本发明涉及石斛种植领域，具体涉及一种石斛的高产种植方法。
背景技术
石斛是我国传统常用名贵中药材，为兰科(orchidaceae)石斛属(dendrobiums.w)多种植物的干燥茎的统称。在我国已有2000多年的药用历史，早在《神农本草经》、《本草纲目》等著作中就有记载，并列居上品。著名的有金钗石斛(d.nobilelindl)、铁皮石斛(d.officinalekimuraetmigo)、铁皮石斛(d.huoshanense)[1]等。目前我国76种石斛属植物中，有近40种被作为药用。传统中医常将其用于滋阴清热、生津益胃、止咳润肺、清音明目等[2]。现代药理研究表明石斛具有多种医药功效，可预防和治疗白内障、增强免疫功能、治疗肿瘤、降血糖、抗氧化等，在临床中应用相当广泛。
目前国内金钗石斛和铁皮石斛人工栽培主要采取大棚种植、挂树种植和垒石种植。中国发明专利cn103004566a公开了一种铁皮石斛种植方法，通过搭建大棚可实现18个月采收。中国发明专利cn102356748a公开了一种铁皮石斛仿野生挂树种植的方法，达到了石斛高产量的生产。但是大棚种植病虫害发病率高，投资大，占用耕地，大面积推广有一定难度，而挂树种植管理难度大，生长条件可控性差。中国发明专利cn103392580a提出了一种金钗石斛原生态垒石栽培方法，通过将石块垒成石堆，模拟金钗石斛自然生长环境栽培金钗石斛，提高了产量。但是该方法石堆中间需填筑泥土，对实施场地有一定要求，且该发明提出的栽培方法，与金钗石斛野生环境有一定差别，在一定程度上影响药材品质。
总之，现有的石斛种植方法都还是不太成熟，有的产量较低，有的成本太高，特别是成活率低，而且很难保证石斛的品质，所以人们需要研究最佳的石斛种植方法。
技术实现要素：
本发明要解决的技术问题是提供一种石斛高产种植方法，具有产量高、品质好，种植工艺简单等优点，同时本发明方法可以广泛地应用推广和普及到广大石斛的种植户那里，可以显著降低成本，提高产量和品质，有着广泛的市场前景。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
一种石斛的高产种植方法，具体包括以下步骤：
(1)离体育苗：
a、配置不定芽诱导培养基，并对不定芽诱导培养基进行消毒；
b、选择石斛无病虫害的叶片和嫩茎作为外植体，用消过毒的刀具将外植体剪下来，修剪外植体，要求长度为0.5cm-1cm；将修剪好外植体放入到不定芽诱导培养基中进行培养；
c、外植体在不定芽诱导培养基中培养15-20天后，配置增殖培养基，并对增殖培养基进行消毒杀菌；
d、选择长出新芽的外植体，将带有新芽的外植体放入到增殖培养基中进行增殖培养；
e、带有新芽的外植体在增殖培养基中培养10-15天，配置生根培养基，并对生根培养基进行消毒杀菌；
f、选择长出丛芽的外植体，并将其放入到生根培养基中进行培养,让其长出发达的根系；
(2)移植培养：
a、选择湿润、弱光、通风、砂质土壤种植田，并结合深耕施基肥；
b、在种植田作宽30-40cm，长100-120cm，高15-17cm的畦；在种植田上搭1.5-2.0m的荫棚，荫棚中的温度为15-30℃，湿度60％-90％，在种植田均匀的撒入粗树皮10-15cm，然后再盖上细松树皮5-10cm，消毒，然后把水喷足，杀菌后，按季节种植合适为宜；
c、选择在生根培养基中培养的具有发达根系的外植体作为移植植株，并在移植植株的根部包裹一层苔藓；按照10×20cm的株行距，将移植植株移栽到种植田内，用细沙和小砾石填埋至7-10cm，压实后浇定根水；
