本发明属于甘草组织培养技术领域，尤其涉及提高甘草种子萌发率的无菌播种方法的筛选方法。
背景技术：
甘草，（学名：Glycyrrhiza uralensis Fisch）别名：国老、甜草、乌拉尔甘草、甜根子。豆科、甘草属多年生草本，根与根状茎粗壮，是一种补益中草药。对人体很好的一种药，药用部位是根及根茎，药材性状根呈圆柱形，长25～100厘米，直径0.6～3.5厘米。外皮松紧不一，表面红棕色或灰棕色。根茎呈圆柱形，表面有芽痕，断面中部有髓。气微，味甜而特殊。功能主治清热解毒、祛痰止咳、脘腹等。喜阴暗潮湿，日照长气温低的干燥气候。甘草多生长在干旱、半干旱的荒漠草原、沙漠边缘和黄土丘陵地带。根和根状茎供药用。传统的甘草获取方法是采挖叶生植物资源，造成水土流失和严重土壤沙漠化，同时由于人们破坏性地对叶生甘草采挖，使野生植物几乎灭绝，对甘草的保护性利用迫在眉睫，但由于甘草种植发芽率不高和人们对其此生代谢物的需求，从而使甘草的组织培养对研究和生产具有重要作用，然而现有的筛选方法不适合于工作化大规模生产进行筛选。
铈是周期系第ΙΙΙ族副族镧系元素，一种稀土元素。原子序数58。稳定同位素：136、138、140、142。灰色金属，有展性。密度：正方晶体6.9，立方晶体6.7。熔点799℃，沸点3426℃。铈是一种银灰色的活泼金属，粉末在空气中易自燃，易溶于酸。铈的名称来源于小行星谷神星的英文名。铈在地壳中的含量约0.0046%，是稀土元素中丰度最高的。
技术实现要素：
基于现有技术存在上述问题，本发明提供提高甘草种子萌发率的无菌播种方法的筛选方法，通过使用单一变量法调种子预处理操作对甘草组织培养苗的生理影响，确定最适预处理操作和操作时间，并通过确定种子预处理操作反向确定基础培养基，同时引入组培苗的生长量作为筛选标准，更加适合商业工厂化生产。
一种提高甘草种子萌发率的无菌播种方法的筛选方法，其包括以下步骤：
步骤S10确定初步筛选范围，检索查阅相关文献资料，对比其他植物物种无菌播种中的种子预处理操作，确定预处理操作的初步筛选范围；
步骤S20选择外植体，选择健康、生长环境一致并且生长状态相似的甘草种子作为外植体，对外植体进行统一的消毒灭菌处理；
步骤S30对照培养，其以MS培养基为基础培养基，酪蛋白的浓度为0.5g/L、活性炭的浓度为0.15 mg/L、硝酸铈的浓度为3g/L，琼脂粉的浓度为10g/L、白砂糖的浓度为7g/L，配制成测试用培养基，分别接种相同量的甘草种子，并进行常规组织培养作为对照组，在常规培养的基础条件在添加进行种子预处理操作作为实验组，对照组和实验组都设置多个平行组；
步骤S40记录检测参数，培养7天后统计每个实验组和对照组的萌发的数量和褐化的数量，并计算萌发率和褐化率；
步骤S50生长量计算，分别将相同实验组或者对照组的甘草幼苗取出，用清水冲洗干净，擦干表面水分并对甘草幼苗进行称重，记录重量；
步骤S60计算评估因数，将重量数值缩小10倍，再加上萌发率减去褐化率计算出评估因数，对比不同浓度梯度的评估因数，挑选出数值最大的评估因数对应的种子预处理操作；
步骤S70缩小筛选范围，使用步骤S60中挑选出的预处理操作范围重复进行步骤S10-S60筛选预处理操作的时间范围；
步骤S80方向筛选基础培养基，使用步骤S70确定的最适预处理操作和时间搭配不同基础培养基，重复步骤S40和步骤S50，并使用步骤S60的计算方法计算评估因数，确定最适基础培养基。
优选地，所述的步骤S30中每个实验组或者对照组设置5-15个平行组。
优选地，所述的步骤S70中重复的次数是2-3次。
优选地，所述的步骤S80中不同的基础培养基包括MS培养基、N6培养基、B5培养基、Nitsh培养基、White培养基和Miller培养基。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的描述。
一种提高甘草种子萌发率的无菌播种方法的筛选方法，其包括以下步骤：
步骤S10确定初步筛选范围，检索查阅相关文献资料，对比其他植物物种无菌播种中的种子预处理操作，确定预处理操作的初步筛选范围；
步骤S20选择外植体，选择健康、生长环境一致并且生长状态相似的甘草种子作为外植体，对外植体进行统一的消毒灭菌处理；
步骤S30对照培养，其以MS培养基为基础培养基，酪蛋白的浓度为0.5g/L、活性炭的浓度为0.15 mg/L、硝酸铈的浓度为3g/L，琼脂粉的浓度为10g/L、白砂糖的浓度为7g/L，配制成测试用培养基，分别接种相同量的甘草种子，并进行常规组织培养作为对照组，在常规培养的基础条件在添加进行种子预处理操作作为实验组，对照组和实验组都设置多个平行组；
步骤S40记录检测参数，培养7天后统计每个实验组和对照组的萌发的数量和褐化的数量，并计算萌发率和褐化率；
步骤S50生长量计算，分别将相同实验组或者对照组的甘草幼苗取出，用清水冲洗干净，擦干表面水分并对甘草幼苗进行称重，记录重量；
步骤S60计算评估因数，将重量数值缩小10倍，再加上萌发率减去褐化率计算出评估因数，对比不同浓度梯度的评估因数，挑选出数值最大的评估因数对应的种子预处理操作；
步骤S70缩小筛选范围，使用步骤S60中挑选出的预处理操作范围重复进行步骤S10-S60筛选预处理操作的时间范围；
步骤S80方向筛选基础培养基，使用步骤S70确定的最适预处理操作和时间搭配不同基础培养基，重复步骤S40和步骤S50，并使用步骤S60的计算方法计算评估因数，确定最适基础培养基。
作为优选实施例，所述的步骤S30中每个实验组或者对照组设置10个平行组。
作为优选实施例，所述的步骤S70中重复的次数是3次。
作为优选实施例，所述的步骤S80中不同的基础培养基包括MS培养基、N6培养基、B5培养基、Nitsh培养基、White培养基和Miller培养基。
经过筛选确定如下种子预处理具有更高的萌发率和生长质量：采集完甘草种子后对种子进行机械摩擦10min或者使用98%的浓硫酸处理60min的预处理方法配合以MS培养基为基础培养基，酪蛋白的浓度为0.5g/L、活性炭的浓度为0.15 mg/L、硝酸铈的浓度为3g/L，琼脂粉的浓度为10g/L、白砂糖的浓度为7g/L的播种培养基具有更高的萌发率和生物质量。