一种通过试管苗连续生产诺丽叶片茶的方法与流程

文档序号:17487857发布日期:2019-04-23 20:07阅读:290来源:国知局
本发明属于农业
技术领域
,涉及一种通过试管苗连续生产诺丽叶片茶的方法。
背景技术
:目前市面上有多种诺丽叶片茶,诺丽叶含有抗氧化剂和生物类黄酮,如萜烯类化合物、植物甾醇类、脂肪酸、甙类、环烯醚萜苷类、黄酮甙类等。另外,诺丽叶还富含许多维生素、矿物质和微量元素,其中fe含量非常丰富,远高于市售茶叶的含量。更为重要的是,诺丽叶还富含谷甾醇、熊果酸、植物固醇、蛋白质、糖苷和蒽醌,这使诺丽叶片茶具有很好的保健效果。目前市面上销售的诺丽叶片茶是由诺丽果树叶制成。而诺丽果树叶较大,最大叶长可达30cm,宽20cm,因此在制茶时需要剪碎或烘干后压碎,导致外观品质低下。诺丽原生于热带岛屿或热带雨林,属于典型的热带树种,不适于在我国大多数区域种植,导致其价格昂贵。市售的诺丽叶片茶还存在农药残留和含有重金属的风险。技术实现要素:(一)发明目的本发明的目的是提供一种通过组织培养诺丽试管苗来连续生产诺丽叶片茶的方法,通过使用组织培养诺丽试管苗,并通过移苗得到诺丽叶片及新的诺丽试管苗进行连续生产诺丽叶片茶,来解决诺丽叶片太大、不适于在我国大多数区域种植、农药残留和含有重金属的问题。使用本发明提供的方法得到的诺丽叶片茶大小适中,不受气候限制,无农药残留,也不含重金属。(二)技术方案为解决上述问题,本发明的一个方面提供了一种通过试管苗连续生产诺丽叶片茶的方法,包括:s1:对诺丽种子进行无菌萌发并继代培养,得到多代试管苗,摘取每一代所述试管苗叶片;s2:对摘取的所述试管苗叶片进行加工,即得到诺丽叶片茶。进一步的,步骤s1包括:s11:将诺丽种子剥去种壳并进行消毒,然后接种于萌发培养基,培养第一预设时间后得到第一代试管苗。s12:将所述第一代试管苗置于超净工作台,摘取所述第一代试管苗叶片,并对其茎分割成多个茎段。s13:将茎段接种于扩繁培养基,置于培养室培养第二预设时间,得到第二代试管苗。s14:对所述第二代试管苗重复s12-s13进行培养,得到下一代试管苗和摘取的每一代试管苗叶片。进一步的,步骤s1还包括:s15:分别统计各代试管苗的数量,在一代所述试管苗的数量达到预设值时,将该代试管苗置于超净工作台,剪切茎尖,将所述茎尖接种于生产培养基,置于培养室培养所述第二预设时间,得到第一代生产试管苗,摘取所述第一代生产试管苗的叶片。s16:使用所述第一代生产试管苗重复s15,得到多代生产试管苗。进一步的,所述步骤s1中:所述萌发培养基为无糖ms固体培养基。所述第一预设时间大于等于30天。所述扩繁培养基为含0.1~0.3mg/lnaa的3%ms固体培养基。所述第二预设时间大于等于30天。所述生产培养基为3%ms固体培养基。进一步的,步骤s11包括:将诺丽种子剥去种壳并进行消毒,然后接种于无糖ms固体培养基,培养30~45天后得到第一代试管苗。进一步的,步骤s12具体包括:将所述第一代试管苗置于超净工作台,摘取所述第一代试管苗叶片,并对其茎分割成多个茎段,使每个分割后的茎段包含一个芽点。进一步的,步骤s13具体包括:s131:配制包括0.1~0.3mg/lnaa的3%ms固体培养基,将其ph值调至5.6~5.9,作为扩繁培养基,灭菌后置于超净工作台备用。s132:将所述包含一个芽点的茎段接种于所述扩繁培养基,置于培养室培养30~40天,得到第二代试管苗。进一步的,步骤s15包括:s151:配制3%ms固体培养基,将其ph值调至5.8~5.85,作为生产培养基,灭菌后置于超净工作台备用。s152:分别统计各代试管苗的数量,在一代所述试管苗的数量达到预设值时,将该代试管苗置于超净工作台,摘取所述该代试管苗叶片,剪切茎尖,将所述茎尖接种于所述生产培养基,置于培养室培养30~45天,得到第一代生产试管苗,摘取所述第一代生产试管苗的叶片。