d、栽种后第二年开始，在3-4月和10-11月里，进行一次除草并追施腐熟农家肥上清液；每年在5-10月间，每隔1-2个月，用质量比为2％的过磷酸钙或1％的硫酸钾进行根外施肥；每年春季发芽前或采收石斛时，应剪去部分老枝和枯枝，以及生长过密的茎枝，使得隐蔽度55％-65％；
(3)采收：
a、当年采收：栽培当年10月至下一年4月间开始进行部分采收；
b、栽培2-3年后采收：栽培2-3年后在10月至下一年4月间开始进行采收，采收时，用消过毒的剪刀或者镰刀从茎的基部将老植株剪下来，保留嫩枝。
所述的离体育苗，在离体培养时，培养温度为25℃-28℃，每天光照9-10小时，光照强度为1800-1900lx。
所述的石斛的高产种植方法，其特征在于：所述的基肥由下列重量份的组分原料混合而得：油饼50-80份、豆渣80-100份、牛粪40-60份、猪粪40-60份、肥泥60-80份、附着肥料20-30份、磷肥10-20份、氮肥5-10份。
所述的石斛的高产种植方法，其特征在于：所述的附着肥料包括油脚、猪毛、人发中的一种或者多种。
所述的石斛的高产种植方法，其特征在于：所述的不定芽诱导培养基成分包括：ms培养基200g/l、糖35g/l和椰子汁100ml/l，ph值为5.6-5.8。
所述的石斛的高产种植方法，其特征在于：所述的增殖培养基成分包括：ms培养基200g/l、naa0.1g/l、6-ba0.2g/l、脯氨酸0.3g/l、糖35g/l、香蕉100g/l和琼脂3.7g/l，ph值为5.6-5.8。
所述的石斛的高产种植方法，其特征在于：所述的生根培养基成分包括：1/2ms培养基200g/l、naa0.2g/l，6-ba0.1g/l、脯氨酸0.3g/l、糖35g/l、琼脂3.7g/l、香蕉100g/l，ph值为5.6-5.8。
所述的石斛为铁皮石斛或金钗石斛中的一种。
本发明的石斛种植方法，大田移栽生根快，成活率高，而且可以有效的防止幼苗受到病虫害的威胁，大田移栽成活率可达到98.5％以上,在移栽后的当年即可产生收益，可直接剪取石斛枝条，优选在第二年或第三年剪取石斛枝条，可有效保障其药效价值和经济价值，亦可在石斛盛花期摘取石斛花作为产品。对于第三年剪取的石斛枝条条先进性干燥，然后采用苯酚-硫酸法测定多糖含量，其石斛多糖含量测得为38.86％。采用本实施例的方法种植的铁皮石斛，单位土地面积产量可提高9-12倍。
附图说明
图1为检测石斛多糖含量的苯酚-硫酸法标准曲线,
曲线中，横坐标为葡萄糖浓度(c)(μg/ml)，纵坐标为吸光度(d)。
具体实施方式
下面将对本发明技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造劳动力的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。
实施例1一种铁皮石斛的高产种植方法，具体包括以下步骤：
(1)离体育苗：
a、配置不定芽诱导培养基，不定芽诱导培养基成分包括：ms培养基200g/l、糖35g/l和椰子汁100ml/l，调节ph值为5.7，并进行消毒；
b、选择石斛无病虫害的叶片和嫩茎作为外植体，用消过毒的刀具将外植体剪下来，修剪外植体，要求长度为0.5cm-1cm；将修剪好外植体放入到不定芽诱导培养基中进行培养；
c、外植体在不定芽诱导培养基中培养15-20天后，配置增殖培养基，增殖培养基成分包括：ms培养基200g/l、naa0.1g/l、6-ba0.2g/l、脯氨酸0.3g/l、糖35g/l、香蕉100g/l和琼脂3.7g/l，调节ph值为5.6-5.8，并对其进行消毒杀菌；
d、选择长出新芽的外植体，将带有新芽的外植体放入到增殖培养基中进行增殖培养；
