一种铁皮石斛组织培养液的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及植物培养领域，尤其涉及一种铁皮石斛组织培养液。
【背景技术】
[0002] 铁皮石斛，为兰科多年生附生草本植物。生于海拔达1600米的山地半阴湿的岩石 上，喜温暖湿润气候和半阴半阳的环境，不耐寒。一般均能耐-5°C的低温。石斛可分为黄 草、金钗、马鞭等数十种，铁皮石斛为石斛之极品，它因表皮呈铁绿色而得名。铁皮石斛具有 独特的药用价值，以其茎入药，中药名：石斛，属补益药中的补阴药，《中国药典》：益胃生津， 滋阴清热。由于过度采挖和自然环境的破坏，1978年呗国家列为重点保护的濒危中药材。 目前，在铁皮石斛人工培养的过程中，虽已经获得成功，但周期长，成活率低，出苗率低，导 致产量和规模上不去，难以满足社会应用的需要。
【发明内容】
[0003] 基于【背景技术】存在的技术问题，本发明提出了一种铁皮石斛组织培养液，配伍合 理，不仅为铁皮石斛提供全面的营养物质，而且能使铁皮石斛快速促根生茎，还可提高铁皮 石斛中多糖含量。
[0004] 本发明提出的一种铁皮石斛组织培养液，其原料按体积百分比包括：〇. 4-0. 6%第 一母液、0. 4-0. 7%第二母液、0. 4-0. 6%第三母液和98-99%第四母液；第一母液的组分包 括：碘化钾0. 1-0. 2g/L，硫酸锰2-3g/L，硫酸锌l-2g/L，硼酸l-2g/L，钼酸钠0. 05-0. 15g/ L，硫酸铜0? 008-0. 012g/L，氯化钴0? 01-0. 03g/L;第二母液的组分包括：硫酸亚铁 0. 008-0. 012mol/L，乙二胺四乙酸二钠0. 01-0. 05mol/L;第三母液的原料按重量份包括： 肌醇4-8XIO3份，烟酸12-17份，盐酸吡唆醇25-35份，盐酸硫胺素3-9份，甘氨酸55-65 份，蒸馏水I.5-2. 5XIO5份；第四母液的组分包括：香蕉泥70-72g/L，硝酸铵0. 7-lg/L，硝 酸钾 0? 8-1. 2g/L，氯化钙 0? 2-0. 3g/L，硫酸镁 0? 15-0. 2g/L，磷酸二氢钙 0? 05-0. 13g/L，白 糖 39-42g/L，琼脂 3. 8-4. 3g/L。
[0005] 优选地，第一母液、第二母液、第三母液和第四母液均为水溶液。
[0006] 优选地，第一母液、第二母液、第三母液和第四母液的体积比为0. 42-0. 5 : 0? 42-0. 63 :0? 41-0. 49 :98-99。
[0007] 优选地，第一母液的组分包括：碘化钾0. 13-0. 17g/L，硫酸锰2. 3-2. 5g/L，硫酸 锌L3-1. 6g/L，硼酸L6-1. 9g/L，钼酸钠 0? 08-0. 12g/L，硫酸铜 0? 009-0. 011g/L，氯化钴 0.015-0. 025g/L〇
[0008] 优选地，第二母液中，硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的摩尔浓度比为0.9-1. 1 : 2_4〇
[0009] 优选地，第三母液中，烟酸、盐酸吡哆醇、盐酸硫胺素和甘氨酸的重量比为14-16 : 27-33 :5-7 :58-62。
[0010] 优选地，第四母液的组分包括：香蕉泥70. 5-71. 5g/L，硝酸铵0. 8-0. 9g/L，硝酸 钾 0. 9-lg/L，氯化钙 0. 21-0. 24g/L，硫酸镁 0. 17-0. 2g/L，磷酸二氢钙 0. 08-0.llg/L，白糖 40-41g/L，琼脂 4-4. 2g/L。
[0011] 本发明配伍合理，使氮磷钾等常量元素和微量元素的处于合理的比例之中，能够 为铁皮石斛提供全面的营养物质，而有机物质和无机盐相互配合，能使铁皮石斛快速促根 生茎，香蕉泥和白糖相互配合，大大提高本发明中的糖分含量，提高了铁皮石斛的能量供 给，能够提高铁皮石斛中多糖含量，而且加入烟酸等维生素和甘氨酸，能够提高铁皮石斛中 氨基酸等含量，提高铁皮石斛的生根率和生长速度，显著提高铁皮石斛的存活率。
【具体实施方式】
[0012] 下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。
[0013] 实施例1
