技术领域
本发明属于组织培养技术植物再生的方法，尤其涉及一种基于组织培养技术的油橄榄育苗方法。
背景技术：
油橄榄原产于小亚细亚，是一种世界著名的木本油料植物，迄今已有3000年的栽培历史，其主要的育苗方法：播种育苗、扦插繁殖、嫁接繁殖和组织培养，播种育苗、扦插繁殖和嫁接繁殖已经是很成熟的技术，组织培养是一种快速高效的繁殖搜狐段，在油橄榄这一树种上开展的研究还很少，还处于研究的初步阶段，因此，继续一种通过组织培养技术的油橄榄育苗方法。
技术实现要素：
本发明目的在于提供了一种基于组织培养技术的油橄榄育苗方法。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
基于组织培养技术的油橄榄育苗方法，包括如下步骤：
(1)外植体的选择和处理：选取油橄榄健康植株茎尖作为外植体，并进行表面消毒处理；
(2)外植体的诱导：将消毒后的外植体接种到愈伤组织诱导培养基white+6-BA2.5mg/L+NAA0.1mg/L+GA32.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5.8g/L中进行培养；
(3)愈伤组织的增殖培养：将步骤(2)培养后的愈伤组织转接到增殖培养基white+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5.8g/L中进行培养；
(4)生根培养：将步骤(3)培养生长出的芽体切下转接到生根培养基1/2MS+6-BA0.3mg/L+NAA2.0mg/L+IBA0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5.8g/L中进行培养；
(5)炼苗和移栽：待步骤(4)中的培养出来的油橄榄苗高为3～5cm时，打开瓶盖，在室内炼苗6～8天后，将油橄榄苗从培养瓶中取出，洗掉根部的培养基，将其移栽至育苗袋中；
上述所有培养基的培养温度为23～27℃、每天光照12～16小时、关照强度为1800～2300lx、pH值为5.6～6.5。
上述方案，步骤(1)中所述消毒是指：将外植体放入浓度为1％的洗衣粉水中浸泡5min，并用毛刷刷去表面的污垢，然后用无菌水清洗3～5次后转入超净工作台，接着用浓度为75％的酒精消毒30s后，再用浓度为0.1％的升汞溶液消毒15～20min，最后用无菌水冲洗5～6次后用已灭菌的滤纸吸干其水分。
上述方案，步骤(5)中所述育苗袋中装有如下重量份的原料：80～100份的细粉山泥、20～30份草木灰和8～10份椰；并保证育苗袋的温度为21～28℃，相对湿度为80～90％。
本发明具有的有益效果：
本发明的提供的油橄榄育苗方法通过组织培养技术实现，培育出来的油橄榄苗根质量好、易于移栽和成活率高；其生根率高达85％，移栽后的成活率为92％；本发明适用于品质优良，且播种繁殖成活率低的橄榄树品种。
具体实施方式
实施例1
本实施例提供的基于组织培养技术的油橄榄育苗方法，包括如下步骤：
(1)外植体的选择和处理：选取油橄榄健康植株茎尖作为外植体，并进行表面消毒处理；所述消毒是指：将外植体放入浓度为1％的洗衣粉水中浸泡5min，并用毛刷刷去表面的污垢，然后用无菌水清洗3～5次转入超净工作台，再用浓度为75％的酒精消毒30s，再用浓度为0.1％的升汞溶液消毒15～20min，然后用无菌水冲洗5～6次，最后用已灭菌的滤纸吸干其水分；
(2)外植体的诱导：将消毒后的外植体接种到愈伤组织诱导培养基white+6-BA2.5mg/L+NAA0.1mg/L+GA32.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5.8g/L中进行培养；
(3)愈伤组织的增殖培养：将步骤(2)培养后的愈伤组织转接到增殖培养基white+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5.8g/L中进行培养；
(4)生根培养：将步骤(3)培养生长出的芽体切下转接到生根培养基1/2MS+6-BA0.3mg/L+NAA2.0mg/L+IBA0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5.8g/L中进行培养；培养30天后，其生根率为85％；
(5)炼苗和移栽：待步骤(4)中的培养出来的油橄榄苗高为5cm时，打开瓶盖，在室内炼苗7天后，将油橄榄苗从培养瓶中取出，洗掉根部的培养基， 将其移栽至育苗袋中；所述育苗袋中装有如下重量份的原料：90份的细粉山泥、15份草木灰和9份椰；并保证育苗袋的温度为21～28℃，相对湿度为80～90％；在育苗袋中培育3个月后，其成活率为92％。
上述所有培养基的培养温度为25℃、每天光照14小时、关照强度为2000lx、pH值为6.0。
实施例2
本实施例提供的基于组织培养技术的油橄榄育苗方法与实施例1相同，仅将所有培养基的培养温度为23℃、每天光照12小时、关照强度为1800lx、pH值为5.6；其生根率为75％，移栽后的成活率为89％，生长出来的油橄榄树根明显没有实施例1强壮。
实施例3
本实施例提供的基于组织培养技术的油橄榄育苗方法与实施例1相同，仅将所有培养基的培养温度为27℃、每天光照16小时、关照强度为2300lx、pH值为6.5；其生根率为80％，移栽后的成活率为85％，生长出来的油橄榄树根明显没有实施例1强壮，但是比实施例2的要好。
本发明所举实施方式或者实施例对本发明的目的、技术方案和优点进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所举实施方式或者实施例仅为本发明的优选实施方式而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内对本发明所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。