专利名称：一种苏丹草种子组织培养技术的制作方法
技术领域：
一种苏丹草种子组织培养技术属于生物技术领域，更具体的说是一种利用苏丹草的种子为外植体进行组织培养的技术。
背景技术：
苏丹草为禾本科高粱属一年生植物，原产于非洲的苏丹，因其饲草产量高，再生能力强，营养价值丰富，适应范围广等优点，在我国大部分地区都有栽种。组织培养是指在无菌条件下利用人工培养基对植物组织进行培养，是生物工程研究的基础，是进行遗传转化和植物改良研究的基本环节。相比利用幼穗、叶、茎等为外植体的组织培养方法，以种子为外植体进行组织培养具有不受季节限制和取材方便的优点。目前，以苏丹草种子为外植体的组织培养的技术还未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种以苏丹草种子为外植体的组织培养技术，为深入进行遗传转化和性状改良提供研究平台。本发明是这样实现的
一种苏丹草种子组织培养技术包括以下技术环节
①种子消毒将苏丹草种子放在自来水下冲洗5-10min，在超净工作台上，用70%酒精处理30s (轻轻搅动)，然后放入O. 1%升汞中处理15 min后，无菌水冲洗4_5次；
②震荡浸泡将消毒种子转入盛有无菌水的小三角瓶中，放在振荡器上振荡12h左
右；
③愈伤组织诱导在超净工作台上用消毒小刀将上述处理好的种子切成两块，将处理好的种子接种在愈伤组织诱导培养基中，每瓶接种4个半粒种子，放入培养室培养；
④愈伤组织诱导培养基配方MS基本培养基加入2，4-DO. 5mg/L。培养室温度(25±1) °C，光源为40W日光灯，光照时间12h/d;
⑤将诱导的愈伤组织再接种到继代培养基中培养；
⑥继代培养基配方MS培养基加2，4-DI. Omg/L ；
⑦在继代培养基中培养15天左右，将苏丹草愈伤转入到分化培养基中；
⑧分化培养基配方MS培养基加入6-BA2. Omg/L ；
⑨在分化培养基中培养40天左右，使之长成正常的小植株；
⑩将小植株转移到装有蛭石营养钵中，将其放入25°C培养箱炼苗一周左右即可移栽。本发明的有益效果
一种以苏丹草种子为外植体的组织培养技术可以为深入进行苏丹草的遗传转化和性状改良提供研究平台。例如在组织培养的环节中，可以对愈伤组织进行化学诱变，也可以对培养体进行染色体加倍，还可以对愈伤组织进行优良基因的导入接种，进行转基因研究等等。通过这些手段，可以高效快速的培育出具有各种优异性状的苏丹草新品种。
具体实施例方式具体实施方式
举例1，苏丹草品系722种子的组织培养
①种子消毒将苏丹草种子放在自来水下冲洗10min，在超净工作台上，用70%酒精处理30s (轻轻搅动)，然后放入O. 1%升汞中处理15 min后，无菌水冲洗5次；
②震荡浸泡将消毒种子转入盛有无菌水的小三角瓶中，放在振荡器上振荡12h ；
③愈伤组织诱导在超净工作台上用消毒小刀将上述处理好的种子切成两块，将处理好的种子接种在愈伤组织诱导培养基中，每瓶接种4个半粒种子，放入培养室培养；
④愈伤组织诱导培养基配方MS基本培养基加入2，4-DO. 5mg/L。培养室温度
(25±1) °C，光源为40W日光灯，光照时间12h/d ；
⑤将诱导的愈伤组织再接种到继代培养基中培养；
⑥继代培养基配方MS培养基加2，4-DI. Omg/L ；
⑦在继代培养基中培养15天，将苏丹草愈伤转入到分化培养基中；
⑧分化培养基配方MS培养基加入6-BA2. Omg/L ；
⑨在分化培养基中培养40天，使之长成正常的小植株；
⑩将小植株转移到装有蛭石营养钵中，将其放入25°C培养箱炼苗8天移出室外定植。
具体实施方式
举例2，苏丹草品系Sa种子的组织培养
①种子消毒将苏丹草种子放在自来水下冲洗10min，在超净工作台上，用70%酒精处理30s (轻轻搅动)，然后放入O. 1%升汞中处理15 min后，无菌水冲洗5次；
②震荡浸泡将消毒种子转入盛有无菌水的小三角瓶中，放在振荡器上振荡12h ；
③愈伤组织诱导在超净工作台上用消毒小刀将上述处理好的种子切成两块，将处理好的种子接种在愈伤组织诱导培养基中，每瓶接种4个半粒种子，放入培养室培养；
④愈伤组织诱导培养基配方MS基本培养基加入2，4-DO. 5mg/L。培养室温度(25±1) °C，光源为40W日光灯，光照时间12h/d ；
⑤将诱导的愈伤组织再接种到继代培养基中培养；
⑥继代培养基配方MS培养基加2，4-DI. Omg/L ；
⑦在继代培养基中培养15天，将苏丹草愈伤转入到分化培养基中；
⑧分化培养基配方MS培养基加入6-BA2. Omg/L ；
⑨在分化培养基中培养40天，使之长成正常的小植株；
⑩将小植株转移到装有蛭石营养钵中，将其放入25°C培养箱炼苗10天，移出室外定植。
权利要求
1. 一种苏丹草种子组织培养技术包括以下技术环节 ①种子消毒将苏丹草种子放在自来水下冲洗5-10min，在超净工作台上，用70%酒精处理30s (轻轻搅动)，然后放入O. 1%升汞中处理15 min后，无菌水冲洗4_5次；②震荡浸泡将消毒种子转入盛有无菌水的小三角瓶中，放在振荡器上振荡12h左右； ③愈伤组织诱导在超净工作台上用消毒小刀将上述处理好的种子切成两块，将处理好的种子接种在愈伤组织诱导培养基中，每瓶接种4个半粒种子，放入培养室培养； ④愈伤组织诱导培养基配方MS基本培养基加入2，4-DO. 5mg/L,培养室温度(25±1) °C，光源为40W日光灯，光照时间12h/d; ⑤将诱导的愈伤组织再接种到继代培养基中培养； ⑥继代培养基配方MS培养基加2，4-DI. Omg/L ； ⑦在继代培养基中培养15天左右，将苏丹草愈伤转入到分化培养基中； ⑧分化培养基配方MS培养基加入6-BA2. Omg/L ； ⑨在分化培养基中培养40天左右，使之长成正常的小植株； ⑩将小植株转移到装有蛭石营养钵中，将其放入25°C培养箱炼苗一周左右即可移栽。
全文摘要
一种苏丹草种子组织培养技术属于生物技术领域，其主要过程有种子消毒、震荡浸泡、愈伤组织诱导培养、愈伤组织继代培养、愈伤组织分化培养、小苗炼苗培养。
文档编号A01H4/00GK102972298SQ20121052255
公开日2013年3月20日 申请日期2012年12月7日 优先权日2012年12月7日
发明者李杰勤, 王丽华, 詹秋文, 胡能兵, 林平, 王世建, 楚利 申请人:安徽科技学院