一种白花龙离体快速繁殖的方法与流程

本发明涉及一种植物的离体快速繁殖方法，具体涉及一种白花龙离体快速繁殖的方法。

背景技术：

白花龙(styraxfaeriperk.)属安息香科(styracaceae)安息香属(styrax)，分布于安徽、湖北、江苏、浙江、湖南、江西、广东、广西等省和台湾地区。白花龙树形优美，春末开白色花、清新脱俗，花小、花梗长，花开时朵朵下垂，似一个个小灯笼挂于枝稍。在广东地区，春季开花的树种主要是红色的木棉、火焰木，黄色的黄花风铃木，粉色的洋紫荆等，白花龙是为数不多春季开白色花、形态富有奇趣性的乡土观赏树种，特别适合用于小区、公园、道路等的绿化。白花龙还是南亚热带强光干旱生境下的先锋树种，常见于海拔100-600m的低山区和丘陵灌丛，是良好的边坡生态修复的树种。

除观赏之外，白花龙还具有很高的经济价值。白花龙的叶可用于止血、生肌、消肿，果实可以治头晕发热，根可用于治胃脘痛，种子油可制肥皂和润滑油，是良好的药用和油脂用植物，具有广阔的开发前景。植物离体培养快速繁殖是获得大量优质种苗的有效途径之一，本发明拟建立白花龙高效离体培养快速繁殖体系，为白花龙的种苗供应奠定基础，推进白花龙在园林绿化、边坡修复、药用和油脂用等方面的应用。

白花龙现阶段主要采用扦插繁殖，但成活率低且枝条需求量大，种苗繁殖速度不能满足市场需求。白花龙4-6月开花，8-10月结果，种子产量很大，但由于种壳坚硬且具有一定的休眠特性，在自然状态下于第二年4-5月左右萌发，萌发率低、萌发时间长。同属植物(安息香属，styrax)种子也多有休眠特性，不宜随采随播，如白花树(styraxtonkinensis(pierre)craibexhartw.)的种子经常温下储藏5个月后，发芽率仅为20％；垂珠花(styraxdasyanthusperk)经1200mg/lga3预处理24h，结合低温沙藏层积发芽率仅为44％。迄今为止，尚未有白花龙人工播种繁殖及离体培养繁殖的报道。

技术实现要素：

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足之处而提供一种白花龙离体快速繁殖的方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种白花龙离体快速繁殖的方法，包含以下步骤：

(1)种子萌发：将白花龙种子用酒精浸泡40～80s，用无菌水洗去种子表面的酒精，剥除外种壳，升汞浸泡4～6min，用无菌水洗去种子表面的汞，晾干，去除种子的胚乳，得外植体，将外植体接种至的萌发诱导培养基中进行萌发诱导，得无菌苗；

(2)继代培养：将步骤(1)获得的无菌苗切成带1～3个节的茎段接种至丛生芽诱导培养基中进行丛生芽诱导；

(3)壮苗与生根培养：选择步骤(2)获得的高为1.0～2.0cm的丛生芽接种于壮苗培养基上培养30～45天以壮苗；选择壮苗后生长良好的幼苗切成带1～3个节的茎段用于直接生根培养或间接生根培养；

(4)炼苗和移栽：将步骤(3)所得植株，置于荫棚内炼苗，6～8天后移栽至基质上，得白花龙幼苗。

本发明所述白花龙离体快速繁殖的方法对白花龙种子去除种壳以增加种子的透气性、透水性，提高萌发率。本发明所用培养基均需在压强为105kpa，温度为121℃的条件下进行高压灭菌20min。酒精的浓度可以为75％的酒精，升汞可以为0.1％的升汞。对去除种壳的白花龙种子进行去除胚乳处理，降低了萌发抑制物和导致种子褐化的物质对种子的影响，能有效地提高萌发率、成活率以及缩短了萌发时间。本发明所述直接生根培养是直接将芽接种于相应的培养基中进行生根培养，间接生根培养是先将茎段基部置于高浓度的iba溶液中浸泡10～20min，再转到相应的培养基中进行培养。本发明所述白花龙离体快速繁殖的方法得到的种子萌发率和成苗率高，幼苗的成活率高，能实现离体培养快速繁殖，为白花龙在园林绿化、边坡修复、药用和油脂用等方面的种苗供应奠定基础。

