中，在步骤2)和步骤3)之间，还包括如下分子鉴定A的步骤：从所述雄 性不育代群体中选取与所述玉米京724遗传相似度在92. 5-95 %的雄性不育BC :代单 株。
[0040] 上述方法中，所述从所述雄性不育代群体中选取与所述玉米京724遗传相似 度在92. 5-95%的雄性不育代单株的方法包括如下步骤：用40对SSR核心引物分别对 雄性不育单株和玉米自交系京724进行PCR扩增，得到SSR谱带，通过比较BC :代单 株和玉米自交系京724的SSR图谱，计算遗传相似度；
[0041] 所述遗传相似度计算公式：[1-差异等位基因数A2X比较总位点数）]X 100%
[0042] 所述差异等位基因数为用SSR核心引物扩增得到的所述雄性不育％代单株SSR 谱带带型与所述玉米自交系京724的SSR谱带带型不一致的等位基因数目；所述比较总位 点数为40。
[0043] 上述40对SSR核心引物中各个引物的序列分别为序列表中序列1-80所示，具体 见实施例的表1。
[0044] 上述方法中，为了减少工作量，在所述分子鉴定A前还包括如下步骤：从所述雄性 不育代群体中选取表型与所述玉米京724 -致的雄性不育BC :代单株。
[0045] 上述方法中，在步骤3)和步骤4)之间，还具体包括如下分子鉴定B的步骤：从所 述雄性不育BC2代群体中选取与所述玉米京724遗传相似度在98. 75% -100%的雄性不育 BC2R单株。
[0046] 所述从所述雄性不育BC2代群体中选取与所述玉米自交系京724遗传相似度在 98. 75% -100%的雄性不育BC2代单株的方法包括如下步骤：用引物A分别对雄性不育BC ^ 代单株和玉米自交系京724进行PCR扩增，得到SSR谱带，通过比较BC2代单株和玉米自交 系京724的SSR图谱，计算遗传相似度；
[0047] 所述引物A为BC2代单株对应的母本BC i代与京724相比扩增带型不同的SSR引 物；
[0048] 所述遗传相似度计算公式：[1-差异等位基因数A2X比较总位点数）]X 100%
[0049] 所述差异等位基因数为用引物A扩增得到的所述雄性不育BC2代单株SSR谱带带 型与所述玉米自交系京724的SSR谱带带型不一致的等位基因数目；
[0050] 所述比较总位点数为40。
[0051] 上述方法中，在所述分子鉴定B前还具体包括如下步骤：从所述雄性不育BC2代群 体中选取表型与所述玉米京724-致的雄性不育BC2R单株。
[0052] 上述表型与所述玉米京724 -致为表型与玉米京724完全相同或接近；表型具体 为株高、穗位高、株型、雄穗分枝数和/或果穗性状等。
[0053] 本发明的另一个目的是提供培育不育系S京MC01的方法。
[0054] 本发明提供的方法，包括如下步骤：
[0055] a)玉米不育系S京724做母本，京MC01做父本杂交，得到雄性不育杂交子代F1;
[0056] b)以所述雄性不育杂交子代匕为母本与京MC01回交，得到雄性不育BCjf群体；
[0057] c)以所述雄性不育代单株为母本与京MC01继续回交，得到雄性不育BC2代群 体；
[0058] d)以所述雄性不育BC2代单株为母本与京MC01继续回交，得到京MC01的雄性不 育系；
[0059] 在步骤b)和c)之间，还包括代分子鉴定的步骤，所述BCi代分子鉴定为用上 述 SSR 核心引物 umc2105k3、phi053k2、bnlg2291k4、bnlg2305k4、umcl545y2、umcll25y3、 bnlg240kl、umc2160k3、umcl936k4、umcl231k4 和 phi041y6 分别对所述雄性不育 代群 体单株进行PCR扩增，选择与京MC01遗传相似度在96-97. 5%的单株；
[0060] 在步骤C)和d)之间，还包括BC2代分子鉴定的步骤，所述BC 2代分子鉴定为用引 物A对所述雄性不育BC2R群体单株进行PCR扩增，选择扩增图谱与用同样引物A对所述 京MC01进行PCR扩增得到的图谱相同的雄性不育此 2代单株；
