本发明属于农业生产加工领域，涉及富贵菜的制备方法一种富贵菜的制备方法。
背景技术：
富贵菜(gynuradivancatal.)又名白(百)子菜、鸡菜、大肥牛，菊科三七草属多年生宿根草本植物。富贵菜味淡、性寒，富含多种维生素和矿物质。根据前人研究，包含蛋白质、脂肪、总酸、粗纤维、干物质、氨基酸、挥发油、还原糖、钙、铁、具有降血糖、清热解毒、止血、凉血等功效，可治疗色性结膜炎、小儿高热、心肺积热等，并具有提高人体抵抗力等保健作用。
目前，国内富贵菜的繁殖方式基本以短枝扦插为主，繁殖效率低，且经常采收的植株不见开花，很少结籽。为解决该种种质资源的保存与繁殖问题，富贵菜的离体培养有着重要的意义。同时，由于富贵菜喜温，不耐冻，适宜生长温度为20-30℃，因此，一般北方难以存活或者只开花不结籽。而富贵菜本身很难保鲜贮藏，采后在自然状态下1天甚至几个小时后就开始失水萎蔫甚至腐烂，严重影响其商品价值。根据目前研究，鲜切蔬菜品质变化原因主要有生理衰老、伤口、微生物影响等各种问题。因此，选择一种合适于富贵菜的保存和运输方式，对大范围利用高品质富贵菜，实现富贵菜的医药保健价值和经济利用价值具有重要的意义。
技术实现要素：
本发明的目的是提供富贵菜的制备方法一种富贵菜的制备方法，解决了传统方法中富贵菜繁殖率低，生产成本高，难以保存，不利于大范围利用实现其价值等问题。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
本发明提供富贵菜的制备方法一种富贵菜的制备方法，一种富贵菜的制备方法，包括如下步骤：
(1)培养基配制：分别配制愈伤组织改良ms诱导培养基、愈伤组织改良ms分化与增殖培养基、愈伤组织生根培养基，其中，愈伤组织改良ms诱导培养基包括1.5mg/l的6-ba，0.3mg/l的2,4-d，0.1mg/l的naa，0.3mg/l的kt，1.3mg/l的pvp；愈伤组织改良ms分化与增殖培养基包括0.8mg/l的6-ba,0.15mg/l的naa，0.8mg/l的pvp；愈伤组织1/2ms生根培养基包括0.2mg/l的萘乙酸、2％质量分数的蔗糖；调节ph为5.8-6.0，高温杀菌、降温、无菌保存。
(2)叶片选择：9月上旬，选择由济南绿禾农业科技开发公司提供的生长健壮，无病虫害富贵幼叶，切去叶片边缘，获得1*1cm外植体。
(3)外植体处理：将获得的外植体在流水中冲洗10min，70％酒精浸泡30s，灭菌3min；
(4)接种：无菌操作台前，将处理过的外植体叶背朝下，接种于诱导培养基中。调节恒温培养室光照强度为,100lx,10天后转入850lx光照强度培养室中，光照时间为14h/d，保持湿度在80％。
(5)离体培养：10天后在无菌操作条件下，将愈伤组织块接种于分化与增殖培养基中，光强度1500lx，光照时间12h/d,10天后无菌转接到光强度2000lx光下，光照时间12h/d,直至长出分化芽；当分化芽高为2cm时，单株切下，转接至生根培养基上；2周后，苗高5cm,打开瓶盖，将培养基移至自然光下，炼苗3d。
(6)移栽：炼苗结束后，小心将苗株取出，去除培养基和褐化根部，分株移栽至装有细砂的混合培养基中，混合培养基为草炭：蛭石：细砂按体积比4:1:1混合，用0.2％的高锰酸钾喷洒搅拌，然后覆膜消毒。将装有富贵菜的混合培养基放置于自动化大棚中，保持光照强度2000-3000lx，相对湿度80％，每4小时左右通风20min，培养7天；7天后，将通风时间缩短为2小时左右，通风时间50min。保持相对光强度80％，co21200umol/mol。
(7)大田种植：定植前深耕田块，每亩施入腐熟有机肥2000kg，畦宽120cm，每畦定两行，株距40cm，每亩种植2000株。定植后按照常规管理大田；
(8)采收：定植35天后，挑取幼叶期富贵菜菜叶；
(9)加工：自来水清洗后，除去有病、污泥、残次叶片，20℃沥干15min，将叶片放置于0.15g/l的naclo杀菌剂中5min，取出20℃沥干5min；将叶片浸泡于包括0.05％质量百分比的抗坏血酸、0.15％质量百分比cacl2、0.3％质量百分比植酸的护色保鲜剂中5min，取出20℃沥干20min；