e、带有新芽的外植体在增殖培养基中培养10-15天，配置生根培养基，生根培养基成分包括：1/2ms培养基200g/l、naa0.2g/l，6-ba0.1g/l、脯氨酸0.3g/l、糖35g/l、琼脂3.7g/l、香蕉100g/l，调节ph值为5.6-5.8，并对生根培养基进行消毒杀菌；
f、选择长出丛芽的外植体，并将其放入到生根培养基中进行培养，让其长出发达的根系，即可移栽；
(2)移植培养：
a、选择湿润、弱光、通风、砂质土壤种植田，并结合深耕施基肥；
b、在种植田作宽30-40cm，长100-120cm，高15-17cm的畦；在种植田上搭1.5-2.0m的荫棚，荫棚中的温度为15-30℃，湿度60％-90％，在种植田均匀的撒入粗树皮14cm，然后再盖上细松树皮8cm，消毒，然后把水喷足，杀菌后，喷水10-15天后进行种植；
c、选择在生根培养基中培养的具有发达根系的外植体作为移植植株，并在移植植株的根部包裹一层苔藓；按照10×20cm的株行距，将移植植株移栽到种植田内，用细沙和小砾石填埋至7-10cm，压实后浇定根水；
d、栽种后第二年开始，在3-4月和10-11月里，进行一次除草并追施腐熟农家肥上清液；每年在5-10月间，每隔1-2个月，用质量比为2％的过磷酸钙或1％的硫酸钾进行根外施肥；每年春季发芽前或采收石斛时，应剪去部分老枝和枯枝，以及生长过密的茎枝，使得隐蔽度55％-65％；
(3)采收：栽培2-3年后，在10月至下一年4月间开始进行采收，采收时，用消过毒的剪刀或者镰刀从茎的基部将老植株剪下来，保留嫩枝。
其中，基肥由下列重量(kg)的组分原料混合而得：油饼70、豆渣90、牛粪50、猪粪50、肥泥70、附着肥料25、磷肥15、氮肥8。
本实施例种植的铁皮石斛，病虫害特别少，成活率高达98.8％，统计种植三年采收的石斛与常规种植方法比较，单位土地面积产量提高10倍。
特别注意：在具体种植过程中，施肥水时间和次数主要根据空气湿度而定，湿度大时少施，久旱无雨时勤施，涝时少施，要注意温湿度变化，灵活掌握；除草时将生长在石斛株间和周围的杂草及枯枝落叶除草则可；每年在5-10月间，每隔1-2个月，用质量比为2％的过磷酸钙或1％硫酸钾进行根外施肥；每年春季发芽前或采收石斛时，应剪去部分老枝和枯枝，以及生长过密的茎枝，使得隐蔽度为55-65％；石斛栽种5年以后，植株萌发很多，老根死亡，基质腐烂，病菌侵染，使植株生长不良，故应根据生长情况进行翻兜，除去枯朽老根，进行分株，另行栽培，以促进植株生长和增产。采收，栽培2-3年后，在10-4月间进行采收，此时，石斛已经停止生长，枝茎坚实饱满，含水量少，干燥率高，加工品质好，用消过毒的剪刀或镰刀从茎基部将老植株剪下来，保留嫩枝条，以便来年陆续收获，达到一年栽种，多年受益的目的。
通过十几年种植得出的结论，对于江淮之间地区在5-6月份是石斛种植的最佳时机，成活率快，效果好，用松树皮种出的石斛质量好，多糖及生物碱含量高，也可以用仿野生在活树上种植，我们已试验成功，各项数据已达标。
采用本实施例1的方法种植的铁皮石斛，单位土地面积产量可提高9-12倍，大田移栽成活率可达到98.5％以上。在移栽后的当年即可产生收益，可直接剪取石斛枝条，优选在第二年或第三年剪取石斛枝条，可有效保障其药效价值和经济价值，亦可在石斛盛花期摘取石斛花作为产品。对于第三年剪取的石斛枝条条先进性干燥，然后采用苯酚-硫酸法测定多糖含量，其石斛多糖含量测得为38.86％。具体检测方法如下：
一、材料与仪器试剂
铁皮石斛由浙江雁荡千山铁皮石斛种植基地提供。紫外可见分光光度计：722g型，上海精密科学仪器有限公司；milli-qa10型纯水仪(美国millipore公司)；mettlertoledoal204型电子天平(瑞士)；dzf-6050型真空干燥箱(上海恒一科学仪器有限公司)；hh-2型数显恒温水浴锅(金坛市江南仪器厂)。
