一种适于多种植物组培批量化生产的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于植物组培技术领域，涉及一种适于多种植物快繁的核心技术。
【背景技术】
[0002]薯蓣属植物(D1scorea)具有重要的药用价值，其根茎皂甙元是目前世界上合成避孕药、镇疼消炎药、麻醉药、肾上腺皮质激素、性激素以及蛋白同化激素等300多种甾体类药物的起始原料，被医药界称之为“药用黄金”。薯蓣块茎中的淀粉是生产工业酒精的原料，也是一种较好的生物能源。薯蓣是一种多年生藤本植物，主要分布于亚洲(中国、印度、緬甸)和美洲(墨西哥、美国、巴西)的热带、亚热带地区，尤以中国和墨西哥居多。据记载，全球薯蓣科植物约650种，我国62种。盾叶薯蓣是我国特有种，耐寒耐旱，3年单株产量可达3?6公斤，皂甙含量为0.5?2.0%，平均每亩可达4?6吨。墨西哥菊叶薯蓣(D1scorea composite Hemsl.)耐旱不耐寒，在我国云南和海南地区种植，菊叶薯截一年四季持续生长，不消苗，3年单株产量可达12?18公斤，平均每亩可达18吨。因此，盾叶薯蓣和菊叶薯蓣进行产业化栽培具有较好的经济前景，是值得推广种植非粮能源和医药两用作物。但是盾叶薯蓣和菊叶薯蓣主要靠人工种植，长期以来由于只种不选，导致品种种性退化，药材质量和产量下降，化学成本不稳定。
[0003]青蒿(Artemisiaannua L.)又称黄花蒿，是我国的传统中药材。青蒿素类药品是我国自主研发的一类新药，它被世界卫生组织评价为“继奎宁之后具有里程碑意义的又一全新抗疟特效药”。同时，它对血吸虫病、艾滋病并发症等也有较好疗效。青蒿为风媒传粉，是异花授粉植物，种子苗本身都是杂合体。因此，育种专家建议采用组织培养的繁殖方法来保持种性纯粹。当选出优良单株后，通过组织培养技术进行无性繁殖固定优良特性，形成新的无性系，并大量扩繁推广，从而收到良好的选育效果。
[0004]绿萝(Eipremnum aureum)又名黄金葛、魔鬼藤、黄金藤等，为天南星科绿萝属常绿多年生草本植物，原产印尼所罗群岛。绿萝茎蔓粗壮，耐阴性好，终年常绿，枝繁叶茂有光泽。是很好的室内观叶佳丼。除此之外，绿萝还能吸附和去除室内空气中的甲醛、苯、三氯乙烯等污染物，是天然的“空气净化器”。越来越受到人们的喜爱，具有较大的市场前景。一般是采用扦插繁殖。因此，研宄绿萝快速繁殖技术特别是组织培养，对进一步研宄其遗传特性和新种质的培育，以及快速实现绿萝的工业化生产具有重要的理论与实践意义。
[0005]组培快繁是近些年来在种苗繁殖过程中应用得最为广泛的一门新兴实用技术。目前，世界上已有几千种植物通过组织培养获得成功。每个组培研宄中心，研宄对象都不会是单一品种，一般是两种或两种以上的主研产品，但每种植物的适宜外植体、组培繁殖方法都不相同，需花费大量的时间和精力去探索每种植物的高效稳定的组培繁殖方法，这样大大增加了投入的人力和物力，直接影响工厂化生产成本。
【发明内容】
[0006]本发明针对现有技术不足，目的是提供一种适于多种植物组织培养的快速繁殖方法，以达到室内大规模繁殖种苗，为规模化发展及时提供多种植物大批量优质种苗。本发明的目的可以通过以下技术实现:
[0007]一种适于多种植物组培批量化生产的方法，包括以下步骤:
[0008](I)外植体的选择:选用植物经组织培养获得的无菌苗为材料获取外植体；
[0009](2)初代培养:将步骤⑴获得的无菌苗的茎段或者叶片接种在1.2XMS+6-BA2.0 ?5.0mg/L+NAA0.1 ?1.0mg/L+IAA0.1 ?1.0mg/L，以及添加有蔗糖和琼脂的培养基中培养25-40天后形成大量愈伤组织和芽；
[0010](3)增殖继代:将初代培养出的愈伤组织和芽，转入到MS+6-BA0.2?1.5mg/L+NAA0.1?1.0mg/L+CCC 0.5?5.0mg/L,以及添加有蔗糖和琼脂的培养基上，培养30天后，同步获得愈伤组织、芽和根；
