鸡粪沼液用于防治棉花枯萎病的应用及防治方法与流程

本发明涉及棉花枯萎病的生物防治领域，具体涉及鸡粪沼液用于防治棉花枯萎病的应用及防治方法。

背景技术：

棉花枯萎病是由尖孢镰刀菌(fusariumoxysporum)引起的一种世界性病害，自1931年传入我国，之后逐渐蔓延，于20世纪60年代达到高峰，分布广泛，危害严重，重病年份造成毁种绝收。尽管之后随着抗病品种的种植，该病得到有效控制，但随着抗虫棉的种植，棉花枯萎病又有回升趋势。分析主要原因，种植规模化、集中化导致轮作困难；抗病育种年限较长、工作量大且容易丧失抗性；化学农药很难达到棉株的维管束部位发挥作用，效果差且污染环境，不符合绿色可持续发展农业要求等。利用生物产品防治病虫害的发生具有经济、环境友好型等特点。随着沼气产品的大量使用，沼液作为有机肥的使用量逐渐增加。沼气发酵是由种类繁多的微生物共同参与的一个复杂的生化反应。发酵后产生的沼液和沼渣中含有大量元素n、p、k；微量元素fe、zn、b等及nh3、h2s、酚类、醛、酸等多种物质，发酵产物是一种能够改善土壤结构和生态系统的有机肥。随着集约化养殖的大量发展，沼气和沼渣的排放量越来越多，沼液的综合利用在沼液处理中扮演的角色越来越重要。

目前，鸡粪沼液在农业生产中主要作为改善棉花品质和产量的有机肥料，但是，鸡粪沼液用于防治棉花枯萎病尚未见报道。

技术实现要素：

本发明的目的是提供鸡粪沼液抑制棉花枯萎病菌的应用。

本发明的再一目的是提供鸡粪沼液在棉花枯萎病防治上的应用。

本发明的再一目的是提供鸡粪沼液防治棉花枯萎病的方法。

根据本发明的具体实施方式，本发明提供了鸡粪沼液在棉花枯萎病防治上的应用，其中鸡粪沼液可购买获得，例如“新壮态”品牌鸡粪沼液，是将鸡粪经厌氧发酵所得，其主要成分为氮、磷、钾、钙、硼、硒、锌、腐植酸、蛋白质、糖类、核酸、微生物代谢物等。

根据本发明的具体实施方式，向棉苗施加鸡粪沼液的方法包括：滴灌80l/ha～560l/ha施加鸡粪沼液，或者，喷施10～400倍稀释的鸡粪沼液。

据本发明的具体实施方式，提供了防治棉花枯萎病的方法，所述方法包括对棉苗施用鸡粪沼液的步骤。

根据本发明的具体实施方式，对棉苗滴灌浓度为0.25％～1.75％的鸡粪沼液稀释液，或者，对棉苗喷施10～400倍稀释的鸡粪沼液。

根据本发明的具体实施方式，对棉苗滴灌五次鸡粪沼液，或者，对棉苗喷施五次鸡粪沼液。

根据本发明的具体实施方式，试验结果表明：

1、鸡粪沼液对棉花枯萎病菌具有较好的抑制效果

将鸡粪沼液加入到pda培养基中，配制成不同浓度。在pda培养基中，当鸡粪沼液的浓度≧0.5％时，对枯萎病菌的抑制效果显著，最高抑制率可达100％。

2、鸡粪沼液对棉花枯萎病病菌分生孢子萌发具有较好的抑制效果

在查氏培养基中加入鸡粪沼液，配制成不同浓度；然后加入棉花枯萎病菌分生孢子，使分生孢子的终浓度为1×10⁶个ml^-1。25℃恒温培养，3h后镜检孢子萌发情况。鸡粪沼液不同浓度的处理均显著抑制棉花枯萎病菌的孢子萌发，最高抑制率达到93.1％。

3、鸡粪沼液对棉花枯萎病的防治作用

由温室盆栽试验结果可知，鸡粪沼液对棉花枯萎病有一定的防治作用。播种后4周对照组棉花枯萎病病情指数为60.6，而鸡粪沼液喷雾和灌根处理组最低病情指数分别为15.5和21.5，表明鸡粪沼液的两种使用方式均可以降低棉花枯萎病的发生。温室试验和病圃试验均显示鸡粪沼液对棉花枯萎病有很好的控制作用。鸡粪沼液作为鸡粪的厌氧发酵物，使用后不仅可以增加土壤肥力，还可以生物防治棉花枯萎病，因此，本发明具有很大的应用前景。

