本发明属于植物种子催芽领域，具体涉及一种黄瑞香种子的高效催芽方法。
背景技术：
黄瑞香(daphnegiraldiinitsche.)，属瑞香科，瑞香属植物，别名打结花、结香。野生黄瑞香主要分布于陕西、甘肃、四川、青海、宁夏等省区，河南、江西及山西等省区亦有分布，一般生长于海拔1600m左右山地。甘肃省主要分茎皮和根皮入药，称祖师麻，味辛、苦，性温，有小毒，具有祛风通络、祛瘀止痛之功效，临床用于跌打损伤、风湿性关节炎及止痛等，为民间治疗风湿和止痛的常用中药。制剂有祖师麻膏药、祖师麻关节止痛膏、祖师麻片、祖师麻注射液。
种子的休眠现象是植物为适应气候变化、温度差异、水分条件等环境因素并保持自身繁殖发展而形成的一种生物学特性，具有重要的意义。因而许多较为寒冷地区生长的植物种子在秋天果实成熟后在适宜的温度、湿度和光照条件下难以萌发，保持休眠状态直到来年春季才萌发。祁连山野生的黄瑞香生长在海波2500米左右的半荫半阳的缓坡地带，是云杉等乔木的伴生小灌木。为了适应祁连山寒冷的冬季和凉爽的夏季气候，黄瑞香具有较强的耐寒能力且其种子具有休眠特性。从7月黄瑞香果实成熟，一直到9月中下旬其果肉一直包裹着种子。
植物黄瑞香目前为野生资源，是中药材祖师麻的原植物，使用部位是根皮和茎皮，过度的不合理连根采挖方式，使植物资源受到严重破坏，导致祖师麻原植物极度紧缺。由于野生黄瑞香种子具有显著的休眠性，发芽率非常低，很难满足生产需求，这势必影响野生黄瑞香的人工繁殖和其药用价值的充分利用。cn102845199a公开了一种野生祖师麻种子繁育技术，其通过种子采集、种子层积、育苗、大田移栽定植、田间管护这些步骤完成种子繁育。采用上述步骤繁育祖师麻，可使祖师麻种子发芽率稳定的达到71.3％以上，层积处理后的种子成苗率达66％以上，经精选后成苗率达85％以上。野生祖师麻种子繁育技术研究的成功，标志着野生祖师麻进祖师麻人工种子繁育技术，其通过种子采集、种子行人工繁育种植已完全可以实现。cn103797931a公开了属于中药材种子质量鉴定及栽培领域的一种破除黄瑞香种子休眠的方法。该方法包括以下步骤：(1)种子消毒：将供试种子用高锰酸钾溶液浸泡消毒，用蒸馏水冲洗干净；(2)窖内湿藏：将步骤(1)得到的种子与湿砂混合后按堆堆放在菜窖内进行湿藏。本发明的黄瑞香种子高效催芽的方法，简便易行、原理可靠、可重复性好、效果好、可快速破除黄瑞香种子的休眠、能有效提高黄瑞香种子的发芽率和发芽势，工作效率高、重复性好，黄瑞香种子的发芽率达到30.47％，发芽势达到18.12％。提供一种快速解除野生黄瑞香种子休眠的方法是人工快速、大面积育苗的当务之急。
技术实现要素：
针对上述问题，本发明提出了一种黄瑞香种子的高效催芽方法，具体如下：
一种黄瑞香种子的高效催芽方法，至少包括先依次进行的25℃和30℃恒温静置步骤，和后进行的ga3溶液浸种步骤。
优选的，所述依次进行的25℃和30℃恒温处理步骤为：先25℃恒温箱中静置5-30天，再30℃恒温箱中静置5-30天；
优选的，所述ga3溶液浸种步骤为：用10-500mg·l-1ga3溶液浸种12h-48h，8h换溶液一次；然后用蒸馏水冲洗干净并室内阴干12h；
进一步优选的，所述依次进行的25℃和30℃恒温处理步骤为：先25℃恒温箱中静置15天，再30℃恒温箱中静置15天；
进一步优选的，所述ga3溶液浸种步骤为：用150mg·l-1ga3溶液浸种24h，8h换溶液一次；然后用蒸馏水冲洗干净并室内12小时阴干；