(10)保存：采用聚乙烯薄膜袋分装，3℃保存。
与现有技术相比，本发明的一种富贵菜的制备方法具有如下优点：
1、本发明的一种富贵菜的制备方法，是一套高效加工生产富贵菜的方法系统，从富贵菜最初生长控制到后期加工处理，本发明各步骤相互配合，形成体系，极大地提高了富贵菜的利用范围，也提高了其利用率，对富贵菜经济价值开发以及推广具有重要的意义。
2、本发明的一种富贵菜的制备方法通过合理选择富贵菜离体培养过程中各时期培养基，有效提高诱导率、分化率以及生根率，大大提高了富贵菜成活率，极大提高了富贵菜种质资源的保护。同时，通过很好控制富贵菜植株生长过程中光强度与co2，提高了富贵菜的生长品质。经测算，经过全程可控培养，一亩富贵菜可产6000-10000公斤，以18-20元/斤富贵菜叶，1-2元/株富贵菜种苗测算，除去增加的成本，本发明相对于传统富贵菜种植可增加收益达3-8万元。
3、本发明一种富贵菜的制备方法，在提高富贵菜种植效率和品质的基础上，也合理控制富贵菜加工过程中叶片的选择、叶片处理过程以及保藏温度，通过以上因素控制，最终富贵菜的色泽、叶绿素、维生素c等各指标参数相对传统加工方法都得到了很好维持，提高了富贵菜保藏时间，提高了其经济利用价值。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明了，下面通过实施例，对本发明进行进一步详细说明。但是应该理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限制本发明的范围。
本发明的优选实施例公开了一种富贵菜的制备方法，包括如下步骤：
(1)培养基配制：分别配制愈伤组织改良ms诱导培养基、愈伤组织改良ms分化与增殖培养基、愈伤组织生根培养基，其中，愈伤组织改良ms诱导培养基包括1.5mg/l的6-ba，0.3mg/l的2,4-d，0.1mg/l的naa，0.3mg/l的kt，1.3mg/l的pvp；愈伤组织改良ms分化与增殖培养基包括0.8mg/l的6-ba,0.15mg/l的naa，0.8mg/l的pvp；愈伤组织1/2ms生根培养基包括0.2mg/l的萘乙酸、2％质量分数的蔗糖；调节ph为5.8-6.0，高温杀菌、降温、无菌保存。
(2)叶片选择：9月上旬，选择由济南绿禾农业科技开发公司提供的生长健壮，无病虫害富贵幼叶，切去叶片边缘，获得1*1cm外植体。
(3)外植体处理：将获得的外植体在流水中冲洗10min，70％酒精浸泡30s，灭菌3min。
(4)接种：无菌操作台前，将处理过的外植体叶背朝下，接种于诱导培养基中。调节恒温培养室光照强度为,100lx,10天后转入850lx光照强度培养室中，光照时间为14h/d，保持湿度在80％。
(5)离体培养：10天后在无菌操作条件下，将愈伤组织块接种于分化与增殖培养基中，光强度1500lx，光照时间12h/d,10天后无菌转接到光强度2000lx光下，光照时间12h/d,直至长出分化芽；当分化芽高为2cm时，单株切下，转接至生根培养基上；2周后，苗高5cm,打开瓶盖，将培养基移至自然光下，炼苗3d。
(6)移栽：炼苗结束后，小心将苗株取出，去除培养基和褐化根部，分株移栽至装有细砂的混合培养基中，混合培养基为草炭：蛭石：细砂按体积比4:1:1混合，用0.2％的高锰酸钾喷洒搅拌，然后覆膜消毒。将装有富贵菜的混合培养基放置于自动化大棚中，保持光照强度2000-3000lx，相对湿度80％，每4小时左右通风20min，培养7天；7天后，将通风时间缩短为2小时左右，通风时间50min。保持相对光强度80％，co21200umol/mol。
(7)大田种植：定植前深耕田块，每亩施入腐熟有机肥2000kg，畦宽120cm，每畦定两行，株距40cm，每亩种植2000株。定植后按照常规管理大田。
(8)采收：定植35天后，挑取幼叶期富贵菜菜叶。
(9)加工：自来水清洗后，除去有病、污泥、残次叶片，20℃沥干15min，将叶片放置于0.15g/l的naclo杀菌剂中5min，取出20℃沥干5min；将叶片浸泡于包括0.05％质量百分比的抗坏血酸、0.15％质量百分比cacl2、0.3％质量百分比植酸的护色保鲜剂中5min，取出20℃沥干20min.