进一步的,所述培养室培养条件为:温度为26~30℃。光源为光照强度2000~3000lux的全光谱冷光。光照时间为每天12~18小时。使用组织培养的方式在室内获取诺丽叶片茶,因此只受室内环境的影响而不受自然环境的限制;因为组织培养得到的诺丽试管苗株高通常为10cm左右,叶长一般4~5cm,叶宽一般0.5~1cm,所以得到的诺丽叶片大小适中且十分幼嫩,更适合作为茶饮料的原料;组织培养无需使用农药,而培养基中不含有重金属,因此得到的诺丽叶片茶无农药残留和重金属的问题。(三)有益效果本发明的上述技术方案具有如下有益的技术效果:1、不受地理环境、自然条件限制,适于我国所有有组培室的地区;2、叶片大小适中且十分幼嫩,更适合作为制作叶片茶的原料,提升诺丽叶片茶外观和口感;3、无农药残留且不含重金属,更加健康。具体实施方式为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明了,下面结合具体实施方式,对本发明进一步详细说明。应该理解,这些描述只是示例性的,而并非要限制本发明的范围。此外,在以下说明中,省略了对公知结构和技术的描述,以避免不必要地混淆本发明的概念。根据本申请的一个实施方式,一种通过试管苗连续生产诺丽叶片茶的方法,包括以下步骤:s1:对诺丽种子进行无菌萌发并继代培养,得到多代试管苗,摘取每一代所述试管苗叶片。其中诺丽(morindacitrifolia)原产于南亚、澳大利亚及一些太平洋岛屿,其叶具有较强的抗氧化性质,对牙龈炎、牙周病、喉痛、喉炎、感冒、头痛、发烧、风湿性关节炎、发炎、痛风、骨折、扭伤、皮肤病等有一定的功效,是一种传统的药食同源植物。诺丽叶片对生,叶脉明显,膜质,有光泽,一般长10~25cm,宽5~18cm,最大叶长可达30cm,宽20cm,含有抗氧化剂和生物类黄酮,如萜烯类化合物、植物甾醇类、脂肪酸、甙类、环烯醚萜苷类、黄酮甙类等。其中使用诺丽种子进行无菌萌发并继代培养成本比使用诺丽其他组织进行组织培养更低,步骤更简单。还可以将诺丽种子的胚切下进行组织培养,同样可以得到试管苗。在诺丽试管苗在扩繁或转苗的过程中需要将叶片摘下,诺丽试管苗的叶片幼嫩是做叶片茶的优质原料,进行加工就可以得到诺丽叶片茶。诺丽试管苗在无菌环境下生长,避免了诺丽叶片茶在自然条件下生长可能产生病虫害而喷施农药导致的农药残留。继代培养是指对来自于外植体所增殖的培养物(包括细胞、组织或其切段)通过更换新鲜培养基及不断切割或分离,进行连续多代的组织培养。s2:对摘取的试管苗叶片进行加工,即得到诺丽叶片茶。其中收集剪下的诺丽叶片还可以去掉叶柄或者在剪下叶片时不保留叶柄,这样得到的诺丽叶片茶叶片含量更高,提高诺丽叶片茶的品质。其中本实施方法中诺丽叶片因为生长于组培瓶中,组培苗一般长至与组培瓶同高即可进行继代培养,通常30~45天,因此,得到的诺丽叶片更加幼嫩,也不会长得过大,制作的诺丽叶片茶品质更好。其中加工过程可以为手工炒制或者机器炒制,可以包括制茶工艺中的任何一种加工方法,如晾青、杀青、抄青、揉捻、团揉、闷堆、发酵、干燥、紧压、蒸,但不限于上述列举。诺丽叶片茶传统制作方法一般用叶片直接烘干,或者剪成合适大小烘干。但由于诺丽叶片较大,且烘干后叶片脆度增加,因此很容易压碎,导致产品卖相较差。此外,压碎后会产生大量细小碎末,只能放入茶包中销售,势必导致产品档次下降。而实施方法所生产的诺丽叶片茶,条索卷曲、粗壮、完整,呈油黑色,气味清香怡人。发明人还惊喜的发现本实施了中的诺丽叶片茶还没有传统的诺丽叶片茶的酸味和青草味。为保证诺丽叶片茶的口感和质量,发明人还邀请了沈晓进高级农艺师(茶学)、周斌星教授(茶学)、吕才有教授(茶学)专家等进行品鉴,专家对诺丽叶片茶的外形、汤色、口感、香气、茶韵、色泽等指标均给予高度评价。