作为本发明所述白花龙离体快速繁殖的方法的优选实施方式，步骤(1)中，所述的萌发诱导培养基包含ms、0.5～4.0mg/lga3、20～35g/l蔗糖、3.5～7.5g/l琼脂，所述的萌发诱导培养基的ph值为5.5～6.2。本发明所述萌发诱导培养基中的激素种类和浓度的配比可以提高种子的萌发率和成苗率。

作为本发明所述白花龙离体快速繁殖的方法的优选实施方式，步骤(2)中，所述丛生芽诱导培养基包含ms、0.1～3.0mg/lba、0～0.5mg/lnaa、0～0.5mg/ltdz、20～35g/l蔗糖和3.5～7.5g/l琼脂，所述丛生芽诱导培养基的ph值为5.5～6.2。本发明所述丛生芽诱导培养基中激素种类和浓度的配比可以提高增殖系数。

作为本发明所述白花龙离体快速繁殖的方法的优选实施方式，步骤(3)中，所述壮苗培养基包含ms、0.1～1.5mg/lba、0.01～0.5mg/lnaa、0.05～1.5mg/lga3、20～35g/l蔗糖和3.5～7.5g/l琼脂，所述壮苗培养基的ph值为5.5～6.2。壮苗培养能使无菌苗更加健壮，从而有利于提高生根率和炼苗移栽的成活率。

优化增殖培养基的激素种类和浓度的配比以提高增殖系数。优化了生根方法、生根基本培养基和激素、浓度的配比以提高生根率、增加生根数和缩短生根时间。实现了离体培养快速繁殖，为白花龙在园林绿化、边坡修复、药用和油脂用等方面的种苗供应奠定基础。

作为本发明所述白花龙离体快速繁殖的方法的优选实施方式，步骤(3)中，所述直接生根培养的培养基包含1/4ms～ms、0.5～5.0mg/liba、20～35g/l蔗糖和3.5～7.5g/l琼脂，所述直接生根培养基的ph值为5.5～6.2。

作为本发明所述白花龙离体快速繁殖的方法的优选实施方式，步骤(3)中，所述间接生根培养的方法为：先将茎段的基部置于浓度为50～500mg/l的iba中浸泡10～20min，再转接到间接生根培养基上培养。与直接生根培养相比，间接生根培养的生根率更高、生根数更多和生根时间更短。

作为本发明所述白花龙离体快速繁殖的方法的优选实施方式，所述iba的浓度为50～500mg/l。生根率随着iba浓度的增加呈先上升后下降的趋势。浓度过高的话会抑制根原基的生长，从而降低生根率、减少生根数和抑制根生长。在上述iba的浓度为50～500mg/l时，有利于提高生根率、增加生根数和缩短生根时间。

作为本发明所述白花龙离体快速繁殖的方法的优选实施方式，所述间接生根培养基包含1/4ms～ms、20～35g/l蔗糖和3.5～7.5g/l琼脂，所述间接生根培养基的ph值为5.5～6.2。本发明所述间接生根培养基中的激素的种类和浓度的配比与间接生根培养的方法相互促进，能有效地提高生根率、增加生根数和缩短生根时间。

作为本发明所述白花龙离体快速繁殖的方法的优选实施方式，步骤(4)中，所述基质为泥炭土、珍珠岩和沙的混合物，所述泥炭土、珍珠岩和沙的比例为：泥炭土：珍珠岩：沙＝3:1:1。幼苗的成活率在此基质中最高，该基质对于培养白花龙幼苗最为适合。

本发明的有益效果在于：本发明提供了一种白花龙离体快速繁殖的方法，本发明所述白花龙离体快速繁殖的方法中去除白花龙种壳以增加透气性、透水性，去除胚乳降低萌发抑制物和导致种子褐化的物质对种子的影响，提高了萌发率、成活率以及缩短了萌发时间。优化增殖培养基的激素种类和浓度的配比以提高增殖系数。优化了生根方法、生根基本培养基和激素种类、浓度的配比以提高生根率、增加生根数和缩短生根时间。本发明所述白花龙离体快速繁殖的方法实现了离体培养快速繁殖，为白花龙在园林绿化、边坡修复、药用和油脂用等方面的种苗供应奠定基础。