(10)保存：采用聚乙烯薄膜袋分装，3℃保存。
对照组：
1.培养基激素影响研究
(1)诱导率影响：制备不同组合改良ms培养基，在相同条件下，20天后，比较不同培养基条件下各外植体分化率，如表1所示，可见合适的6-ba、2,4-d、naa、kt浓度对获得高诱导率具有重要作用，添加合适的pvp能够明显降低褐化率。
表1诱导培养基成分对诱导率和褐化率的影响(单位：mg/l)
(2)分化率影响：同样地，如诱导率比较试验，在本申请所述的6-ba，naa，pvp比例范围下，分化率达到90％，增殖系数超过15，在缺失6-ba或者过多增加6-ba(超10％比例)条件下，分化率分别降至37.5或41.7，增殖系数分别降至4.1或5.5；在缺失或过多增加naa(超10％比例)时，分化率分别降至47.2或51.1，增殖系数分别降至6.2或7.8。当缺失pvp，愈伤组织褐化率超过50.1％，而过多增加pvp(超10％比例)分化率降至24.9％，增值系数降至3.5。
(3)腋芽增殖影响：同样地，如诱导率比较试验中，在同样20个接种数条件下，在本发明所述的萘乙酸和蔗糖比例范围下，增殖个数达到132个，增殖系数达到4.7；在萘乙酸缺失或增加(增加率为10％)条件下，增殖个数仅为6或65个，增殖系数为0.8或1.4；在蔗糖缺失或增加(增加率为10％)条件下，增殖个数为0或13个，增殖系数为0或0.5。
2.生长阶段研究
(1)光照强度影响：采用95％乙醇-丙酮混合液浸泡法，测定叶绿素含量；采用2,6-二氯酚靛滴定法测定维生素c含量。设定100％、85％、75％、65％和45％等5个光照强度等级，发现在光照强度为85％时为最高，叶绿素含量达到27.8mg/100g，vc含量达到11.8mg/g；当光照强度达到100％时，叶绿素含量为28.1mg/100g,vc含量仅为0.6mg/g；当光照强度为75％,叶绿素含量降至20.6mg/100g,vc含量降为0.9mg/g。
(2)co2影响：采用蒽酮比色法测定可溶性糖，采用考马斯亮蓝测g-250法测定可溶性蛋白质含量。经过试验，发现随着co2浓度升高，富贵菜中可溶性糖含量和富贵菜产量不断上升，但可溶性蛋白质含量却不断下降，黄酮含量呈现先增加后减少的趋势，如表2所示。
表2co2对富贵菜可溶性糖和氮含量的影响(单位：mg/l)
3.加工过程研究
(1)杀菌剂影响
采用sc-80c全自动色差计测定色泽，用l值表示色泽，l值越大，表示亮度越高、褐变越轻；反之，则表示褐变越严重。以细菌培养法，测定细菌总数。以h2o2作为杀菌剂对照。根据结果，在本发明所述的浓度范围下naclo相对于h2o2能够更好保证富贵菜色泽。根据测算，保存4天后，经过naclo处理后的l值为37，相对于原始的43下降了6个l值；经过h2o2处理后的l值为29，相对于原始43下降了14个l值。同时，超过0.25g/l浓度范围时，以0.30g/l做处理，保存4天后，l值便下降至22。同时，在浓度范围低于0.15g/l时，经过处理后细菌总数为16*104cfu/g，而同样以0.15cfu/处理后，细菌总数下降为2.1*104cfu/g。
(2)贮藏温度影响
以0℃、3℃、5℃、10℃储藏温度，进行平行试验，通过感官品质作为储藏状态判定指标。在3℃和5℃条件下，5天后，富贵菜组织状态最好，新鲜有光泽，在10℃条件下，5天后，富贵菜香味变淡，颜色变暗，出现腐烂现象，而在0℃条件下，富贵菜香味变淡，出现霜冻腐烂现象。
可以知道，上述实施例仅为了说明发明原理而采用的示例性实施方式，然而本发明不仅限于此，本领域技术人员在不脱离本发明实质情况下，可以做出各种改进和变更，这些改进和变更也属于本发明的保护范围。