优选的，还包括依次进行的25℃和30℃恒温静置步骤之前的步骤和ga3溶液浸种步骤之后的步骤；所述依次进行的25℃和30℃恒温静置步骤之前的步骤为：采摘成熟到果皮呈深红色时的黄瑞香果实，搓洗去除果皮和果肉后室内阴干，从采摘到室内阴干共用3天；挑选饱满种子置于牛皮纸袋内备用；所述ga3溶液浸种步骤之后的步骤为：先，取ga3溶液浸种步骤处理过的种子，用5％的高锰酸钾溶液浸泡消毒10分钟，然后用蒸馏水冲洗干净；再，取河沙和高锰酸钾溶液浸泡消毒和蒸馏水冲洗处理过的种子按5:1的比例混匀于发芽盒内，置于7℃的冰箱中置25天。
本发明的采摘、去除果皮和果肉后、阴干、挑选处理步骤，目的在于挑选准备后续处理的种子；单独的25℃和30℃恒温处理步骤，目的在于促进生理后熟；单独的ga3溶液浸种处理步骤，目的在于缩短休眠时间；高锰酸钾溶液浸泡处理步骤，目的在于去消毒、抑制种子表面的微生物；河沙和种子混合置冰箱处理步骤，目的促进种皮破壳、出芽。
本发明中所述的ga3为赤霉素，所述的5％的高锰酸钾溶液为质量体积比，所述的河沙为湿河沙，握能成团、松能散开。
本发明方法通过恒温静置处理种子使种子完成生理后熟，从而有利于休眠的打破；进一步的赤霉素浸种和低温层积的结合可显著的缩短其休眠的打破时间，从采种到种子休眠解除、种子裂口，前后58天左右就达到了92％的裂口率。
本发明的有益效果是，本发明提出了一种黄瑞香种子的高效催芽方法，处理步骤简单，容易操作，可重复性高，方便推广，所述设备和试剂普通，价格低廉，更重要的是破除种子休眠的效率高，需要的时间短。
具体实施方式
为详细说明本发明之技术内容、构造特征、所达成目的及功效，以下兹例举实施例详予说明。
实施例1
一种黄瑞香种子的高效催芽方法，包括以下步骤：
s1，采摘成熟到果皮呈深红色时的黄瑞香果实，搓洗去除果皮和果肉后室内阴干，从采摘到室内阴干共用3天；挑选饱满种子置于牛皮纸袋内备用；
s2，取s1步骤处理过的种子，25℃恒温箱中静置5天；
s3，取s2步骤处理过的种子，30℃恒温箱中静置5天；
s4，取s3步骤处理过的种子，用10mg·l-1ga3溶液浸种12h，8h换溶液一次；然后用蒸馏水冲洗干净并室内12小时阴干；
s5，取s4步骤处理过的种子，用5％的高锰酸钾溶液浸泡消毒10分钟，然后用蒸馏水冲洗干净；
s6，取河沙和s5步骤处理过的种子按5:1的比例混匀于发芽盒内，置于7℃的冰箱中置25天。
实施例2
一种黄瑞香种子的高效催芽方法，包括以下步骤：
s1，采摘成熟到果皮呈深红色时的黄瑞香果实，搓洗去除果皮和果肉后室内阴干，从采摘到室内阴干共用3天；挑选饱满种子置于牛皮纸袋内备用；
s2，取s1步骤处理过的种子，25℃恒温箱中静置5天；
s3，取s2步骤处理过的种子，30℃恒温箱中静置5天；
s4，取s3步骤处理过的种子，用500mg·l-1ga3溶液浸种48h，8h换溶液一次；然后用蒸馏水冲洗干净并室内12小时阴干；
s5，取s4步骤处理过的种子，用5％的高锰酸钾溶液浸泡消毒10分钟，然后用蒸馏水冲洗干净；
s6，取河沙和s5步骤处理过的种子按5:1的比例混匀于发芽盒内，置于7℃的冰箱中置25天。
实施例3
一种黄瑞香种子的高效催芽方法，包括以下步骤：
s1，采摘成熟到果皮呈深红色时的黄瑞香果实，搓洗去除果皮和果肉后室内阴干，从采摘到室内阴干共用3天；挑选饱满种子置于牛皮纸袋内备用；
s2，取s1步骤处理过的种子，25℃恒温箱中静置30天；
s3，取s2步骤处理过的种子，30℃恒温箱中静置30天；
s4，取s3步骤处理过的种子，用10mg·l-1ga3溶液浸种12h，8h换溶液一次；然后用蒸馏水冲洗干净并室内12小时阴干；
s5，取s4步骤处理过的种子，用5％的高锰酸钾溶液浸泡消毒10分钟，然后用蒸馏水冲洗干净；
s6，取河沙和s5步骤处理过的种子按5:1的比例混匀于发芽盒内，置于7℃的冰箱中置25天。
实施例4
一种黄瑞香种子的高效催芽方法，包括以下步骤：