本实施方法过程均在室内进行,因此只受培养室条件影响而不会受到自然环境和气候的影响。若能提供适合的室内条件,本实施方法不仅适合在诺丽适宜生长或不适宜生长的地区进行,也适合条件极端的环境,如南极科考站、宇宙空间站等。在一可选实施例中,步骤s1包括:s11:将诺丽种子剥去种壳并进行消毒,然后接种于萌发培养基,培养第一预设时间后得到第一代试管苗。其中剥去种壳可以使种子发芽更加顺利,还能使消毒更加彻底。使用种子在培养基中发芽得到诺丽试管苗母株的方法成本更低,操作也更简单,而且诺丽发芽时间也大大缩短了。采集的诺丽成熟果实要在室温放置1周待诺丽果变软后洗出诺丽种子再进行剥去种壳、消毒。诺丽种子消毒过程为:剥去种壳后用无菌水浸泡2小时,转至超净工作台,用2%次氯酸钠浸泡4分钟,无菌水冲洗两次,75%酒精浸泡30秒,再用无菌水冲洗三次,最后使用无菌滤纸吸干表面残余水分。试管苗在无菌环境下生长,避免了诺丽在自然条件下生长可能产生病虫害而喷施农药导致的农残。在已知成分的培养基中生长,也不会产生重金属积累。s12:将第一代试管苗置于超净工作台,摘取第一代试管苗叶片,并对其茎分割成多个茎段。s13:将茎段接种于扩繁培养基,置于培养室培养第二预设时间,得到第二代试管苗。其中试管苗的含义为在组织培养中成苗前的过渡阶段,在试管或其他组织培养容器中培育的植物幼苗。其中扩繁即将将生物扩大培养繁殖,这里是指使用诺丽试管苗母株作物原材料,通过组织培养的方式得到更多的诺丽试管苗。其中超净工作台(cleanbench),又称净化工作台,是为了适应现代化工业、光电产业、生物制药以及科研试验等领域对局部工作区域洁净度的需求而设计的。其通过风机将空气吸入预过滤器,经由静压箱进入高效过滤器过滤,将过滤后的空气以垂直或水平气流的状态送出,使操作区域达到百级洁净度,保证生产对环境洁净度的要求。每个茎段都可以通过组织培养生长为一个完整的诺丽试管苗。其中对茎分割得到多个茎段,将茎段接种于扩繁培养基培养后可以得到多个试管苗,其中多个是指大于等于2个,因为试管苗大小的限制分割得到的茎段数量为2~15个。其中还可以先对茎段进行分割后再剪下叶片。s14:对第二代试管苗重复s12-s13进行培养,得到下一代试管苗和摘取的每一代试管苗叶片。重复步骤s12-s13能够不断的得到诺丽叶片以及新的诺丽试管苗,使得得到诺丽叶片茶的过程能够连续不断,进而可以推广到实际生产中。摘取的每一代试管苗叶片都可以作为诺丽叶片茶原料。其中试管苗的培养是在组培瓶中进行,组培瓶有多种规格,如240ml、350ml、630ml、650ml、750ml等,但不限于上述举例,组培瓶规格越大,组培瓶直径和高度一般越大。一般倒入的培养基高1cm左右,如0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5cm,但不限于以上举例,可以根据培养时间长度适当的提高或降低,植物材料可以在其中生长1~2月。其中240ml组培瓶较为常用。在一可选实施例中,步骤s1还包括:s15:分别统计各代试管苗的数量,在一代试管苗的数量达到预设值时,将该代试管苗置于超净工作台,剪切茎尖,将茎尖接种于生产培养基,置于培养室培养第二预设时间,得到第一代生产试管苗,摘取第一代生产试管苗的叶片。s16:使用第一代生产试管苗重复s15,得到多代生产试管苗。试管苗数量的预设值是指在某一代诺丽试管苗数量能够达到诺丽叶片茶产量需求或工作人员处理数量的上限时诺丽试管苗的总数,达到这个总数后可以不再进行扩繁,每株试管苗只使用茎尖进行下一代组织培养得到一株下一代试管苗。这个总数还可以按照每日生产量及第二培养周期来确定。每日生产量为操作人员每日能够按照步骤s15处理的诺丽试管苗数量。每日按照步骤s15处理过的诺丽试管苗培养第二培养周期的时间后又能按照步骤s15进行处理,得到诺丽叶片及诺丽试管苗。