本发明涉及果树种植领域，具体涉及一种樱桃种子超低温保存方法及其解冻方法。
背景技术：
：樱桃采收后，将果皮果肉划破取出果核，并以清水洗除附着果核外的果肉，即可获得樱桃种子。樱桃种子在收获后，需要在短时间呢播种下去，否则种子内的营养物质将会快速的消耗殆尽，导致种子不萌芽。但是在实际的种植过程中，由于土地资源有限和受天气的影响，不可能做到种子收获后即用来播种。因此，急需一种樱桃种子的保存方式。技术实现要素：为了解决上述问题，本发明提供了一种樱桃种子超低温保存方法及其解冻方法。本发明是通过以下技术方案实现的。一种樱桃超低温种子的保存方法，具体包括以下步骤：（1）配制冷冻保护剂：冷冻保护剂由以下重量份的组分制成：MS液体培养基50-60份、氨基甲酸丁酯6-8份、岩芹酸10-15份、正丁砜11-13份、3-乙基-3-戊醇9-11份、氮杂环醇4-7份、聚丙二醇6-8份，采用以下方式制成：将氨基甲酸丁酯、岩芹酸、正丁砜、3-乙基-3-戊醇、氮杂环醇、聚丙二醇放入MS液体培养基中，搅拌5-7min，用200W超声波处理10min后放入冰箱中备用；其中MS培养基购于北京启维益成科技有限公司。（2）樱桃种子处理：将收获的樱桃种子，放入浸泡液中浸泡30-40min，其中浸泡液由以下重量份的组分制成：对硝基苯酚10-15份、甲基丙酮酸酯6-9份、肉桂酸铵3-5份、水30-35份；（3）冷冻处理：将处理后的种子，放入其重量18-20倍中的冷冻保护剂中，然后放入-9℃的环境中存放10-12小时，再放入-30℃的环境中存放8-10小时，最后放入液氮中保存。一种樱桃种子的解冻方法，包括以下步骤：用20-25℃的水不停地冲洗冻存管，直至冷冻保护剂解冻后，取出种子，用温度为30-35℃的95%的乙醇溶液冲洗种子3-5min，然后再用清水冲洗种子，用滤纸吸干种子上的水分，种子解冻完成。本发明的有益效果：本发明提供的冷冻保护剂可以有效的保护细胞内的营养物质和各种酶类物质，对种子本身不具有任何毒害作用，配制完成后，用超声波处理，可以使冷冻保护剂在MS液体培养基中均匀的分布，增加其渗透作用，使其能有效的保护樱桃种子。冷冻处理时，预先将其放入-9℃和-30℃的环境中，可以使冷冻保护剂慢慢的渗入种子表皮内部，增加种子对低温的抵抗能力。解冻时，用乙醇溶液冲洗种子，可以使种子保持较好的充实饱满度。采用本发明提供的方法，保存种子，可以使种子播种后发芽率高，种子遗传稳定性好，种子的发芽速度快，出苗整齐健壮。具体实施方式下面通过具体的实施例对本发明进行详细说明，但这些举例性实施方式的用途和目的仅用来例举本发明，并非对本发明的实际保护范围构成任何形式的任何限定，更非将本发明的保护范围局限于此。实施例1一种樱桃超低温种子的保存方法，具体包括以下步骤：（1）配制冷冻保护剂：冷冻保护剂由以下重量份的组分制成：MS液体培养基50份、氨基甲酸丁酯6份、岩芹酸10份、正丁砜11份、3-乙基-3-戊醇9份、氮杂环醇4份、聚丙二醇6份，采用以下方式制成：将氨基甲酸丁酯、岩芹酸、正丁砜、3-乙基-3-戊醇、氮杂环醇、聚丙二醇放入MS液体培养基中，搅拌5min，用200W超声波处理10min后放入冰箱中备用；（2）樱桃种子处理：将收获的樱桃种子，放入浸泡液中浸泡30min，其中浸泡液由以下重量份的组分制成：对硝基苯酚10份、甲基丙酮酸酯6份、肉桂酸铵3份、水30份；（3）冷冻处理：将处理后的种子，放入其重量18倍中的冷冻保护剂中，然后放入-9℃的环境中存放10小时，再放入-30℃的环境中存放8小时，最后放入液氮中保存。