附图说明

图1为实施例1、2、7、8、对比例中某个阶段的生长情况；

其中1a为对比例所述带胚乳种子接种45d天后的萌发情况；图1b为实施例2所述种子萌发7d后的萌发情况；图1c为实施例1所述丛生芽诱导接种45d后苗的生长情况；图1d为实施例2中的苗直接生根培养45d后根的生长情况；图1e为实施例8中的苗间接生根培养45d后根的生长情况；图1f为实施例8中苗移栽30d后的生长情况。

具体实施方式

本发明所述英文缩略词的解释如下：ga3是赤霉素、ba是6-苄基氨基嘌呤、naa是萘乙酸、tdz是噻苯隆、iba是吲哚丁酸。

培养基的配制：

本发明中的基本培养基ms、1/2ms组成成分如表1所示：

表1.白花龙离体培养快速繁殖使用基本培养基一览表

以配制1l培养基为例：准确称取表1中所述的各种化合物，加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，用naoh或hcl调ph至6.0，最后定容到1l。

本发明所述培养基均需在压强为105kpa，温度为121℃的条件下进行高压灭菌20min；本发明所述培养基培养的条件均为：培养温度25±1℃，光照强度2000lx，光照时间12h/d。

为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例和附图对本发明作进一步说明。

实施例1

本发明所述白花龙离体快速繁殖的方法的一种实施例，包括以下步骤：

(1)种子萌发：在超净工作台上，将白花龙种子用75％酒精浸泡40s，无菌水清洗1遍，剥开外种壳，0.1％升汞浸泡5min，无菌水清洗6遍，置于滤纸上晾干，接着除去种子的胚乳，最后将种子接种至相应的萌发诱导培养基中进行萌发诱导；每个处理10瓶，每瓶接种3个外植体；所述萌发诱导培养基包含：ms、1.0mg/lga3、30g/l蔗糖和7.0g/l琼脂，所述萌发诱导培养基的ph值为6.0；

(2)继代培养：将步骤(1)获得的无菌苗切成带2个节的茎段接种到相应的丛生芽诱导培养基中进行丛生芽诱导；每个处理10瓶，每瓶接种3个外植体；所述丛生芽诱导培养基包含ms、0.5mg/lba、0.05mg/lnaa、30g/l蔗糖和7.0g/l琼脂，所述丛生芽诱导培养基的ph值为6.0；

(3)壮苗与生根培养：选择步骤(2)获得的高为2.0cm的丛生芽接种于壮苗培养基上培养45d以壮苗；选择壮苗后生长良好的幼苗切成带2个节的茎段进行直接生根培养；每个处理8瓶，每瓶接种5个外植体；所述壮苗培养基包含：ms、0.5mg/lba、0.1mg/lnaa、0.5mg/lga3、30g/l蔗糖和7.0g/l琼脂，所述壮苗培养基的ph值为6.0；所述生根诱导培养基包含ms、1.0mg/liba、30g/l蔗糖和7.0g/l琼脂，所述ph为6.0；

(4)炼苗和移栽：选择步骤(3)获得的健壮、侧根发达的植株，打开瓶盖，置于荫棚内炼苗；6～8d后移栽至基质上，基质为泥炭土、珍珠岩和沙的混合物，所述泥炭土、珍珠岩和沙的比例为：泥炭土：珍珠岩：沙＝3:1:1。

实施例2

本发明所述白花龙离体快速繁殖的方法的一种实施例，包括以下步骤：

(1)种子萌发：在超净工作台上，将白花龙种子用75％酒精浸泡60s，无菌水清洗2遍，剥开外种壳，0.1％升汞浸泡6min，无菌水清洗7遍，置于滤纸上晾干，最后带胚乳的种子接种到相应的萌发诱导培养基培养基中进行萌发诱导。每个处理15瓶，每瓶接种2个外植体；所述萌发诱导培养基包含：ms、2.0mg/lga3、30g/l蔗糖和7.0g/l琼脂，所述萌发诱导培养基的ph值为6.0；