当诺丽试管苗总量为每日生产量与第二培养周期的乘积时,则可以连续重复步骤s3而不断地得到诺丽叶片。通过试管苗连续生产诺丽叶片茶,可以不受自然环境的控制,在人工控制的环境条件下形成标准一致的纯叶片茶。试管苗扩繁或转苗过程中,按照每个工人每工作台工作8小时转苗1000瓶计算,每瓶3棵试管苗,每株试管苗的叶片按14片计算,每个工作台可以收集诺丽生叶42000片,若有10位工人进行诺丽组培苗生产,每天可以产生420000片诺丽生叶。以这些试管苗生叶为原料生产优质试管苗诺丽叶片茶。诺丽鲜叶约含有80%的水分,一般2kg鲜叶出0.5kg干茶。本实施方法中的试管苗10片叶子平均重0.84g,以此推算,42万片片叶子重35.28kg。因此,每天推测可以生产约8.82kg纯诺丽叶片干茶。虽然效率较直接在诺丽园内采集诺丽叶慢,但是本实施例可以每天都有诺丽叶产出,弥补了诺丽只能在一段时间采摘的缺陷。而且生产出的诺丽叶片比诺丽园采摘的叶片更加幼嫩,还不含农药残,无重金属污染。在一可选实施例中,步骤s1中:萌发培养基为无糖ms固体培养基。生产培养基为3%ms固体培养基。ms固体培养基是murashige和skoog于1962年为烟草细胞培养设计的,其特点是无机盐和离子浓度较高,是较稳定的离子平衡溶液,它的硝酸盐含量高,其养分的数量和比例合适,能满足植物细胞的营养和生理需要,因而适用范围比较广,多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。其中固体培养基凝固剂可以是琼脂、明胶、硅胶,但不限于上述列举。配制1l3%ms固体培养基通常包括100ml大量元素、10ml微量元素、10ml有机元素、10ml铁盐,30g蔗糖,6.5g琼脂粉,用水为去离子水,其中3%是指ms培养基中含有3%的蔗糖,即1lms培养基中含有30g蔗糖,蔗糖含量还可以为2~5%。其中无糖ms固体培养基不添加蔗糖。本发明实施例中如不做特殊说明ms培养基均指ms固体培养基,配置过程中使用6~10g琼脂粉。第一预设时间大于等于30天。第二预设时间大于等于30天。第一预设时间及第二预设时间大于等于30天,可以为30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50天但不限于上述列举,例如,可以根据环境条件适当的提高或降低,优选的可以为30~50天、35~45天、40~55天、30~50天,更优选的为35~48天、33~42天,还可以为25~34天、28~42天。扩繁培养基为含0.1~0.3mg/lnaa的3%ms固体培养基。其中naa(1-naphthylaceticacid)为萘乙酸,纯品萘乙酸为无色针状晶体,工业品为黄褐色针状晶体,易溶于热水、乙醇、乙酸、丙酮和苯,是一种广谱植物生长调节剂。可用于小麦、水稻增加有效分蘖,提高成穗率,促进籽粒饱满,增产显著。也用于甘薯、棉花增产。用于茄类和瓜类,可防止落花落果和形成无籽果实,还能增加植物抗旱涝、抗盐碱、抗倒伏能力。3%ms固体培养基添加0.1~0.3mg/lnaa后能够支持诺丽含芽点的茎段生长为诺丽试管苗。其中naa的含量可以为0.1、0.2、0.3mg/l但不限于上述列举。例如,可以根据适当的提高或降低,例如可以为0.15~0.25mg/l,或者为0.12~0.28mg/l。在一可选实施例中,步骤s11包括:将诺丽种子剥去种壳并进行消毒,然后接种于无糖ms固体培养基,培养30~45天后得到第一代试管苗。在一可选实施例中,步骤s12具体包括:将第一代试管苗置于超净工作台,摘取第一代试管苗叶片,并对其茎分割成多个茎段,使每个分割后的茎段包含一个芽点。其中使用诺丽试管苗扩繁。一株诺丽试管苗大约有4~6个芽点,通过一次扩繁即能得到4~6株新的诺丽试管苗。