[0061] 所述引物A为BC2代单株对应的母本BC i代与京MC01相比扩增带型不同的SSR引 物；
[0062] 在步骤b)和c)之间的代分子鉴定前还具体包括代表型鉴定的步骤，所述 BQ代表型鉴定为选取所述雄性不育BC i代群体中表型与京MC01 -致的BC :代单株；
[0063] 在步骤c)和d)之间的BC2代分子鉴定前还具体包括BC2代表型鉴定的步骤，所述 BC 2代表型鉴定为选取所述雄性不育BC 2代群体中表型与京MC01 -致的BC 2代单株。
[0064] 上述玉米不育系S京MC01在杂交制种中的应用也是本发明保护的范围。
[0065] 本发明的实验证明，本发明具体有如下优势：
[0066] 1、由于昌7-2等黄改材料是S型细胞质雄性不育系的强恢复系，京农科728父本 京2416为黄改种质，因此选择京2416具有强恢复性的S型不育系作为母本京MC01不育系 转育的供体，节省了选育父本恢复系的繁琐工作；
[0067] 2、选用已获得的与母本京MC01系谱来源相同的不育系S京724为供体，结合分子 标记辅助选择技术实现快速转育，仅回交三代即可获得玉米不育系S京MC01，具有配合力 高、脱水速度快、抗倒性好、耐密植等优点；
[0068] 3、选用的S型不育系MD32不育性稳定、花粉败育彻底，在已报道的玉米杂交种雄 性不育化制种研宄中未见使用；
[0069]总之，本发明利用育成的不育系S京MC01、保持系京MC01和恢复系京2416进行京 农科728三系配套杂交种制种，配制的不育化杂交种京农科728种子在产量、抗性及其他农 艺性状上与常规制种方法生产的京农科728种子基本相同，且节省了常规制种中母本人工 去雄的时间和成本，消除了由于去雄不及时、影响种子质量的潜在风险。
【具体实施方式】
[0070] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0071] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0072] 实施例1、雄性不育系S京724的选育
[0073] -、不育系供体MD32细胞质雄性不育类型的确定
[0074] 1、玉米不育系MD32
[0075] 玉米不育系MD32选育过程：利用构建的X系群体（以X1132为基础）进行"高大 严"选系，从中选择优良S5高代系与外引杂交种构建新的选系基础群体。在自交后代中发 现不育株，雄穗花药不外露，选择同穗行表型相近的姊妹株对其进行成对授粉。杂交后代全 部表现彻底不育，植株表型也趋向基本一致。遂将该材料命名为玉米雄性不育系MD32。
[0076] 玉米不育系MD32不育性彻底：花药不外露；
[0077] 玉米不育系MD32不育性稳定：在多种遗传背景下，不育性表现彻底；
[0078] 玉米不育系MD32综合性状优良：种子芽势旺盛，出苗力强，幼苗叶鞘色紫色，叶片 宽大，叶色浓绿，株型半紧凑，果穗筒型，粒型半硬粒型，综合抗性好。
[0079] 玉米不育系MD32于2013年12月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普 通微生物中心（简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物 研宄所，邮编100101)，保藏号为CGMCC No.8657,该植株分类命名为玉米（Zea mays)。
[0080] 2、不育系MD32细胞质雄性不育类型的确定
[0081] 提取玉米不育系MD32幼苗的DNA作为模板，用如下表1的引物进行PCR扩增，得 到扩增产物在Agarose凝胶上，90V电泳1小时30分钟。根据扩增片段图谱鉴别玉米MD32 胞质不育类型。
[0082] 结果，利用C、T型引物对MD32的DNA进行PCR扩增时，均未检测到扩增产物；利 用S型引物对其进行检测时，PCR产物片段大小为885bp。因此确定MD32为S型细胞质雄 性不育系。
[0083] 表1为鉴定胞质类型的引物
【主权项】
1. 一种杂交制种的