(2)继代培养：将步骤(1)获得的无菌苗切成带2个节的茎段接种到相应的丛生芽诱导培养基中进行丛生芽诱导。每个处理15瓶，每瓶接种2个外植体；所述丛生芽诱导培养基包含：ms、1.0mg/lba、0.05mg/lnaa、30g/l蔗糖和7.0g/l琼脂，所述丛生芽诱导培养基的ph值为6.0；

(3)壮苗与生根培养：选择步骤(2)获得的高为2.0cm的丛生芽接种于壮苗培养基上培养45d以壮苗；选择壮苗后生长良好的幼苗切成带2个节的茎段进行直接生根培养；每个处理8瓶，每瓶接种5个外植体；所述壮苗培养基包含ms、0.5mg/lba、0.1mg/lnaa、1.0mg/lga3、30g/l蔗糖和7.0g/l琼脂，所述壮苗培养基的ph值为6.0；所述生根诱导培养基包含ms、3.0mg/liba、30g/l蔗糖和7.0g/l琼脂，所述ph为6.0；

(4)炼苗和移栽：选择步骤(3)获得的健壮、侧根发达的植株，打开瓶盖，置于荫棚内炼苗。6～8d后移栽在基质上，所述基质为泥炭土、珍珠岩和沙的混合物，所述泥炭土、珍珠岩和沙的比例为：泥炭土：珍珠岩：沙＝3:1:1。

实施例3

本发明所述白花龙离体快速繁殖的方法的一种实施例，包括以下步骤：

(1)种子萌发：在超净工作台上，将白花龙种子用75％酒精浸泡40s，无菌水清洗1遍，剥开外种壳，0.1％升汞浸泡4min，无菌水清洗6遍，置于滤纸上晾干，接着除去种子的胚乳，最后将种子接种至相应的萌发诱导培养基中进行萌发诱导；每个处理10瓶，每瓶接种3个外植体；所述萌发诱导培养基包含：3.0mg/lga3、30g/l蔗糖和7.0g/l琼脂，，所述萌发诱导培养基的ph值为6.0；

(2)继代培养：将步骤(1)获得的无菌苗切成带1个节的茎段接种到相应的丛生芽诱导培养基中进行丛生芽诱导；每个处理10瓶，每瓶接种3个外植体；所述丛生芽诱导培养基包含：ms、2.0mg/lba、0.05mg/lnaa、30g/l蔗糖和7.0g/l琼脂，所述丛生芽诱导培养基的ph值为6.0；

(3)壮苗与生根培养：选择步骤(2)获得的高为1.0cm的丛生芽接种于壮苗培养基上培养45d以壮苗；选择壮苗后生长良好的幼苗切成带1个节的茎段进行直接生根培养；每个处理8瓶，每瓶接种5个外植体；所述壮苗培养基的成分为：ms、0.5mg/lba、0.1mg/lnaa、1.5mg/lga3、20g/l蔗糖和3.5g/l琼脂，所述壮苗培养基的ph值为6.0；所述生根诱导培养基ms、5.0mg/liba、30g/l蔗糖和7.0g/l琼脂，所述生根诱导培养基的ph值为6.0；

(4)炼苗和移栽：选择步骤(3)获得的健壮、侧根发达的植株，打开瓶盖，置于荫棚内炼苗；6～8d后移栽至基质上，基质为泥炭土、珍珠岩和沙的混合物，所述泥炭土、珍珠岩和沙的比例为：泥炭土：珍珠岩：沙＝3:1:1。

实施例4

本发明所述白花龙离体快速繁殖的方法的一种实施例，本实施例与实施例1的不同之处仅在于丛生芽诱导培养基成分的不同，本实施例所述丛生芽诱导培养基包含：ms、0.5mg/lba、0.01mg/ltdz、0.05mg/lnaa、30g/l蔗糖和7.0g/l琼脂。