在一可选实施例中,步骤s13具体包括:s131:配制包括0.1~0.3mg/lnaa的3%ms固体培养基,将其ph值调至5.6~5.9,作为扩繁培养基,灭菌后置于超净工作台备用。其中培养基ph值使用10%naoh或10%hcl溶液调节,ph值可以调至5.6、5.7、5.8、5.9但不限于上述列举,例如,可以适当的提高或降低,如5.5~5.95等。s132:将包含一个芽点的茎段接种于扩繁培养基,置于培养室培养30~45天,得到第二代试管苗。其中培养时间30~45天,可以为30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45天但不限于上述列举,例如,可以根据环境条件适当的提高或降低,优选的可以为35~43天、33~42天。配制诺丽扩繁培养基后要使用高压蒸气灭菌锅进行灭菌,待培养基温度降至常温后摆放于超净工作台备用。其中降温方法可以为风冷或自然空冷。s22:将诺丽试管苗母株置于超净工作台,将其叶片剪下,对茎段进行分割,使每个分割后的茎段至少包含一个芽点,将含芽点的茎段接种于诺丽扩繁培养基,置于培养室培养至少30天,得到诺丽试管苗。其中使用含有芽点的茎段作为培养材料能够得到诺丽试管苗,并减少植物生长调节剂的使用量。每瓶培养基可以接种4~6个含芽点的茎段,分割后的茎段上每个芽点都能长成新的诺丽试管苗。其中培养时间至少30天,可以为30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50天但不限于上述列举,例如,可以根据环境条件适当的提高或降低,优选的可以为30~50天、35~45天、40~55天、30~50天,更优选的为35~48天、33~42天,还可以为25~34天、28~42天。在一可选实施例中,步骤s15包括:s151:配制3%ms固体培养基,将其ph值调至5.8~5.85,作为生产培养基,灭菌后置于超净工作台备用。生产培养基ph值使用10%naoh或10%hcl溶液调节,ph值可以调至5.8、5.81、5.82、5.83、5.84、5.85但不限于上述列举,例如,可以适当的提高或降低,如5.7~5.9等。使用已知成分的培养基能够保证其中不含有重金属,从而生产的茶中也不会含有重金属。在环境污染方面所说的重金属主要是指汞(水银)、镉、铅、铬以及类金属砷等生物毒性显著的重元素。s152:分别统计各代试管苗的数量,在一代试管苗的数量达到预设值时,将该代试管苗置于超净工作台,摘取该代试管苗叶片,剪切茎尖,将茎尖接种于生产培养基,置于培养室培养30~45天,得到第一代生产试管苗,摘取第一代生产试管苗的叶片。其中茎尖是指茎的顶端分生组织及其周缘部分。切下诺丽试管苗茎尖可以使用手术刀或者直接使用剪刀切下。切下茎尖只用一步就可以完成,而使用带芽点的茎段需要将其两端切下,因此使用茎尖作为生产培养的材料能提高效率。在诺丽叶片茶生产过程中,只使用含有一定生长激素的茎尖作为材料,所以培养基中不需要再添加植物生长调节剂,可以降低成本。剪下叶片的同时去掉叶柄可以提高诺丽叶片茶的品质。在连续生产过程中茎尖可以在不含激素的3%ms固体培养基中正常生长,这样可以节约成本。第二预设周期为诺丽试管苗生长到有7对以上的叶片的时间。可以为30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45天但不限于上述列举,例如,可以根据环境条件适当的提高或降低,优选的可以为20~50天、25~45天、40~55天、30~50天,更优选的为35~40天、33~42天。在一可选实施例中,培养室培养条件为:温度为26~30℃。光源为光照强度2500~3500lux的全光谱冷光。光照时间为每天12~18小时。其中温度为适宜诺丽生长的温度,可以为26℃、27℃、28℃、29℃、30℃但不限于上述列举。