本发明涉及生物发酵技术领域，尤其涉及一种用于香菇菌发酵液体种子连续制备培养基及制备方法。
背景技术：
目前，文献关于“聚氨酯泡沫塑料固定化灵芝重复分批发酵生产胞外多糖(wanabdalqadrimadwan-mohtar,roslindaabdmalek,lindam.harvey,brianmcneil.exopolysaccharideproductionbyganodermalucidumimmobilisedonpolyurethanefoaminarepeated-batchfermentation,biocatalysisandagriculturalbiotechnology8(2016)24-31)”研究了大型食用真菌-灵芝的固定化重复分批发酵生产胞外多糖。文献关于“灵芝重复分批发酵生产胞外多糖(wanabdalqadrwanmohtar,ab.latifnurzila,lindam.harvey,brianmcneil.productionofexopolysaccharidebyganodermaluciduminarepeated-batchfermentation.biocatalysisandagriculturalbiotechnology,volume6,april2016,pages91-101)”研究采用聚氨酯泡沫塑料固定化灵芝菌(聚氨酯泡沫塑料又称聚氨酯海绵)。文献关于“重复分批发酵生产胞外多糖的灵芝菌丝体的形态研究(wanabdalqadrimadwan-mohtar,safuanabkadir,nazamidsaari.themorphologyofganodermalucidummyceliuminarepeated-batchfermentationforexopolysaccharideproduction,biotechnologyreports11(2016)2-11)”研究的是固定化在聚氨酯泡沫塑料上的灵芝菌可以重复多次分批发酵生产胞外多糖，而不是培养制备生产液体菌种(菌丝体)。
虽然香菇菌和灵芝菌都是大型食用真菌，但是实际发酵培养存在很大差异，参考上述文献中的培养基配方不能直接套用或作一般领域内专业人士常识性的替换调整使用。
如果直接套用参考对比文献配方，香菇菌在聚氨酯泡沫塑料上固定后，香菇菌丝体弱，韧性差，易老化，传代次数受限，难以做到重复多次培养，不适用于香菇菌生长。同时，香菇菌在聚氨酯泡沫塑料上固定后，发酵液中游离的菌丝体生物量低，不粗壮，生长速度慢，难以作为下一级发酵的液体菌种。
技术实现要素：
本发明提供了一种用于香菇菌发酵液体种子连续制备培养基及制备方法，以解决上述技术问题。
为了达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：一种用于香菇菌发酵液体种子连续制备培养基及制备方法，所述的培养基中含有精氨酸盐或精氨酸以及大豆卵磷脂；且培养基中各组分的重量百分比(w/w)为：马铃薯20～30％，葡萄糖1.5～2.5％，精氨酸盐或精氨酸0.2-1.5％，磷酸二氢钾0.05～0.35％，硫酸镁0.05～0.20％，大豆卵磷脂0.3-1.0％，生物素0.0001～0.0005％，维生素b10.005～0.02％，水补足至100％。
一种用于香菇菌发酵液体种子连续制备培养基的制备方法，包括培养基的配制方法和为菌种连续制备方法；所述培养基的配制方法包括如下步骤：
1、先将马铃薯去皮洗净后，按配方量称取马铃薯，切成片状；
2、加配方量纯化水，加热煮沸后，用纱布过滤，留取滤液；
3、加入配方量的葡萄糖、精氨酸盐或精氨酸、磷酸二氢钾、硫酸镁、大豆卵磷脂、维生素b1和聚氨酯海绵，加纯化水补足至配方总量；
4、分装于装有琼脂的试管中，塞好棉塞，包扎纱布，外用牛皮纸包好，放入灭菌锅中，0.1mpa灭菌15分钟后取出，冷却备用；
所述菌种连续制备方法步骤如下：
a、培养基接种后，于25℃±1℃进行培养，摇床转速120rpm；
