一种烟草八倍体纯合植株的快速培养方法与流程

文档序号:19164903发布日期:2019-11-19 20:16阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种烟草八倍体纯合植株的快速培养方法,其特征在于,具体按照以下步骤进行:

种子处理:

步骤1,取四倍体烟草种子若干,于30℃温水中浸泡过夜8-10h后捞出,于25℃保湿黑暗催芽,以提高种子萌发率和萌发整齐度;

步骤2,待种子露白后,用0.2%秋水仙素溶液浸泡48h进行诱导,使染色体加倍;此时胚处于快速生长期,有利于八倍体诱导;

步骤3,去除秋水仙素溶液,露白种子于蒸馏水中漂洗3次,并浸泡2次,每次2h,以清除种子内残留的秋水仙素;

步骤4,清洗后的种子于25℃光照下培养3-5d,待子叶打开,生长成苗;

步骤5,待子叶完全打开后,选取生长缓、矮壮的变异植株为材料;

步骤6,将选取的植株去除种壳后,包于一层纱布中,用细线扎纱布开口处,于0.1%的hgcl2溶液中进行表面灭菌,无菌水清洗3次后接种于诱导增殖培养基ms+1.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa上;

步骤7,40d后,待不定芽生长至3-5cm,切取不定芽于生根培养基1/2ms+2.0mg/liba中,7-10d后即可生根;

步骤8,倍性鉴定及移栽:切取根尖用流式细胞仪进行倍性鉴定,并采用去壁低渗火焰干燥法进行染色体制片进行确认后移栽,即可筛选获得八倍体植株。

2.一种烟草八倍体纯合植株的快速培养方法,其特征在于,具体按照以下步骤进行:

茎尖处理:

步骤1,将快速生长的烟草植株茎尖附近展开和即将展开的叶片摘去,确保秋水仙素溶液能浸入茎尖快速生长部分;用棉花浸蘸0.2%秋水仙素包裹茎尖5d,塑料袋包裹棉花保湿;

步骤2,处理5d后去除棉花,待茎尖自由生长,7d后,茎尖叶片展开;

步骤3,取经诱导处理并继续生长的植株茎尖部位发生形态变化的叶片,进行表面灭菌;将叶片包于一层纱布中,用细线扎纱布开口处,于0.1%的hgcl2溶液中进行表面灭菌,无菌水清洗3次后接种于诱导增殖培养基ms+1.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa上;

步骤4,40d后,待不定芽生长至3-5cm,切取不定芽于生根培养基1/2ms+2.0mg/liba中,7-10d后即可生根;

步骤5,倍性鉴定及移栽:切取根尖用流式细胞仪进行倍性鉴定,并采用去壁低渗火焰干燥法进行染色体制片进行确认后移栽,即可筛选获得八倍体植株。

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