例如,可以根据环境条件适当的提高或降低,例如可以为24~32℃,或者为27~29℃。其中光照强度可以为2500lux、2600lux、2700lux、2800lux、2900lux、3000lux、3100lux、3200lux、3300lux、3400lux、3500lux但不限于上述列举。例如,可以根据环境条件适当的提高或降低,例如可以为2400~3200lux,或者为2700~2900lux。其中光照时间可以为每天12、13、14、15、16、17、18小时但不限于上述列举。例如,可以根据环境条件适当的提高或降低,例如可以为每天8~20小时、10~15小时,优选的为每天15~17小时。光照时间可以与当地昼夜周期相同或交叉或不同,还可以使用自然光进行补光来减少成本。在这样的的培养条件下得到的诺丽叶片茶中含有的主要成分与自然栽培的基本一致。在自然条件下有季节的变化而导致诺丽叶片茶品质差异,本实施方法是在人工控制环境条件下生产诺丽叶片茶,能够使得到的诺丽叶片茶品质均一。在一种实施方法中培养架可以设置为每层高40cm,层板采用高强度隔热衍射光材料构成,避免组培过程中,培养皿内部水汽的出现,暗式布线,每层配有带有独立开关的专用led组培灯,自动定时,每层独立开关。自动化生产能够节约人力资源,降低成本。对培养架层高的限制能够提高空间利用率。在一可选实施例中,步骤s2可以使用现有的各种茶叶的加工方法,通过红茶加工方法加工成诺丽红茶,乌龙茶加工方法加工成诺丽乌龙茶,黑茶加工方法加工成诺丽黑茶,甚至可以分别用茉莉花、桂花等窨制加工成花香味的诺丽茶。例如按照绿茶加工方法为:对摘取的每一代试管苗叶片去掉叶柄后摊凉2~4小时,再进行180~220℃的手工杀青,降温使叶片冷却至15~20℃后揉捻,再在160~180℃炒干即得到试管苗诺丽叶片茶。发明人惊喜的发明利用本发明生产的诺丽叶片茶喝起来没有酸味,而一般生产的诺丽叶片茶因为含有包括草酸、酒石酸、苹果酸、抗坏血酸和柠檬酸在内的有机酸而有严重的酸味,其中苹果酸含量最高。用高效液相色谱法测定诺丽田间苗成熟叶片中苹果酸平均含量为2.36mg/g,而试管苗叶片中苹果酸平均含量仅为0.22mg/g。酸味的降低使诺丽试管苗叶片茶口感更好,更利于品饮。实施例1培养室的培养条件为:温度为26℃;光源为光照强度2000lux的全光谱冷光;光照时间为每天12小时。培养基配制:无糖ms固体培养基;配制包括0.1mg/lnaa的3%ms固体培养基,将其ph值调至5.6,作为扩繁培养基,培养基灭菌后置于超净工作台备用。s1:将诺丽种子剥去种壳并进行消毒,然后接种于无糖ms固体培养基,每瓶培养基接种3粒所述诺丽种子,培养30天后得到第一代试管苗。扩繁步骤:将所述第一代试管苗置于超净工作台,摘取所述第一代试管苗叶片,并对其茎分割成多个茎段,使每个分割后的茎段包含一个芽点。将所述包含一个芽点的茎段接种于所述扩繁培养基,每瓶扩繁培养基接种3个所述茎段,置于培养室培养30天,得到第二代试管苗。对所述第二代试管苗重复扩繁步骤进行培养,得到下一代试管苗和摘取的每一代试管苗叶片。s2:对摘取的每一代所述试管苗叶片去掉叶柄后摊凉2小时,再进行180℃的手工杀青,降温使叶片冷却至15℃后揉捻,再在160℃炒干即得到试管苗诺丽叶片茶。本实施例一边用试管苗的含芽茎段扩繁,一边用扩繁过程中剪下的试管苗叶片进行诺丽叶片茶生产,可以不断的得到诺丽叶片茶,还可以不断的扩大生产规模。实施例2培养室的培养条件为:温度为28℃;光源为光照强度2500lux的全光谱冷光;光照时间为每天16小时。培养基配制:无糖ms固体培养基;配制包括0.2mg/lnaa的3%ms固体培养基,将其ph值调至5.85,作为扩繁培养基;配置3%ms固体培养基,将其ph值调至5.83,作为生产培养基。