一种提高植物组培外植体成活率的衣膜包囊培养法
【技术领域】
[0001] 本发明属农林领域的植物组织培养技术，具体涉及提高植物组培外植体初代培养 成活率的方法。
【背景技术】
[0002] 植物组织培养技术种苗生产、脱除病毒、种质改良等具有广阔的市场前景。目前植 物组织培养技术环节还存在不少问题，外植体(种子、芽、茎段、叶、根、花瓣、果实等）初代诱 导期间死亡而致组织培养失败是普遍现象。外植体死亡的原因，除了合适的培养基配方外， 外植体没有专门的吸收组织或器官，主要靠与培养基的接触面(切口）吸收营养成分和激 素，接触面积小且吸收功能非常低下，无法满足外植体细胞分裂、生长的需要，也是导致外 植体死亡的主要原因,尤其是微小外植体，自身贮存营养物质少,对组培环境适应能力差， 更是难以成活，但目前没有有效的外植体保活方法。植物分生组织培养是脱除病毒的最有 效方法，但植物仅茎尖生长点分生组织不带毒或病毒浓度低，由于分生组织只是一群细胞， 只能切取仅〇.I-Imm外植体接种，外植体极其微小接种培养成活率极低，限制了茎尖脱毒 法在脱除病毒的广泛应用，以致植物脱除病毒进展缓慢。此外，植物的同一组织常常是由2 种或者2种以上遗传型细胞组成的，称嵌合体，切取的外植体组织块含不同遗传型细胞，培 养所得无性系（愈伤组织、瓶苗）仍是遗传上异质的嵌合体，这种变异影响组培无性系的纯 度和质量，给组织培养技术的应用造成障碍，所以必须尽量切取较小块外植体，可望保证外 植体细胞同一性，规避培养出的愈伤组织、瓶苗为嵌合体，保证组培无性系的遗传一致性。
【发明内容】
[0003] 本发明以含营养成分和激素的衣膜剂包囊整个组培外植体再接种到培养基培养， 衣膜对植物组织几乎没有伤害，透水、透气、透光，培养基的营养及激素能被外植体吸收，细 胞呼吸不受影响，相对常规接种方法，扩大了外植体与营养成分、激素的接触面积，增强营 养成分和激素的吸收，可减轻外植体因营养不良而坏死，提高成活率。
[0004] 一种提高植物组培外植体成活率的包囊培养法，其特征在于，本发明以海藻酸钠 为成膜剂，附加成分包括营养成分、植物生长调节物质(激素)，种类和浓度及酸碱度与培养 基的营养成分、激素及酸碱度一致。海藻酸钠交联固化剂为氯化钙溶液。
[0005] 本发明提供的技术方案如下： 海藻酸钠衣膜剂配制、使用方法：海藻酸钠浓度2%_5%，先用少量水溶化，与耐高压灭 菌的营养成分、激素混合，定容，调pH与培养基酸碱度一致(一般pH5. 8)，高压灭菌，冷却待 用。不耐高压灭菌的营养成分、激素溶液过滤除菌，加入已经高压灭菌的海藻酸钠成膜剂， 搅拌混匀待用。氯化钙浓度2%，单独高压灭菌。接种前将已经消毒的外植体泡入海藻酸钠 衣膜剂，用滴管吸取外植体，连同衣膜剂滴入氯化钙溶液，也可从海藻酸钠衣膜剂夹取外植 体，轻轻抖掉外植体表面多余衣膜剂粘稠液，投入氯化钙溶液，固化数分钟。取出外植体投 入无菌水洗去多余氯化钙，在无菌滤纸上吸去无菌水，接种时轻压外植体，使其稍陷入琼脂 培养基表面。
[0006] 本发明的有益效果在于：常规组培方法的营养成分、激素仅存在于培养基，外植体 接触吸收面积小。本发明将含营养、激素的衣膜剂包囊整个外植体,可扩大外植体吸收养 分、激素面积，提高组培外植体成活率，为外植体诱导成功提供保障。该方法操作简便，效果 明显，便于推广应用。
【具体实施方式】 [0007] 实施例一 蝴蝶兰)组培的无菌类原球莖为材料，把体视显微镜放在超净台， 在体视显微镜下，离类原球茎茎尖先端约Imm切取茎尖为外植体，对照组直接接种，培养基 配方为l/2MS+6-BA5mg/L+椰子汁200ml/L+蔗糖20g/L，pH5. 8。衣膜包囊外植体方法，海藻 酸钠浓度3%，附加营养激素同培养基各组分，调pH至5. 8,高压灭菌后冷却待用，另备2%氯 化钙高压灭菌。接种时将茎尖投入海藻酸钠衣膜剂，用镊子取出轻轻抖掉多余粘稠液，投入 氯化钙溶液，固化3分钟，取出投入无菌水洗去多余氯化钙，在无菌滤纸上吸去无菌水，接 种时轻压外植体,使其稍陷入琼脂培养基表面。每瓶接种5个外植体，每次3瓶，重复3次。 接种后在25°C、15001UX光下培养，光照12h/d。培养期间均未发生微生物污染，不同培养时 间的茎尖褐化率、诱导(细胞分裂而膨大）率结果见表1。
[0008] 表1蝴蝶兰类原球茎茎尖的衣膜包囊培养法效果观察
【主权项】
1. 一种提高植物组培外植体成活率的衣膜包囊培养法，其特征在于：衣膜剂包括海藻 酸钠成膜剂、营养成分、植物激素，衣膜剂粘液基本无色透明，与已表面消毒的外植体混合， 用滴管吸取外植体，连同衣膜剂滴入氯化钙溶液，也可夹取表面沾粘有衣膜剂的外植体块， 投入氯化钙溶液，衣膜固化，接种在培养基培养。
2. 如权利要求1所述的植物组培衣膜包囊外植体方法，其特征在于：所述衣膜剂的营 养成分，植物激素、酸碱度与培养基所添加的营养成分、植物激素、酸碱度一致。
3. 如权利要求1所述的植物组培衣膜包囊外植体方法，其特征在于：所述海藻酸钠浓 度为2%_5%，闻压灭困。
4. 如权利要求1所述的植物组培衣膜包囊外植体方法，其特征在于：所述的营养成分、 植物激素，耐高压灭菌的混溶于海藻酸钠溶液一起高压灭菌，不耐高压灭菌的过滤除菌后 混溶于已高压灭菌海藻酸钠溶液。
5. 如权利要求1所述的植物组培衣膜包囊外植体方法，其特征在于：所述的氯化钙溶 液浓度2%，高压灭菌后冷却。
【专利摘要】本发明公开了一种在植物组培中以含营养成分、植物激素的衣膜剂包囊外植体以提高培养成活率的方法，属农林领域的植物组织培养技术。包括以透气、透水、透光性好，对植物组织安全、耐高压灭菌衣膜剂包囊外植体。成膜剂为海藻酸钠溶液，混溶营养成分、激素，与已表面消毒的外植体混合，取出外植体浸入氯化钙溶液，交联固化成粒状。通过包囊，可扩大外植体对营养、激素的接触、吸收面积，提高诱导培养成活率。在植物组培中，利用茎尖分生组织的脱毒培养，避免外植体块为嵌合体而带来组培无性系变异，都尽量切取小块外植体，本发明包囊微小外植体对提高培养成活率效果明显，且该方法操作简便，成本低廉，便于推广应用。
【IPC分类】A01H4-00
【公开号】CN104604681
【申请号】CN201510033454
【发明人】刘福平
【申请人】福建省亚热带植物研究所
【公开日】2015年5月13日
【申请日】2015年1月23日