b、培养至第14天，分出培养瓶中的发酵液作为下级发酵的液体菌种，等量更换新鲜培养基；
c、每7天可分出培养瓶中的发酵液连续制备液体菌种,共可连续制备5次。3.根据权利要求2所述的一种用于香菇菌发酵液体种子连续制备培养基制备方法,其特征在于：所述培养基中使用的聚氨酯海绵作为固定化载体，每个1000ml容量的培养瓶，培养基装量400ml,装入0.5cm-1.0cm边长的正方体聚氨酯海绵小块30块。
与现有技术相比，本发明的优点在于：
本发明配方中添加了精氨酸盐或精氨酸，促进香菇菌丝体的生长，而且配方中选择性添加了大豆卵磷脂(大豆卵磷脂--天然产物，具有表活作用)，增加对固定化菌丝体的供氧(一些常用的表活剂，如吐温、司盘等在香菇菌液体发酵培养时，培养物产生不正常的异味)，同时，缩短发酵培养时间。而且固定化的香菇菌丝体生长健壮，韧性强；液体中菌丝体生物量高；固定化的香菇菌丝体生长存活时间长，可以连续制备液体菌种5批次；也缩短了制种周期，减少了接种污染风险，操作简洁方便。
附图说明
无
具体实施方式
以下将结合对本发明实施例的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施例，都属于本发明所保护的范围。
本发明涉及一种用于香菇菌发酵液体种子连续制备培养基及制备方法，所述的培养基中含有精氨酸盐或精氨酸以及大豆卵磷脂；且培养基中各组分的重量百分比(w/w)为：马铃薯20～30％，葡萄糖1.5～2.5％，精氨酸盐或精氨酸0.2-1.5％，磷酸二氢钾0.05～0.35％，硫酸镁0.05～0.20％，大豆卵磷脂0.3-1.0％，生物素0.0001～0.0005％，维生素b10.005～0.02％，水补足至100％。
一种用于香菇菌发酵液体种子连续制备培养基的制备方法，包括培养基的配制方法和为菌种连续制备方法；所述培养基的配制方法包括如下步骤：
1、先将马铃薯去皮洗净后，按配方量称取马铃薯，切成片状；
2、加配方量纯化水，加热煮沸后，用纱布过滤，留取滤液；
3、加入配方量的葡萄糖、精氨酸盐或精氨酸、磷酸二氢钾、硫酸镁、大豆卵磷脂、维生素b1和聚氨酯海绵，加纯化水补足至配方总量；
4、分装于装有琼脂的试管中，塞好棉塞，包扎纱布，外用牛皮纸包好，放入灭菌锅中，0.1mpa灭菌15分钟后取出，冷却备用；
所述的菌种连续制备方法步骤如下：
a、培养基接种后，于25℃±1℃进行培养，摇床转速120rpm；
b、培养至第14天，分出培养瓶中的发酵液作为下级发酵的液体菌种，等量更换新鲜培养基；
c、每7天可分出培养瓶中的发酵液连续制备液体菌种,共可连续制备5次。本发明具体实施例如下：
下面对本发明的技术方案结合实施例作进一步说明。
〈实施例1〉
一种用于香菇菌发酵液体种子连续制备培养基及制备方法，所述的培养基中含有精氨酸盐或精氨酸以及大豆卵磷脂；培养基中各组分的重量百分比(w/w)为：马铃薯30％，葡萄糖1.5％，精氨酸盐或精氨酸0.2％，磷酸二氢钾0.05％，硫酸镁0.05％，大豆卵磷脂0.3％，生物素0.0001％，维生素b10.005％，水补足至100％。
一种用于香菇菌发酵液体种子连续制备培养基的制备方法，包括培养基的配制方法和为菌种连续制备方法；所述培养基的配制方法包括如下步骤：
1、先将马铃薯去皮洗净后，按配方量称取马铃薯，切成片状；
2、加配方量纯化水，加热煮沸后，用纱布过滤，留取滤液；
3、加入配方量的葡萄糖、精氨酸盐或精氨酸、磷酸二氢钾、硫酸镁、大豆卵磷脂、维生素b1和聚氨酯海绵，加纯化水补足至配方总量；
4、分装于装有琼脂的试管中，塞好棉塞，包扎纱布，外用牛皮纸包好，放入灭菌锅中，0.1mpa灭菌15分钟后取出，冷却备用；
所述菌种连续制备方法步骤如下：
a、培养基接种后，于25℃±1℃进行培养，摇床转速120rpm；
b、培养至第14天，分出培养瓶中的发酵液作为下级发酵的液体菌种，等量更换新鲜培养基；
c、每7天可分出培养瓶中的发酵液连续制备液体菌种,共可连续制备5次。
〈实施例2〉