将培养基灭菌后置于超净工作台备用。试管苗的数量预设值为10500株,共3500瓶。s1:将诺丽种子剥去种壳并进行消毒,然后接种于无糖ms固体培养基,每瓶培养基接种3粒所述诺丽种子,培养35天后得到第一代试管苗。扩繁步骤:将所述第一代试管苗置于超净工作台,摘取所述第一代试管苗叶片,并对其茎分割成多个茎段,使每个分割后的茎段包含一个芽点。将所述包含一个芽点的茎段接种于所述扩繁培养基,每瓶扩繁培养基接种3个所述茎段,置于培养室培养35天,得到第二代试管苗。对所述第二代试管苗重复扩繁步骤进行培养,得到下一代试管苗和摘取的每一代试管苗叶片。生产步骤:分别统计各代试管苗的数量,在一代所述试管苗的数量达到预设值时,将该代试管苗置于超净工作台,摘取所述该代试管苗叶片,剪切茎尖,将所述茎尖接种于所述生产培养基,每瓶生产培养基接种3个所述茎尖,置于培养室培养35天,得到第一代生产试管苗,摘取所述第一代生产试管苗的叶片。使用所述第一代生产试管苗重复生产步骤,得到多代生产试管苗,每人每天处理100瓶,连续处理35天。s2:对摘取的每一代所述试管苗叶片去掉叶柄后摊凉3小时,再在200℃下进行杀青,降温使叶片冷却至18℃后揉捻,再在170℃炒干即得到试管苗诺丽叶片茶。生产步骤经过35天,每人得到诺丽叶片茶3.087kg。实施例3培养室的培养条件为:温度为30℃;光源为光照强度3000lux的全光谱冷光;光照时间为每天18小时。培养基配制:无糖ms固体培养基;配制包括0.3mg/lnaa的3%ms固体培养基,将其ph值调至5.9,作为扩繁培养基;配置3%ms固体培养基,将其ph值调至5.85,作为生产培养基。将培养基灭菌后置于超净工作台备用。试管苗的数量预设值为1350株,共450瓶。s1:将诺丽种子剥去种壳并进行消毒,然后接种于无糖ms固体培养基,每瓶培养基接种3粒所述诺丽种子,培养45天后得到第一代试管苗。扩繁步骤:将所述第一代试管苗置于超净工作台,摘取所述第一代试管苗叶片,并对其茎分割成多个茎段,使每个分割后的茎段包含一个芽点。将所述包含一个芽点的茎段接种于所述扩繁培养基,每瓶扩繁培养基接种3个所述茎段,置于培养室培养45天,得到第二代试管苗。对所述第二代试管苗重复扩繁步骤进行培养,得到下一代试管苗和摘取的每一代试管苗叶片。生产步骤:分别统计各代试管苗的数量,在一代所述试管苗的数量达到预设值时,将该代试管苗置于超净工作台,摘取所述该代试管苗叶片,剪切茎尖,将所述茎尖接种于所述生产培养基,每瓶生产培养基接种3个所述茎尖,置于培养室培养45天,得到第一代生产试管苗,摘取所述第一代生产试管苗的叶片。使用所述第一代生产试管苗重复生产步骤,得到多代生产试管苗,每人每天处理10瓶,连续处理45天。s2:对摘取的每一代所述试管苗叶片去掉叶柄后摊凉4小时,再用220℃进行杀青,降温使叶片冷却至20℃后揉捻,再在180℃炒干即得到试管苗诺丽叶片茶。生产步骤经过45天每人得到诺丽叶片茶0.397kg。诺丽叶片中茶主要功能成分及金属离子含量对比为了更好地了解诺丽田间苗成熟叶片和诺丽试管苗叶片中作为后续茶饮关注的还原糖、总黄酮、总黄酮甙及金属离子等的含量,分别进行了还原糖测定(直接滴定法)、总黄酮含量的测定(芦丁标准曲线法)、总黄酮甙含量的测定(三氯化铝比色法)及金属离子测定(原子吸收法)。使用的样本为本发明实施例2得到的诺丽叶片茶和西南林业大学位于云南元江的诺丽试验田生产的诺丽叶片茶。还原糖是指具有还原性的糖类,包括葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖、麦芽糖等,不仅是重要的营养成分之一,还能改善果实的风味,增加甜度。总黄酮是指黄酮类化合物,是一大类天然产物,广泛存在于植物界,是许多中草药、保健类植物的有效成分,最常见的是黄酮和黄酮醇。