石油醚(60-90℃)、乙醇、苯酚、浓硫酸均为分析纯，葡萄糖标准品(分析纯，用前105℃烘2h)。
二、方法和检测结果
1、铁皮石斛多糖的提取与精制
称取铁皮石斛粉末25.0g，置圆底烧瓶中，加入石油醚150ml，回流提取1h(去脂)，过滤，挥干溶媒。滤渣用80％乙醇150ml回流提取1h，过滤，挥干溶媒。滤渣用200，150，150ml蒸馏水依次回流提取，每次1h，过滤，合并滤液，浓缩至150ml，与等体积sevag试剂(正丁醇∶氯仿为4∶1)萃取多次，取上清液，缓慢加入乙醇，使溶液含乙醇80％，在滴加过程中用磁力搅拌器搅拌，静置过夜。过滤，沉淀用无水乙醇、丙酮清洗多次。沉淀置60℃真空干燥箱干燥，得铁皮石斛精制多糖，封装备用。
2、样品制备。本实施例种植的铁皮石斛，剪取第三年石斛枝条茎，干燥后粉碎，取0.25g粉末置圆底烧瓶中，加入石油醚50ml，脱脂30min，趁热过滤，挥干溶媒。滤渣用80％乙醇回流提取1h，趁热过滤，滤渣用80％乙醇充分洗涤，再次挥干溶媒。残渣用50ml蒸馏水回流提1.5h，过滤，再用35ml蒸馏水回流提1h，过滤，用少许热水洗涤药渣和烧瓶，合并滤液，冷却后在100ml容量瓶中定容，得样品溶液。
3、对照品溶液的制备。精密称取无水葡萄糖100mg加蒸馏水定容至100ml，摇匀，得1mg·ml－1的葡萄糖对照品溶液。
4、5％苯酚溶液的制备。精密称取5g苯酚，置100ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀后，放置在棕色瓶中。
5、标准曲线的制备
分别精密量取1mg·ml－1的葡萄糖对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0ml置100ml容量瓶中，各加蒸馏水至刻度。精密量取上述各浓度的标准液2.0ml于10ml具塞试管中，精密加入5％苯酚溶液1.0ml，摇匀，再精密加浓硫酸5.0ml，摇匀，放置5min，置90℃水浴中加热，15min，取出，室温放置冷却，以相应试剂为空白对照，按照紫外-可见分光光度法，测定490nm处吸光度。以浓度(c)(μg/ml)为横坐标、吸光度(d)为纵坐标，进行回归计算，绘制标准曲线(如图1所示)。得回归方程y＝0.0621x－0.0242，相关系数r2＝0.9989。表明葡萄糖浓度在2.5-15.0μg·ml－1范围与吸光度有良好的线性关系。
6、换算因数的测定
精密称取60℃干燥至恒重的铁皮石斛精制多糖10mg，配制成0.04mg·ml－1溶液。取2.0ml按苯酚-硫酸法标准曲线的制备方法，测定吸光度，从回归方程中求得供试液中葡萄糖的质量，按f＝w/c计算换算因数。式中:w为实际多糖质量，c为测得的多糖溶液中葡萄糖的质量，计算结果为f＝1.248。
7、样品测定：精密量取本实验制得的石斛样品溶液2ml于10ml具塞试管中，精密加入5％苯酚溶液1.0ml，摇匀，再精密加浓硫酸5.0ml，摇匀，放置5min，置90℃水浴中加热15min，取出，室温放置冷却，以相应试剂为空白对照，按照紫外-可见分光光度法，测定490nm处吸光度。记录吸光度值，查图1的标准曲线得知对应的葡萄糖质量浓度，多糖的质量分数＝(cs·d·v·f)/w。式中:cs为供试品溶液中葡萄糖的质量浓度；d为供试品溶液的稀释倍数；f为多糖的换算因数；v为供试品溶液的体积；w为样品质量，根据公式可以计算出铁皮石斛的多糖含量，同样的方法测6批同一批次的样品的的多糖含量，检测结果石斛样品的多糖含量平均为38.86％。