组培快繁方法，其特征在于包括以下步骤：
步骤1，芽诱导培养：以五加皮树带芽茎段作为外植体，剪去叶片，切成6cm长的带有5个腋芽的节段先用洗衣粉溶液浸泡12min，再用毛刷刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗5h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒32s后用无菌水洗6次，再用0.1%升汞溶液消毒30min，用无菌水冲洗8次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后接种到芽诱导培养基进行芽诱导，接种后先在29℃条件下全暗培养5天，然后每天光照10小时，光照强度为2500lx条件下培养32天，统计其芽诱导率及生长情况；
步骤2，增殖培养：将步骤（1）培养得到的生长正常、有明显茎、叶结构的芽体切下并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在29℃条件下全暗培养5天，然后每天光照1小时，光照强度为2500lx，培养温度为29℃的条件下培养32天后观察生长情况和芽增殖情况。多次反复切割芽体进行继代培养，得到丛生芽；
步骤3，生根培养：将步骤（1）或（2）过程获得的高度约为3.8cm、生长良好、无褐化、玻璃化和白化现象的不定芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在29℃条件下全暗培养5天，然后每天光照1小时，光照强度为3200lx，培养温度为29℃的条件下培养36天后统计生根情况；
步骤4，炼苗移栽：将步骤（3）获得的高约9cm的生长良好且健壮的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土：珍珠岩＝4:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度。待幼苗成活后再移栽大田。
步骤（1）所述的芽诱导培养基为：MS+6mg/L6-BA+3mg/L NAA+32g/L蔗糖+8.0g/L琼脂，pH为5.9。
步骤（2）所述的增殖培养基为：MS+1.5mg/LNAA+8mg/L 6-BA+32g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.9。
步骤（3）所述的生根培养基为：1/4MS+2mg/L NAA+2mg/L IBA+32g/L蔗糖+8.0g/L琼脂，pH为5.9。
与现有技术相比本发明的优点是：通过植物组织培养技术短时间内快速获得大量五加皮优良品种苗木的方法。以五加皮带芽茎段为外植体，经过芽诱导、芽增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等过程实现了五加皮的离体再生，为其大量选育、快速繁殖、新品种推广提供技术支持。
具体实施方式
下面实施例是对本发明的进一步说明。
实施例1：
（1）芽诱导培养：以五加皮树带芽茎段作为外植体，剪去叶片，切成2cm长的带有1个腋芽的节段先用洗衣粉溶液浸泡4min，再用软毛刷轻轻刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗3h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒4s后用无菌水洗4次，再用0.1%升汞溶液消毒15min，用无菌水冲洗5次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后接种到芽诱导培养基进行芽诱导，接种后先在26℃条件下全暗培养2天，然后每天光照9小时，光照强度为1300lx条件下培养28天，统计其芽诱导率及生长情况，芽诱导率为88%。所述的芽诱导培养基为：MS+2mg/L6-BA+0.4mg/L NAA+24g/L蔗糖+3.6g/L琼脂，pH为5.6。
（2）增殖培养：将步骤（1）培养得到的生长正常、有明显茎、叶结构的芽体切下并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在26℃条件下全暗培养2天，然后每天光照11小时，光照强度为1100lx，培养温度为28℃的条件下培养31天后观察生长情况和芽增殖情况。多次反复切割芽体进行继代培养，以得到更多的丛生芽，新生芽体生长健壮，增殖系数为5.1。所述的增殖培养基为MS+0.6mg/LNAA+4mg/L 6-BA+31g/L蔗糖+6.1g/L琼脂，pH为5.6。
（3）生根培养：将步骤（1）或（2）过程获得的高度约为4cm、生长良好、无褐化、玻璃化和白化现象的不定芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在26℃条件下全暗培养2天，然后每天光照12小时，光照强度为2500lx，培养温度为26℃的条件下培养36天后统计生根情况，生根率为92.5%。所述的生根培养基为：1/4MS+0.6mg/L NAA+0.3mg/L IBA+16g/L蔗糖+3.6g/L琼脂，pH为5.6。
（4）炼苗移栽：将步骤（3）获得的高约10cm的生长良好且健壮的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗6天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土：珍珠岩＝4:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度。待幼苗成活后再移栽大田，移栽成活率为89.6%。
实施例2：
（1）芽诱导培养：以五加皮树带芽茎段作为外植体，剪去叶片，切成6cm长的带有5个腋芽的节段先用洗衣粉溶液浸泡12min，再用软毛刷轻轻刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗2h后置于超净工作台中，先用75%乙醇消毒18s后用无菌水洗8次，再用0.1%升汞溶液消毒20min，用无菌水冲洗5次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后接种到芽诱导培养基进行芽诱导，接种后先在26℃条件下全暗培养4天，然后每天光照12小时，光照强度为2500lx条件下培养33天，统计其芽诱导率及生长情况，芽诱导率为84.5%。所述的芽诱导培养基为：MS+6mg/L6-BA+0.2mg/L NAA+33g/L蔗糖+3.9g/L琼脂，pH为5.6。
（2）增殖培养：将步骤（1）培养得到的生长正常、有明显茎、叶结构的芽体切下并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在26℃条件下全暗培养2天，然后每天光照12小时，光照强度为2000lx，置于培养温度为26℃的条件下培养33天后观察生长情况和芽增殖情况。多次反复切割芽体进行继代培养，以得到更多的丛生芽，新生芽体生长健壮，增殖系数为6.1。所述的增殖培养基为MS+0.2mg/LNAA+5mg/L 6-BA+35g/L蔗糖+6.8g/L琼脂，pH为5.8。
（3）生根培养：将步骤（1）或（2）过程获得的高度约为4cm、生长良好、无褐化、玻璃化和白化现象的不定芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在26℃条件下全暗培养3天，然后每天光照12小时，光照强度为3000lx，培养温度为26℃的条件下培养38天后统计生根情况，生根率为95.5%。所述的生根培养基为：1/4MS+1.0mg/L NAA+0.6mg/L IBA+18g/L蔗糖+3.5g/L琼脂，pH为5.6。
（4）炼苗移栽：将步骤（3）获得的高约9cm的生长良好且健壮的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗6天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土：珍珠岩＝4:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度。待幼苗成活后再移栽大田，移栽成活率为93.5%。