近年来国内外对总黄酮的药理和营养性的广泛深入的研究和临床试验,证实类总黄酮既是药理因子,又是重要的营养因子,对人体具有重要的生理保健功效。目前,很多著名的抗氧化剂和自由基清除剂都是类黄酮。对健康的好处有:抗炎症、抗过敏、抑制细菌、抑制寄生虫、抑制病毒、防治肝病、防治血管疾病、防治血管栓塞、防治心与脑血管疾病、抗肿瘤、抗化学毒物等。天然来源的生物黄酮分子量小,能被人体迅速吸收,能通过血脑屏障,能时入脂肪组织,进而体现出如下功能:帮助人体防御辐射、消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、活化大脑及其他脏器细胞的功能、抗脂肪氧化、抗衰老。甙,又称配糖体或苷类,是由糖或糖的衍生物(如糖醛酸)的半缩醛羟基与另一非糖物质中的羟基以缩醛键(甙键)脱水缩合而成的环状缩醛衍生物。水解后能生成糖与非糖化合物,非糖部分称为甙元,通常有酚类、蒽醌类、黄酮类等化合物。诺丽叶片茶中主要功能成分含量如表1所示,诺丽叶片茶中金属离子含量如表2所示。结果表明,诺丽试管苗叶片还原糖含量显著高于田间苗成熟叶片,而总黄酮和总黄酮甙含量在二者中无显著差异,证明了通过试管苗得到的诺丽叶片茶与田间种植的诺丽叶片茶在功效上没有明显差异,甚至含有更多的还原糖,能够起到更好地保健效果。从表2可以看出诺丽试管苗叶片中的钠显著低于诺丽田间苗成熟叶片含量,表明诺丽试管苗叶片茶更有利于健康。在重金属检测中发现,诺丽田间苗成熟叶片含有一定量的铅、镉、汞、砷。国家强制性标准gb2762-2005《食品中污染物限量》对茶叶中铅含量提出了限量要求,不得超过5mg/kg;农业部强制性标准ny659-2003《茶叶中铬、镉、汞、砷及氟化物限量》中规定铬不得超过5mg/kg、镉不得超过lmg/kg、砷不得超过2mg/kg、汞不得超过0.3mg/kg。虽然本检测的田间诺丽的重金属都在国标允许范围内,但随着土壤状况、地区差异及年份积累,诺丽叶中检出重金属有较大可能。而通过试管苗生产的诺丽叶片茶完全不存在重金属污染的可能,即使各国标准规范对重金属要求日趋严格,本实施方法得到的诺丽叶片茶也能够符合要求。表1诺丽叶片中主要功能成分含量成分诺丽试验田的诺丽叶片茶实施例2的诺丽叶片茶还原糖(%)2.03±0.34a2.91±0.85b总黄酮(mg/g)29.86±1.10a29.55±0.92a总黄酮甙(mg/g)25.37±0.86a26.72±0.33a注:表中数据为平均值±标准差,同一行不同字母表示差异显著(p<0.05)。表2诺丽叶片中金属离子含量成分(mg/kg)诺丽试验田的诺丽叶片茶实施例2的诺丽叶片茶钠2979.33±3.46a1674.00±6.31b钾613.82±1.53a614.49±1.32a钙3010.37±1.95a2004.61±5.20b铁372.93±1.59a366.30±2.63a锌117.76±0.35a117.15±1.01a镁653.88±0.36a650.59±1.64a铅0.284±0.067未检出镉0.120±0.111未检出汞0.0086±0.0008未检出砷0.000507±0.00018未检出注:表中数据为平均值±标准差,同一行不同字母表示差异显著(p<0.05)。应当理解的是,本发明的上述具体实施方式仅仅用于示例性说明或解释本发明的原理,而不构成对本发明的限制。因此,在不偏离本发明的精神和范围的情况下所做的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。此外,本发明所附权利要求旨在涵盖落入所附权利要求范围和边界、或者这种范围和边界的等同形式内的全部变化和修改例。当前第1页12
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