一种用于香菇菌发酵液体种子连续制备培养基及制备方法，所述的培养基中含有精氨酸盐或精氨酸以及大豆卵磷脂；培养基中各组分的重量百分比(w/w)为：马铃薯25％，葡萄糖2.0％，精氨酸盐或精氨酸0.5％，磷酸二氢钾0.15％，硫酸镁0.10％，大豆卵磷脂0.5％，生物素0.0002％，维生素b10.01％，水补足至100％。
一种用于香菇菌发酵液体种子连续制备培养基的制备方法，包括培养基的配制方法和为菌种连续制备方法；所述培养基的配制方法包括如下步骤：
1、先将马铃薯去皮洗净后，按配方量称取马铃薯，切成片状；
2、加配方量纯化水，加热煮沸后，用纱布过滤，留取滤液；
3、加入配方量的葡萄糖、精氨酸盐或精氨酸、磷酸二氢钾、硫酸镁、大豆卵磷脂、维生素b1和聚氨酯海绵，加纯化水补足至配方总量；
4、分装于装有琼脂的试管中，塞好棉塞，包扎纱布，外用牛皮纸包好，放入灭菌锅中，0.1mpa灭菌15分钟后取出，冷却备用；
所述菌种连续制备方法步骤如下：
a、培养基接种后，于25℃±1℃进行培养，摇床转速120rpm；
b、培养至第14天，分出培养瓶中的发酵液作为下级发酵的液体菌种，等量更换新鲜培养基；
c、每7天可分出培养瓶中的发酵液连续制备液体菌种,共可连续制备5次。
〈实施例3〉
一种用于香菇菌发酵液体种子连续制备培养基及制备方法，所述的培养基中含有精氨酸盐或精氨酸以及大豆卵磷脂；培养基中各组分的重量百分比(w/w)为：马铃薯25％，葡萄糖2.0％，精氨酸盐或精氨酸1.0％，磷酸二氢钾0.25％，硫酸镁0.15％，大豆卵磷脂0.6％，生物素0.0003％，维生素b10.015％，水补足至100％。
一种用于香菇菌发酵液体种子连续制备培养基的制备方法，包括培养基的配制方法和为菌种连续制备方法；所述培养基的配制方法包括如下步骤：
1、先将马铃薯去皮洗净后，按配方量称取马铃薯，切成片状；
2、加配方量纯化水，加热煮沸后，用纱布过滤，留取滤液；
3、加入配方量的葡萄糖、精氨酸盐或精氨酸、磷酸二氢钾、硫酸镁、大豆卵磷脂、维生素b1和聚氨酯海绵，加纯化水补足至配方总量；
4、分装于装有琼脂的试管中，塞好棉塞，包扎纱布，外用牛皮纸包好，放入灭菌锅中，0.1mpa灭菌15分钟后取出，冷却备用；
所述菌种连续制备方法步骤如下：
a、培养基接种后，于25℃±1℃进行培养，摇床转速120rpm；
b、培养至第14天，分出培养瓶中的发酵液作为下级发酵的液体菌种，等量更换新鲜培养基；
c、每7天可分出培养瓶中的发酵液连续制备液体菌种,共可连续制备5次。
〈实施例4〉
一种用于香菇菌发酵液体种子连续制备培养基及制备方法，所述的培养基中含有精氨酸盐或精氨酸以及大豆卵磷脂；培养基中各组分的重量百分比(w/w)为：马铃薯20％，葡萄糖2.5％，精氨酸盐或精氨酸1.5％，磷酸二氢钾0.35％，硫酸镁0.15％，大豆卵磷脂1.0％，生物素0.0005％，维生素b10.02％，水补足至100％。
一种用于香菇菌发酵液体种子连续制备培养基的制备方法，包括培养基的配制方法和为菌种连续制备方法；所述培养基的配制方法包括如下步骤：
1、先将马铃薯去皮洗净后，按配方量称取马铃薯，切成片状；
2、加配方量纯化水，加热煮沸后，用纱布过滤，留取滤液；
3、加入配方量的葡萄糖、精氨酸盐或精氨酸、磷酸二氢钾、硫酸镁、大豆卵磷脂、维生素b1和聚氨酯海绵，加纯化水补足至配方总量；
4、分装于装有琼脂的试管中，塞好棉塞，包扎纱布，外用牛皮纸包好，放入灭菌锅中，0.1mpa灭菌15分钟后取出，冷却备用；
所述菌种连续制备方法步骤如下：
a、培养基接种后，于25℃±1℃进行培养，摇床转速120rpm；
b、培养至第14天，分出培养瓶中的发酵液作为下级发酵的液体菌种，等量更换新鲜培养基；
c、每7天可分出培养瓶中的发酵液连续制备液体菌种,共可连续制备5次。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述揭示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。