实施例5

本发明所述白花龙离体快速繁殖的方法的一种实施例，包括以下步骤：

(1)种子萌发：在超净工作台上，将白花龙种子用75％酒精浸泡40s，无菌水清洗1遍，剥开外种壳，0.1％升汞浸泡5min，无菌水清洗6遍，置于滤纸上晾干，接着除去种子的胚乳，最后将种子接种至相应的萌发诱导培养基中进行萌发诱导；每个处理10瓶，每瓶接种3个外植体；所述萌发诱导培养基包含：ms、1.0mg/lga3、30g/l蔗糖和7.0g/l琼脂，所述萌发诱导培养基的ph值为6.0；

(2)继代培养：将步骤(1)获得的无菌苗切成带2个节的茎段接种到相应的丛生芽诱导培养基中进行丛生芽诱导；每个处理10瓶，每瓶接种3个外植体；所述丛生芽诱导培养基包含ms、0.5mg/lba、0.1mg/lnaa、30g/l蔗糖和7.0g/l琼脂，所述丛生芽诱导培养基的ph值为6.0；

(3)壮苗与生根培养：选择步骤(2)获得的高为2.0cm的丛生芽接种于壮苗培养基上培养45d以壮苗；选择壮苗后生长良好的幼苗切成带2个节的茎段进行间接生根培养：先将茎段基部置于浓度为100mg/l的iba溶液中浸泡15min，再转到相应的培养基中进行培养；每个处理8瓶，每瓶接种5个外植体；所述壮苗培养基包含：ms、1.0mg/lba、0.1mg/lnaa、0.5mg/lga3、30g/l蔗糖和7.0g/l琼脂，所述壮苗培养基的ph值为6.0；所述生根诱导培养基包含ms、30g/l蔗糖和7.0g/l琼脂，所述ph为6.0；

(4)炼苗和移栽：选择步骤(3)获得的健壮、侧根发达的植株，打开瓶盖，置于荫棚内炼苗；6～8d后移栽至基质上，基质为泥炭土、珍珠岩和沙的混合物，所述泥炭土、珍珠岩和沙的比例为：泥炭土：珍珠岩：沙＝3:1:1。

实施例6

本发明所述白花龙离体快速繁殖的方法的一种实施例，本实施例与实施例5的不同之处仅在于步骤(3)中iba的浓度的不同，本实施例步骤(3)中，iba溶液浓度为200mg/l。

实施例7

本发明所述白花龙离体快速繁殖的方法的一种实施例，包括以下步骤：

(1)种子萌发：在超净工作台上，将白花龙种子用75％酒精浸泡40s，无菌水清洗1遍，剥开外种壳，0.1％升汞浸泡5min，无菌水清洗6遍，置于滤纸上晾干，接着除去种子的胚乳，最后将种子接种至相应的萌发诱导培养基中进行萌发诱导；每个处理10瓶，每瓶接种3个外植体；所述萌发诱导培养基包含：ms、1.0mg/lga3、30g/l蔗糖和7.0g/l琼脂，所述萌发诱导培养基的ph值为6.0；

(2)继代培养：将步骤(1)获得的无菌苗切成带2个节的茎段接种到相应的丛生芽诱导培养基中进行丛生芽诱导；每个处理10瓶，每瓶接种3个外植体；所述丛生芽诱导培养基包含ms、0.5mg/lba、0.1mg/lnaa、0.1mg/ltdz、30g/l蔗糖和7.0g/l琼脂，所述丛生芽诱导培养基的ph值为6.0；

(3)壮苗与生根培养：选择步骤(2)获得的高为2.0cm的丛生芽接种于壮苗培养基上培养45d以壮苗；选择壮苗后生长良好的幼苗切成带2个节的茎段进行间接生根培养：先将茎段基部置于浓度为100mg/l的iba溶液中浸泡15min，再转到相应的培养基中进行培养；每个处理8瓶，每瓶接种5个外植体；所述壮苗培养基包含：ms、1.0mg/lba、0.1mg/lnaa、0.5mg/lga3、30g/l蔗糖和7.0g/l琼脂，所述壮苗培养基的ph值为6.0；所述生根诱导培养基包含1/2ms、30g/l蔗糖和7.0g/l琼脂，所述ph为6.0；

(4)炼苗和移栽：选择步骤(3)获得的健壮、侧根发达的植株，打开瓶盖，置于荫棚内炼苗；6～8d后移栽至基质上，基质为泥炭土、珍珠岩和沙的混合物，所述泥炭土、珍珠岩和沙的比例为：泥炭土：珍珠岩：沙＝3:1:1。