[0014] 本发明提出的一种铁皮石斛组织培养液，其原料按体积百分比包括：0. 4%第一母 液、0. 7%第二母液、0. 4%第三母液和98. 5%第四母液，第一母液、第二母液、第三母液和 第四母液均为水溶液；第一母液的组分包括：碘化钾〇.lg/L，硫酸锰3g/L，硫酸锌lg/L，硼 酸2g/L，钼酸钠0. 05g/L，硫酸铜0. 012g/L，氯化钴0. 01g/L;第二母液的组分包括：硫酸亚 铁0? 012mol/L，乙二胺四乙酸二钠0?Olmol/L;第三母液的原料按重量份包括：肌醇8XIO3 份，烟酸12份，盐酸吡哆醇35份，盐酸硫胺素3份，甘氨酸65份，蒸馏水1.5X105份；第四母 液的组分包括：香蕉泥72g/L，硝酸铵0. 7g/L，硝酸钾I. 2g/L，氯化钙0. 2g/L，硫酸镁0. 2g/ L，磷酸二氢钙0? 05g/L，白糖42g/L，琼脂3. 8g/L。
[0015] 实施例2
[0016] 本发明提出的一种铁皮石斛组织培养液，其原料按体积百分比包括：0. 6%第一母 液、0. 4%第二母液、0. 6%第三母液和98. 4%第四母液，第一母液、第二母液、第三母液和 第四母液均为水溶液；第一母液的组分包括：碘化钾〇. 2g/L，硫酸锰2g/L，硫酸锌2g/L，硼 酸lg/L，钼酸钠0. 15g/L，硫酸铜0. 008g/L，氯化钴0. 03g/L;第二母液的组分包括：硫酸亚 铁0? 008mol/L，乙二胺四乙酸二钠0? 05mol/L;第三母液的原料按重量份包括：肌醇4XIO3 份，烟酸17份，盐酸吡哆醇25份，盐酸硫胺素9份，甘氨酸55份，蒸馏水2. 5X105份；第四母 液的组分包括：香蕉泥70g/L，硝酸铵lg/L，硝酸钾0. 8g/L，氯化钙0. 3g/L，硫酸镁0. 15g/ L，磷酸二氢钙0? 13g/L，白糖39g/L，琼脂4. 3g/L。
[0017] 实施例3
[0018] 本发明提出的一种铁皮石斛组织培养液，其原料按体积百分比包括：0.42%第一 母液、0. 63%第二母液、0. 41 %第三母液和98. 54%第四母液，第一母液、第二母液、第三母 液和第四母液均为水溶液；第一母液的组分包括：碘化钾〇. 13g/L，硫酸锰2. 5g/L，硫酸锌 I. 3g/L，硼酸I. 9g/L，钼酸钠0. 08g/L，硫酸铜0. 011g/L，氯化钴0. 015g/L;第二母液的组 分包括：硫酸亚铁〇?Ollmol/L，乙二胺四乙酸二钠0? 02mol/L;第三母液的原料按重量份包 括：肌醇7XIO3份，烟酸14份，盐酸吡哆醇33份，盐酸硫胺素5份，甘氨酸62份，蒸馏水 1.8\10 5份；第四母液的组分包括：香蕉泥71.58/1，硝酸铵0.88/1，硝酸钾1 8/1，氯化钙 0? 21g/L，硫酸镁 0? 2g/L，磷酸二氢钙 0? 08g/L，白糖 41g/L，琼脂 4g/L。
[0019] 实施例4
[0020] 本发明提出的一种铁皮石斛组织培养液，其原料按体积百分比包括：〇. 5%第一 母液、0. 42%第二母液、0. 49%第三母液和98. 59%第四母液，第一母液、第二母液、第三母 液和第四母液均为水溶液；第一母液的组分包括：碘化钾〇. 17g/L，硫酸锰2. 3g/L，硫酸锌 1. 6g/L，硼酸I. 6g/L，钼酸钠0. 12g/L，硫酸铜0. 009g/L，氯化钴0. 025g/L;第二母液的组 分包括：硫酸亚铁0. 009mol/L，乙二胺四乙酸二钠0. 04mol/L;第三母液的原料按重量份包 括：肌醇5XIO3份，烟酸16份，盐酸吡唆醇27份，盐酸硫胺素7份，甘氨酸58份，蒸馏水 2. 2XIO5份；第四母液的组分包括：香蕉泥70. 5g/L，硝酸铵0. 9g/L，硝酸钾0. 9g/L，氯化钙 0? 24g/L，硫酸镁 0? 17g/L，磷酸二氢钙 0?llg/L，白糖 40g/L，琼脂 4. 2g/L。
[0021] 实施例5
[0022] 本发明提出的一种铁皮石斛组织培养液，其原料按体积百分比包括：0. 45%第一 母液、0. 43%第二母液、0. 42%第三母液和98. 7%第四母液，第一母液、第二母液、第三母液 和第四母液均为水溶液；第一母液的组分包括：碘化钾〇. 15g/L，硫酸锰2. 39g/L，硫酸锌 I. 47g/L，硼酸I. 74g/L，钼酸钠0? 10g/L，硫酸铜0? 01g/L，氯化钴0? 02g/L;第二母液的组 分包括：硫酸亚铁〇?Olmol/L，乙二胺四乙酸二钠0? 03mol/L;第三母液的原料按重量份包 括：肌醇6XIO3份，烟酸15份，盐酸吡哆醇30份，盐酸硫胺素6份，甘氨酸60份，蒸馏水 2X105份；第四母液的组分包括：香蕉泥70. 91g/L，硝酸铵0. 82g/L，硝酸钾0. 96g/L，氯化 钙 0? 22g/L，硫酸镁 0? 19g/L，磷酸二氢钙 0? 09g/L，白糖 40. 52g/L，琼脂 4. 14g/L。