附图说明

图1为生长速率法测定鸡粪沼液对棉花枯萎病菌的抑菌效果图，其中，a为对照；b、c、d表示鸡粪沼液的体积分数为1.0％、4.0％、10％的处理。

图2鸡粪沼液叶面喷施防治棉花枯萎病效果图，其中，a：空白对照；b：浓度为1.75％的鸡粪沼液灌根处理。

图3鸡粪沼液灌根处理防治棉花枯萎病效果图，其中，a：空白对照；b：10倍鸡粪沼液稀释液叶面喷施处理。

具体实施方式

实施例1：生长速率法检测鸡粪沼液对棉花枯萎病病原菌菌丝生长的抑制作用

按照植物病害研究法常用的生长速率测定法，测定棉花枯萎病病原菌的生物活性：用直径5mm打孔器取菌落边缘生长旺盛的病原菌，放在鸡粪沼液处理的pda平板上面，以培养基内加等量的无菌水作为对照，每个处理重复5次，置于25℃恒温培养，用十字交叉法测定每个菌落的菌落直径，取其平均值，求出抑制菌丝生长率：

抑制菌丝生长率＝(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径-5)×100％

表1鸡粪沼液对棉花枯萎病病原菌菌丝生长的抑制作用

表1显示了鸡粪沼液对棉花枯萎病病原菌丝生长的抑制作用，最高抑制率可达100％。图1为生长速率法测定鸡粪沼液对棉花枯萎病菌的抑菌效果图，实施结果表明：鸡粪沼液对棉花枯萎病病原菌菌丝生长具有很好的抑制作用，随着鸡粪沼液浓度的增加，抑制率呈上升趋势；当鸡粪沼液浓度≧0.50％时，达到显著水平，当鸡粪沼液浓度达到10.00％时，抑菌率达到100％。

实施例2凹玻片法检测鸡粪沼液对棉花枯萎病病原菌分生孢子萌发的抑制作用

将棉花枯萎病菌分生孢子悬浮液用灭菌的纱布双重过滤、稀释，配制成浓度为1×10⁶个ml^-1，分生孢子悬浮液备用。将一定量的鸡粪沼液和200微升的孢子悬浮液用czapek液体培养基容至1.5ml，充分混匀，使鸡粪沼液的浓度分别为0.25％、0.500％、1.00％、2.00％、3.00％、4.00％、5.00％、7.00％、10.00％，每个浓度重复三次。吸取20微升上述混合液于凹玻片凹槽中，将凹玻片放入加有保湿纱布的培养皿中，25℃恒温培养，3h后镜检孢子萌发情况，每个处理3个重复，每个重复5个视野，计算孢子萌发率，以czapek液体培养基作为对照，计算抑制率。

表2鸡粪沼液对棉花枯萎病病原菌分生孢子萌发的抑制作用

表2显示鸡粪沼液对棉花枯萎病病原菌分生孢子萌发的影响，不同浓度的鸡粪沼液均能抑制孢子萌发，且效果显著，随着鸡粪沼液浓度的增加，抑制效果呈增加趋势，最高抑制率为93.1％。

实施例3鸡粪沼液对棉花枯萎病的防治效果

采用基质接种法，将棉花枯萎病菌的玉米沙粒培养物，以0.6％的质量比拌入无菌的生沙壤土中充分混合均匀，分装到直径6cm、高10cm的无地纸钵中；用55～60℃温水浸泡冀棉11种子12h，每钵8粒均匀播种，覆盖灭菌沙土约2cm厚。出苗后留苗5株，每个处理24个钵，每6个钵为一个重复，4次重复，随机排列。鸡粪沼液灌根处理和叶面喷施处理分开摆放。其中灌根试验设置7个不同浓度(见表3)，播种后即刻进行灌根处理，每钵用15.0ml的鸡粪沼液稀释液灌根，每4天灌根一次，共5次，对照为相应的清水处理，其他时间正常管理；叶面喷施设置6个不同浓度(见表4)，于子叶展开后进行，每钵喷施4.0ml鸡粪沼液稀释液，每4天喷施一次，共5次，对照为相应的清水处理，其他时间正常管理。温室温度控制在22℃-28℃，按5级分级标准进行病害的分级调查，计算病株率、病情指数和防治效果。

病情指数＝[σ(各级病株数×相应病级)/(调查总株数×4)]×100

表3温室环境条件下鸡粪沼液灌根对棉花枯萎病菌的抑制作用

表3显示了在温室环境条件下鸡粪沼液灌根对棉花枯萎病菌的抑制作用，如表3所示，结果表明在温室环境条件下，鸡粪沼液灌根对棉花枯萎病具有显著控制作用，1.75％鸡粪沼液灌根5次，对棉花枯萎病的防治效果达64.5％(图2)。

表4温室环境条件下喷施鸡粪沼液对棉花枯萎病菌的抑制作用

表4显示了在温室条件下喷施鸡粪沼液对棉花枯萎病菌的抑制作用，如表4所示，结果表明在温室条件下，喷施鸡粪沼液对棉花枯萎病具有很好的防治作用，当稀释倍数为50倍时，对棉花枯萎病的防效达51.1％；当鸡粪沼液的稀释10倍时，对棉花枯萎病的防治效果达68.8％(图3)。