一种樱桃种子的解冻方法，包括以下步骤：用20℃的水不停地冲洗冻存管，直至冷冻保护剂解冻后，取出种子，用温度为30℃的95%的乙醇溶液冲洗种子3min，然后再用清水冲洗种子，用滤纸吸干种子上的水分，种子解冻完成。实施例2一种樱桃超低温种子的保存方法，具体包括以下步骤：（1）配制冷冻保护剂：冷冻保护剂由以下重量份的组分制成：MS液体培养基55份、氨基甲酸丁酯7份、岩芹酸13份、正丁砜12份、3-乙基-3-戊醇10份、氮杂环醇6份、聚丙二醇7份，采用以下方式制成：将氨基甲酸丁酯、岩芹酸、正丁砜、3-乙基-3-戊醇、氮杂环醇、聚丙二醇放入MS液体培养基中，搅拌6min，用200W超声波处理10min后放入冰箱中备用；（2）樱桃种子处理：将收获的樱桃种子，放入浸泡液中浸泡35min，其中浸泡液由以下重量份的组分制成：对硝基苯酚13份、甲基丙酮酸酯8份、肉桂酸铵4份、水32份；（3）冷冻处理：将处理后的种子，放入其重量19倍中的冷冻保护剂中，然后放入-9℃的环境中存放11小时，再放入-30℃的环境中存放9小时，最后放入液氮中保存。一种樱桃种子的解冻方法，包括以下步骤：用23℃的水不停地冲洗冻存管，直至冷冻保护剂解冻后，取出种子，用温度为33℃的95%的乙醇溶液冲洗种子4min，然后再用清水冲洗种子，用滤纸吸干种子上的水分，种子解冻完成。实施例3一种樱桃超低温种子的保存方法，具体包括以下步骤：（1）配制冷冻保护剂：冷冻保护剂由以下重量份的组分制成：MS液体培养基60份、氨基甲酸丁酯8份、岩芹酸15份、正丁砜13份、3-乙基-3-戊醇11份、氮杂环醇7份、聚丙二醇8份，采用以下方式制成：将氨基甲酸丁酯、岩芹酸、正丁砜、3-乙基-3-戊醇、氮杂环醇、聚丙二醇放入MS液体培养基中，搅拌7min，用200W超声波处理10min后放入冰箱中备用；（2）樱桃种子处理：将收获的樱桃种子，放入浸泡液中浸泡40min，其中浸泡液由以下重量份的组分制成：对硝基苯酚15份、甲基丙酮酸酯9份、肉桂酸铵5份、水35份；（3）冷冻处理：将处理后的种子，放入其重量20倍中的冷冻保护剂中，然后放入-9℃的环境中存放12小时，再放入-30℃的环境中存放10小时，最后放入液氮中保存。一种樱桃种子的解冻方法，包括以下步骤：用25℃的水不停地冲洗冻存管，直至冷冻保护剂解冻后，取出种子，用温度为35℃的95%的乙醇溶液冲洗种子5min，然后再用清水冲洗种子，用滤纸吸干种子上的水分，种子解冻完成。试验将收获的1000粒樱桃种子，随机平均分为5组，分别用实施例1、2、3的方式处理试验组1、2、3的种子，试验组4的种子收获晒干后，3天后全部进行种植，试验组5的种子，收获晒干后，放置在不透明的容器中储藏。每年春季，从试验组1、2、3、5种子中，选取50粒种子进行播种试验。各试验组的种子采用完全相同的播种方式，试验结果如表1所示：表1一种樱桃种子超低温保存方法及其解冻方法验证试验项目第一年种子发芽率（%）第二年种子发芽率（%）第三年种子发芽率（%）第四年种子发芽率（%）试验组1-95.194.993.4试验组2-95.995.294.7试验组3-95.495.094.1试验组495.6---试验组5-10.1种子腐烂种子腐烂从表1中可以看出，本发明提供的一种樱桃种子超低温保存方法及其解冻方法，可以完整的保护种子的活力，可以长时间的使种子保持较高的发芽率。当前第1页1 2 3