一种压力休克诱导星斑川鲽减数雌核发育方法与流程

文档序号:11071514阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种压力休克诱导星斑川鲽减数雌核发育方法,其特征在于,步骤为:

1)建立鲈鱼精子冷冻库:在鲈鱼性成熟期,选择发育至可产精液的雄性鲈鱼,采集精液,对活力达到80-90%以上的精子进行冷冻保存,建立精子冷冻库;

2)精子遗传物质灭活:将冷冻精子从液氮中取出并解冻;对精子进行紫外线灭活处理,使精子遗传物质失活,精子的活力保持在30-40%左右;

3)星斑川鲽未受精卵的采集及授精:选择性成熟的星斑川鲽雌鱼,每天5:00、17:00采卵,将上述灭活的鲈鱼精液加入星斑川鲽卵中,轻轻摇动混匀,精液和卵的受精最小体积比为100µL:4mL,加入2倍体积于卵量的海水受精,海水温度为13-14℃;

4)受精卵压力休克诱导:在受精后5min,将受精卵注入压力容器中,快速将压力提升至60 MPa,压力提升时间为8-10s,静水压持续时间10min,之后缓慢释放压力;

5)雌核发育卵的培养:将上述经过压力休克后的星斑川鲽受精卵利用海水清洗、沉淀过滤、除去沉淀死卵,将上浮受精卵加入13-14℃的海水,放在网箱中孵化培养。

2.根据权利要求1所述的一种压力休克诱导星斑川鲽减数雌核发育方法,其特征在于,所述步骤1)中对精子进行冷冻保存的方法为,将精液与冷冻保存液以体积比1:1的比例混合,分装到冷冻保存管中,然后放入-196℃的液氮中冷冻保存。

3.根据权利要求2所述的一种压力休克诱导星斑川鲽减数雌核发育方法,其特征在于,所述冷冻保存液的组成为80%的精子稀释液和20%的二甲基亚砜(DMSO),为体积比。

4.根据权利要求3所述的一种压力休克诱导星斑川鲽减数雌核发育方法,其特征在于,所述精子稀释液的组成为NaCl 3.526g/L, NaH2PO40.281g/L;NaHCO30.252g/L,KCl 0.389g/L,D-Glucose(D-葡萄糖)10.0g/L。

5.根据权利要求1所述的一种压力休克诱导星斑川鲽减数雌核发育方法,其特征在于,步骤2)中紫外线灭活处理是将冷冻精液与精子稀释液以1:5的体积比稀释,平铺于培养皿中,将培养皿置于紫外交联仪中,利用80mj/cm2紫外线照射。

6. 根据权利要求1所述的一种压力休克诱导星斑川鲽减数雌核发育方法,其特征在于,步骤3)中对发育迟缓的雌鱼注射促黄体素释放激素A210μg/kg, 促进星斑川鲽雌鱼性成熟。

7.根据权利要求1所述的一种压力休克诱导星斑川鲽减数雌核发育方法,其特征在于,步骤5)中网箱中孵化培养过程,孵化水温13.5-14.0℃,溶氧量保持在5.0-9mg/L;每日检查卵的发育情况,待发育至出膜前期,收集网箱中成活卵进行鱼苗培育。

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