s1，采摘成熟到果皮呈深红色时的黄瑞香果实，搓洗去除果皮和果肉后室内阴干，从采摘到室内阴干共用3天；挑选饱满种子置于牛皮纸袋内备用；
s2，取s1步骤处理过的种子，25℃恒温箱中静置30天；
s3，取s2步骤处理过的种子，30℃恒温箱中静置30天；
s4，取s3步骤处理过的种子，用500mg·l-1ga3溶液浸种48h，8h换溶液一次；然后用蒸馏水冲洗干净并室内12小时阴干；
s5，取s4步骤处理过的种子，用5％的高锰酸钾溶液浸泡消毒10分钟，然后用蒸馏水冲洗干净；
s6，取河沙和s5步骤处理过的种子按5:1的比例混匀于发芽盒内，置于7℃的冰箱中置25天。
实施例5
一种黄瑞香种子的高效催芽方法，包括以下步骤：
s1，采摘成熟到果皮呈深红色时的黄瑞香果实，搓洗去除果皮和果肉后室内阴干，从采摘到室内阴干共用3天；挑选饱满种子置于牛皮纸袋内备用；
s2，取s1步骤处理过的种子，25℃恒温箱中静置15天；
s3，取s2步骤处理过的种子，30℃恒温箱中静置15天；
s4，取s3步骤处理过的种子，用150mg·l-1ga3溶液浸种24h，8h换溶液一次；然后用蒸馏水冲洗干净并室内12小时阴干；
s5，取s4步骤处理过的种子，用5％的高锰酸钾溶液浸泡消毒10分钟，然后用蒸馏水冲洗干净；
s6，取河沙和s5步骤处理过的种子按5:1的比例混匀于发芽盒内，置于7℃的冰箱中置25天。
对照例1
一种黄瑞香种子的高效催芽方法，包括以下步骤：
s1，采摘成熟到果皮呈深红色时的黄瑞香果实，搓洗去除果皮和果肉后室内阴干，从采摘到室内阴干共用3天；挑选饱满种子置于牛皮纸袋内备用；
s5，取s1步骤处理过的种子，用5％的高锰酸钾溶液浸泡消毒10分钟，然后用蒸馏水冲洗干净；
s6，取河沙和s5步骤处理过的种子按5:1的比例混匀于发芽盒内，置于7℃的冰箱中置25天。
对照例2
一种黄瑞香种子的高效催芽方法，包括以下步骤：
s1，采摘成熟到果皮呈深红色时的黄瑞香果实，搓洗去除果皮和果肉后室内阴干，从采摘到室内阴干共用3天；挑选饱满种子置于牛皮纸袋内备用；
s4，取s1步骤处理过的种子，用150mg·l-1ga3溶液浸种24h，8h换溶液一次；然后用蒸馏水冲洗干净并室内12小时阴干；
s5，取s4步骤处理过的种子，用5％的高锰酸钾溶液浸泡消毒10分钟，然后用蒸馏水冲洗干净；
s6，取河沙和s5步骤处理过的种子按5:1的比例混匀于发芽盒内，置于7℃的冰箱中置25天。
对照例3
一种黄瑞香种子的高效催芽方法，包括以下步骤：
s1，采摘成熟到果皮呈深红色时的黄瑞香果实，搓洗去除果皮和果肉后室内阴干，从采摘到室内阴干共用3天；挑选饱满种子置于牛皮纸袋内备用；
s2，取s1步骤处理过的种子，25℃恒温箱中静置15天；
s3，取s2步骤处理过的种子，30℃恒温箱中静置15天；
s5，取s3步骤处理过的种子，用5％的高锰酸钾溶液浸泡消毒10分钟，然后用蒸馏水冲洗干净；
s6，取河沙和s5步骤处理过的种子按5:1的比例混匀于发芽盒内，置于7℃的冰箱中置25天。
对照例4
一种黄瑞香种子的高效催芽方法，包括以下步骤：
s1，采摘成熟到果皮呈深红色时的黄瑞香果实，搓洗去除果皮和果肉后室内阴干，从采摘到室内阴干共用3天；挑选饱满种子置于牛皮纸袋内备用；
s3，取s2步骤处理过的种子，30℃恒温箱中静置15天；
s4，取s1步骤处理过的种子，用150mg·l-1ga3溶液浸种24h，8h换溶液一次；然后用蒸馏水冲洗干净并室内12小时阴干；
s5，取s3步骤处理过的种子，用5％的高锰酸钾溶液浸泡消毒10分钟，然后用蒸馏水冲洗干净；
s6，取河沙和s5步骤处理过的种子按5:1的比例混匀于发芽盒内，置于7℃的冰箱中置25天。
对照例5