[0011](4)试管苗移栽:将根叶俱全的幼苗分成单株，随后进行移栽。
[0012]上述方法中步骤(2)切取无菌苗叶片为外植体进行培养。无菌苗叶片切成0.5?1.5cmX0.5?1.5cm接种。每瓶培养基接种10?12个叶片培养。
[0013]上述方法中初代培养和增殖继代培养条件:接种后移到培养室培养，培养室温度为24?26°C，培养室相对湿度为30?50%，每天光照10?12小时，光照强度为1000?20001xo初代培养和增殖继代培养所用的培养基中添加3?5%蔗糖+0.75%琼脂。
[0014]上述方法中移栽后将剩余的愈伤和小芽重新转入新的步骤(3)所用的增殖继代的培养基进行培养，能分化更多根叶俱全的健壮芽苗进行移栽。
[0015]上述方法中出瓶移栽的幼苗先用500?800倍的多菌灵或代森锰锌浸泡10?15分钟。将幼苗移至有顶玻璃的移栽容器中，在温度为20?30°C，湿度80?90%的条件下生长，25?30d长出新叶时，既已成活。
[0016]上述方法中选用植物包括:盾叶薯蓣、菊叶薯蓣、青蒿或绿萝。
[0017]本发明的方法优选如下:
[0018]A、外植体的选择:选用盾叶薯蓣、菊叶薯蓣、青蒿或绿萝等植物幼嫩器官经组织培养获得的2?3cm高且生长健壮、长势均匀、品质良好的无菌苗为材料，切取无菌叶片为外植体进行培养。
[0019]B、初代培养:将获得的无菌苗叶片切成0.5?1.5cmX0.5?1.5cm，接种在I (对照).MS+6-BA 2.0 ?5.0mg/L+NAA 0.1 ?1.0mg/L+IAA 0.1 ?1.0mg/L+3 ?5 % 蔗糖+0.75%琼脂；I1.1.2XMS+6-BA2.0 ?5.0mg/L+NAA0.1 ?1.0mg/L+IAA0.1 ?1.0mg/L+3 ?5%蔗糖 +0.75%琼脂 JII.MS+6-BA0.2 ?1.5mg/L+NAA0.1 ?1.0mg/L+CCC 0.5 ?5.0mg/L+3?5%蔗糖+0.75%琼脂，每瓶培养基接种10?12个叶片培养30天左右，平均出愈率达90%以上，大部分外植体同步分化芽；
[0020]C、培养条件:接种后移到培养室培养，培养室温度为24?26°C，培养室相对湿度为30?50%，每天光照10?12小时，光照强度为1000?20001x ;在I号对照培养基上培养30-40d开始才形成愈伤组织，60d左右才形成大量愈伤组织和芽；在II号培养基上培养15d左右，就开始形成愈伤组织和芽，40d左右就能形成大量愈伤组织和芽，尤其是青蒿和绿萝培养25d左右，形成大量愈伤组织，同时分化出大量丛生芽；
[0021]D、增殖继代:将I号和II号培养基培养出的愈伤组织和芽，转入到III号培养基上，培养30天左右，100%同步获得愈伤组织、芽和根。将根叶俱全的试管苗分离出来，用于移栽；再将愈伤和小芽重新转入III号培养基进行培养，能分化更多根叶俱全的健壮芽苗进行移栽。
[0022]E、试管苗移栽:试管苗出瓶移栽前，将根叶俱全的幼苗分成单株，出瓶的幼苗先用500?800倍的多菌灵或代森锰锌浸泡10?15分钟，随后将幼苗移至有顶玻璃的移栽容器中，在温度为20?30°C，湿度80?90%的条件下生长，25?30d长出新叶时，既已成活，成活率达到95%以上。
[0023]本发明与现有技术相比，本发明的有益效果在于:
[0024]1、本发明的方法不仅适用于中药材盾叶薯蓣、菊叶薯蓣和青蒿进行快速繁殖，还适用于花丼植物绿萝进行快速繁殖。
[0025]2、本发明的方法选择不同植物相同外植体和组培繁殖方法，4种植物都能获得高效稳定的培养体系，这样大大减少了投入的人力和物力，直接降低工厂化生产成本。
[0026]3、利用无菌苗为外植体，稳定性好、操作简便，取材容易，不需经过体外消毒，恢复期短；
[0027]4、本发明的II号培养基中的1.2MS基本培养基与I号培养基中MS基本培养基所含所有的营养元素浓度比为1.2:1，也就是说本发明