实施例8

本发明所述白花龙离体快速繁殖的方法的一种实施例，本实施例与实施例7的不同之处仅在于步骤(3)中iba的浓度的不同，本实施例步骤(3)中，iba溶液浓度为200mg/l。

实施例9

本发明所述白花龙离体快速繁殖的方法的一种实施例，本实施例与实施例7的不同之处仅在于步骤(3)中iba的浓度的不同，本实施例步骤(3)中，iba溶液浓度为300mg/l。

实施例10

本发明所述白花龙离体快速繁殖的方法的一种实施例，本实施例与实施例7的不同之处仅在于步骤(3)中iba的浓度的不同，本实施例步骤(3)中，iba溶液浓度为400mg/l。

实施例11

本发明所述白花龙离体快速繁殖的方法的一种实施例，包括以下步骤：

(1)种子萌发：在超净工作台上，将白花龙种子用75％酒精浸泡80s，无菌水清洗2遍，剥开外种壳，0.1％升汞浸泡6min，无菌水清洗6遍，置于滤纸上晾干，接着除去种子的胚乳，最后将种子接种至相应的萌发诱导培养基中进行萌发诱导；每个处理10瓶，每瓶接种3个外植体；所述萌发诱导培养基包含：ms、0.5mg/lga3、20g/l蔗糖和3.5g/l琼脂，所述萌发诱导培养基的ph值为5.5；

(2)继代培养：将步骤(1)获得的无菌苗切成带3个节的茎段接种到相应的丛生芽诱导培养基中进行丛生芽诱导；每个处理10瓶，每瓶接种3个外植体；所述丛生芽诱导培养基为：丛生芽诱导培养基包含ms、0.1mg/lba、20g/l蔗糖和3.5g/l琼脂，所述丛生芽诱导培养基的ph值为5.5；

(3)壮苗与生根培养：选择步骤(2)获得的高为2.0cm的丛生芽接种于壮苗培养基上培养45d以壮苗；选择壮苗后生长良好的幼苗切成带1个节的茎段进行间接生根培养：先将茎段基部置于浓度为50mg/l的iba溶液中浸泡10min，再转到相应的培养基中进行培养；每个处理8瓶，每瓶接种5个外植体；所述壮苗培养基包含ms、0.1mg/lba、0.01mg/lnaa、0.05mg/lga3、20g/l蔗糖和3.5g/l琼脂，所述壮苗培养基的ph值为5.5；所述间接生根培养基包含1/4ms、20g/l蔗糖和3.5g/l琼脂，所述间接生根培养基的ph值为5.5；

(4)炼苗和移栽：选择步骤(3)获得的健壮、侧根发达的植株，打开瓶盖，置于荫棚内炼苗；6～8d后移栽至基质上，基质为泥炭土、珍珠岩和沙的混合物，所述泥炭土、珍珠岩和沙的比例为：泥炭土：珍珠岩：沙＝3:1:1。

实施例12

本发明所述白花龙离体快速繁殖的方法的一种实施例，包括以下步骤：

(1)种子萌发：在超净工作台上，将白花龙种子用75％酒精浸泡80s，无菌水清洗2遍，剥开外种壳，0.1％升汞浸泡6min，无菌水清洗6遍，置于滤纸上晾干，接着除去种子的胚乳，最后将种子接种至相应的萌发诱导培养基中进行萌发诱导；每个处理10瓶，每瓶接种3个外植体；所述萌发诱导培养基包含：ms、4.0mg/lga3、35g/l蔗糖和7.5g/l琼脂，所述萌发诱导培养基的ph值为6.2；

(2)继代培养：将步骤(1)获得的无菌苗切成带3个节的茎段接种到相应的丛生芽诱导培养基中进行丛生芽诱导；每个处理10瓶，每瓶接种3个外植体；所述丛生芽诱导培养基为：丛生芽诱导培养基包含ms、3.0mg/lba、0.5mg/lnaa、0.5mg/ltdz、35g/l蔗糖和7.5g/l琼脂，所述丛生芽诱导培养基的ph值为6.2；