[0023] 在无菌条件下取长有2-3节茎段的长度为I. 5-2cm的有腋芽的铁皮石斛茎段作为 外植体，将外植体分别置于实验组（实施例5制得的营养液）和对照组（普通MS培养液） 中培养30天后进行比较，其中培养条件如下：温度为23-25°C，光照强度为1300-1800LUX， 光照时间为12_13h/d。实验结果如下：
[0024]
【主权项】
1. 一种铁皮石斛组织培养液，其特征在于，其原料按体积百分比包括：〇. 4-0. 6%第一 母液、0. 4-0. 7%第二母液、0. 4-0. 6%第三母液和98-99%第四母液； 第一母液的组分包括：碘化钾0. 1-0. 2g/L，硫酸锰2-3g/L，硫酸锌l-2g/L，硼酸l-2g/L，钼酸钠 0? 05-0. 15g/L，硫酸铜 0? 008-0. 012g/L，氯化钴 0? 01-0. 03g/L; 第二母液的组分包括：硫酸亚铁0. 008-0. 012mol/L，乙二胺四乙酸二钠 0.01-0. 05mol/L； 第三母液的原料按重量份包括：肌醇4-8 XIO3份，烟酸12-17份，盐酸吡哆醇25-35份， 盐酸硫胺素3-9份，甘氨酸55-65份，蒸馏水1. 5-2. 5 XIO5份； 第四母液的组分包括：香蕉泥70-72g/L，硝酸铵0. 7-lg/L，硝酸钾0. 8-1. 2g/L，氯 化钙 0? 2-0. 3g/L，硫酸镁 0? 15-0. 2g/L，磷酸二氢钙 0? 05-0. 13g/L，白糖 39-42g/L，琼脂 3. 8-4. 3g/L〇
2. 根据权利要求1所述铁皮石斛组织培养液，其特征在于，第一母液、第二母液、第三 母液和第四母液均为水溶液。
3. 根据权利要求1或2所述铁皮石斛组织培养液，其特征在于，第一母液、第二母液、第 三母液和第四母液的体积比为〇. 42-0. 5 :0. 42-0. 63 :0. 41-0. 49 :98-99。
4. 根据权利要求1-3任一项所述铁皮石斛组织培养液，其特征在于，第一母液的组分 包括：碘化钾 0. 13-0. 17g/L，硫酸锰 2. 3-2. 5g/L，硫酸锌I. 3-1. 6g/L，硼酸I. 6-1. 9g/L，钼 酸钠 0? 08-0. 12g/L，硫酸铜 0? 009-0. 01lg/L，氯化钴 0? 015-0. 025g/L。
5. 根据权利要求1-4任一项所述铁皮石斛组织培养液，其特征在于，第二母液中，硫酸 亚铁和乙二胺四乙酸二钠的摩尔浓度比为0.9-1. 1 :2-4。
6. 根据权利要求1-5任一项所述铁皮石斛组织培养液，其特征在于，第三母液中，烟 酸、盐酸吡哆醇、盐酸硫胺素和甘氨酸的重量比为14-16 :27-33 :5-7 :58-62。
7. 根据权利要求1-6任一项所述铁皮石斛组织培养液，其特征在于，第四母液的组分 包括：香蕉泥 70. 5-71. 5g/L，硝酸铵 0? 8-0. 9g/L，硝酸钾 0? 9-lg/L，氯化钙 0? 21-0. 24g/L， 硫酸镁 〇. 17-0. 2g/L，磷酸二氢钙 0. 08-0.llg/L，白糖 40-41g/L，琼脂 4-4. 2g/L。
【专利摘要】本发明公开一种铁皮石斛组织培养液，其原料按体积百分比包括：0.4-0.6％第一母液、0.4-0.7％第二母液、0.4-0.6％第三母液和98-99％第四母液；第一母液的组分包括：碘化钾0.1-0.2g/L，硫酸锰2-3g/L，硫酸锌1-2g/L，硼酸1-2g/L，钼酸钠0.05-0.15g/L，硫酸铜0.008-0.012g/L，氯化钴0.01-0.03g/L；第四母液组分包括：香蕉泥70-72g/L，硝酸铵0.7-1g/L，硝酸钾0.8-1.2g/L，氯化钙0.2-0.3g/L，硫酸镁0.15-0.2g/L，磷酸二氢钙0.05-0.13g/L，白糖39-42g/L，琼脂3.8-4.3g/L。
【IPC分类】A01H4-00
【公开号】CN104542288
【申请号】CN201410849880
【发明人】李军
【申请人】安徽康久生物科技有限公司
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2014年12月31日