一种黄瑞香种子的高效催芽方法，包括以下步骤：
s1，采摘成熟到果皮呈深红色时的黄瑞香果实，搓洗去除果皮和果肉后室内阴干，从采摘到室内阴干共用3天；挑选饱满种子置于牛皮纸袋内备用；
s3，取s2步骤处理过的种子，30℃恒温箱中静置15天；
s4，取s1步骤处理过的种子，用150mg·l-1ga3溶液浸种24h，8h换溶液一次；然后用蒸馏水冲洗干净并室内12小时阴干；
s5，取s3步骤处理过的种子，用5％的高锰酸钾溶液浸泡消毒10分钟，然后用蒸馏水冲洗干净；
s6，取河沙和s5步骤处理过的种子按5:1的比例混匀于发芽盒内，置于7℃的冰箱中置25天。
实验例1处理方法对野生黄瑞香种子裂口率的影响
本实验采用裂口率来评价处理方法对野生黄瑞香种子催芽的效果，裂口率的计算公式为：裂口率＝(裂口种子数/总种子数)×100％。一种黄瑞香种子的高效催芽方法
供试的黄瑞香(daphnegiraldiinitsche.)种子采于自海拔2500m～2600m的甘肃省武威市天祝县祁连乡布尔草原(103°33′26"e，38°43′31"n)，坡向东西，坡度约为25°。果实成熟到果皮呈深红色时采摘。
取同一棵树上相同成熟度的果皮呈深红色的果子，经过实施例1-5处理后，在置于7℃的冰箱中的第25天观察结果。从河沙中取出种子，观察种皮有无裂口，计算裂口率。处理总天数以天为单位，12小时记为0.5天，不足1小时记为0天。对照例1-5处理后，在置于7℃的冰箱中的第25天观察结果，然后继续直至总天数第59.5天再次观察结果。
表1不同处理方法的野生黄瑞香种子的裂口率
*符号数目相同表示没有显著性差异，数目不同表示有显著性差异(p＝0.05)
从表1中可以看出，对照例1-3的第一次和第二次观察结果，野生黄瑞香种子的裂口率为0，说明单独的恒温静置和ga3溶液浸种均不能有效破除休眠，对照例4-5的第一次和第二次观察结果裂口率也为0，说明25°和30°两个单一温度的恒温静置分别和ga3溶液浸种联合处理也不能有效破除野生黄瑞香种子休眠。
实施例1-5的野生黄瑞香种子的裂口率均能达到40％以上，远远高于对照例1-5的两个观察结果，说明先后25°和30°两个单一温度的恒温静置和ga3溶液浸种联合处理可以有效破除野生黄瑞香种子的休眠，25°恒温静置、30°恒温静置和ga3溶液浸种三个处理步骤之间具有协同性，而25°恒温静置与ga3溶液浸种、和30°恒温静置与ga3溶液浸种两个处理步骤之间均不具有协同性。实施例2与实施例1、实施例4与实施例3相比，增加ga3溶液浸种的浓度和时间(从10mg·l-1浸种12h到500mg·l-1浸种48h)，裂口率有差异但不具显著性，ga3溶液浸种的浓度和时间与裂口率之间不呈线性关系。实施例3与实施例1、实施例4与实施例2相比，增加25°和30°恒温静置的时间(从均为5天到均为30)，裂口率有差异但不具显著性，恒温静置的时间与裂口率之间也不呈线性关系。
实施例1-5中黄瑞香种子裂口率以实施例5处理为最优，显著高于实施例1-4，竟然达到了92％，说明25℃恒温箱中静置15天、30℃恒温箱中静置15天和用150mg·l-1ga3溶液浸种24h能够快速有效的破除种子休眠。同时处理总天数为58天左右，处理总天数比较短，可以用于人工快速、大面积育苗的实际生产中。
本发明方法通过恒温静置处理种子使种子完成生理后熟，从而有利于休眠的打破；进一步的赤霉素浸种可显著的缩短其休眠的打破时间，两个恒温静置处理步骤和赤霉素浸种之间具有关联协同作用。
综上所述，仅为本发明之较佳实施例，不以此限定本发明的保护范围，凡依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆为本发明专利涵盖的范围之内。