(3)壮苗与生根培养：选择步骤(2)获得的高为2.0cm的丛生芽接种于壮苗培养基上培养45d以壮苗；选择壮苗后生长良好的幼苗切成带1个节的茎段进行间接生根培养：先将茎段基部置于浓度为500mg/l的iba溶液中浸泡10min，再转到相应的培养基中进行培养；每个处理8瓶，每瓶接种5个外植体；所述壮苗培养基包含ms、1.5mg/lba、0.5mg/lnaa、1.5mg/lga3、35g/l蔗糖和7.5g/l琼脂，所述壮苗培养基的ph值为6.2；所述间接生根培养基包含1/4ms、35g/l蔗糖和7.5g/l琼脂，所述间接生根培养基的ph值为6.2；

(4)炼苗和移栽：选择步骤(3)获得的健壮、侧根发达的植株，打开瓶盖，置于荫棚内炼苗；6～8d后移栽至基质上，基质为泥炭土、珍珠岩和沙的混合物，所述泥炭土、珍珠岩和沙的比例为：泥炭土：珍珠岩：沙＝3:1:1。

对比例

本发明所述白花龙离体快速繁殖的方法的一种对比例，包括以下步骤：

(1)种子萌发：在超净工作台上，将白花龙种子用75％酒精浸泡60s，无菌水清洗2遍，剥开外种壳，0.1％升汞浸泡6min，无菌水清洗7遍，置于滤纸上晾干，最后带胚乳的种子接种到相应的培养基中进行萌发诱导。每个处理15瓶，每瓶接种2个外植体；所述的萌发诱导培养基包含：ms、2.0mg/lga3、30g/l蔗糖和7.0g/l琼脂，ph为6.0。因步骤(1)的萌发诱导的成苗率均为0，无法进行步骤(2)、(3)、(4)。

实施例13

实施例1中丛生芽诱导45d后的情况见图1c，从图中可以看出丛生芽的生长旺盛；实施例2中种子萌发7d后的情况见图1b，直接生根情况见图1d，从图可见：根的数量比较少，无根毛产生；实施例8中间接生根的情况见图1e，从图可见：根的数量多，且有根毛产生；移栽30d后的情况见图1f，从图中可以看出苗的生长状况良好。

对比例的种子接种一个月后种子才开始萌发，且萌发15d后子叶开始褐化，最终全部死亡，图1a为接种45d后的情况。

实施例14

观察记录实施例1～12所述白花龙离体快速繁殖情况：

1、统计步骤(1)中接种30～45d后种子的萌发率、成苗率和苗的生长状况；

2、统计步骤(2)中接种30～45d后的增殖系数、平均苗高以及丛生芽的生长情况；

3、统计步骤(3)中生根培养接种30～45d后生根率、平均生根数以及记录根的生长情况；

4、统计步骤(4)中移栽30～40d后统计苗的成活率。

统计结果见表2。

表2实施例1～12所述白花龙离体快速繁殖情况

从表1可以看出，实施例1～12所述白花龙离体快速繁殖方法得到的白花龙都有较高的成活率，由实施例1～3、11、12步骤(1)结果的对比可知：随着ga3浓度的升高，白花龙种子萌发率和成苗率呈先上升后下降的趋势，ga3的浓度为1～2mg/l时，萌发率和成苗率较高。对比实施例1～12和对比例可知：去除胚乳的种子萌发时间短，萌发率和成苗率高；而带胚乳种子萌发时间长，且萌发15d后子叶开始褐化，最终全部死亡。因此，白花龙的胚乳可能中含有抑制种子萌发和导致幼苗褐化死亡的物质，在离体萌发时必须去除。对比实施例1、12中步骤(2)的结果可知：在ba和naa比例比较低且ba和naa的绝对浓度也比较低时，能获得较高的增殖系数；添加高浓度tdz容易产生愈伤组织。对比实施例1～3和实施例7～12的步骤(3)的结果可知：白花龙生根率随iba浓度的升高，呈先上升后下降的趋势。对比实施例1～6和实施例7～12的步骤(3)可知：间接生根法有利于提高生根率、增加生根数和缩短生根时间。另外，基本培养基矿物元素浓度较低时，有利于根毛产生。

最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。