释浓度为340~360ppm，助剂为抗冻剂和 分散剂的混合物，且其摩尔比为1:1 ;其次，在藏红花的幼苗期至开花期，对藏红花的的叶 和茎每隔七天喷施一次农药提取物溶液；然后，在藏红花的开花期，对藏红花的叶和球茎每 隔五天喷施农药提取物溶液；最后，在藏红花的球茎发育期，对藏红花的叶和球茎每隔四天 喷施农药提取物溶液，即可防治藏红花球茎腐烂病。
[0020] 其中，抗冻剂是甘油、丙二醇、乙二醇、氯化钠、氯化钙、山梨醇中的至少一种。
[0021] 其中，分散剂是十二烷基硫酸钠、甲基戊醇、纤维素衍生物、聚丙烯酰胺、脂肪酸聚 乙二醇酯中的至少一种。
[0022] 实施例3 :实验室抑菌试验 本实施例采用室内管碟法分别测定农药提取物溶液对藏红花球茎腐烂病病原细菌 (粘质沙雷菌、悬钩子沙雷菌、炭疽菌）及真菌（尖孢镰刀菌、木霉属真菌、丛赤壳菌）的抑 菌率。
[0023] ( 1)藏红花球茎腐烂病病原细菌的抑菌实验 在超净工作台上配制马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g， 琼脂18g，水lOOOmL，自然pH，121°C、高压蒸汽灭菌），然后在PDA培养基凝固前加入浓度为 400ppm农药提取物溶液并混合均匀；将粘质沙雷菌、悬钩子沙雷菌、炭疽菌的菌种分别活 化后，分别挑取适量单菌落菌体用无菌生理盐水配制成含菌量为IO6CFUAiL的三种菌悬液 备用。
[0024] 实验组：将PDA培养基形成3实验组，每个实验组设置3个平行组，分别对粘质沙 雷菌、悬钩子沙雷菌、炭疽菌进行抑菌实验，各实验组均取20mL相应的含农药提取液的PDA 培养基平铺在直径为9cm的培养皿中，然后分别吸取150uL相应的菌悬液均匀涂布于在PDA 培养基上，继后将涂覆菌悬液后的各培养皿放入恒温培养箱中，于28°C培养2天，培养时间 届满后取出，数单菌落数，并计算抑菌率。
[0025] 对照组：对照组为三个，分别对粘质沙雷菌、悬钩子沙雷菌、炭疽菌进行抑菌实验， 每个对照组设置3个平行组，对照组的培养基为不含农药提取液的的PDA培养基，加入与农 药提取物溶液等重量的无菌水，其他条件及操作方法同实验组。
[0026] 抑菌率=[(对照组菌落平均数-实验组菌落平均数）/对照组菌落平均数]X100% (1)藏红花球茎腐烂病病原真菌的抑菌实验 在28°C的恒温培养箱中、PDA培养基上分别培养尖孢镰刀菌、木霉属真菌、丛赤壳菌三 种真菌，待各真菌菌落生长至直径为5cm左右时，分别取出所述培养基，在超净工作台上用 无菌打孔器分别在距各菌落边缘3~4mm处的同心圆上取直径d=6.Omm的菌饼，每种真菌 制备18个菌饼。
[0027] 实验组：用400ppm的农药提取物溶液形成三个实验组，分别对尖孢镰刀菌、木霉 属真菌、丛赤壳菌进行抑菌实验，每个实验组设置3个平行组。
[0028] 每个实验组的操作：取20mLPDA培养基平铺在直径为9cm的培养皿中，把菌饼翻 面接种在培养皿的中心位置，使菌丝接触到PDA培养基，然后在菌饼的四周等距离对称放 置4个牛津杯，向各牛津杯中分别注入0.ImL农药提取物溶液，然后将前述接种了真菌菌 种的培养皿放入恒温培养箱中，于28°C的培养5天，培养时间届满后取出，以十字交叉法测 量菌落直径，计算抑菌率。
[0029] 对照组：对照组为三个，分别对尖孢镰刀菌、木霉属真菌、丛赤壳菌进行抑菌实验， 每个对照组设置3个平行组，各对照组的操作与实验组基木相同，与实验组不同之处是：向 菌饼四周等距离对称放置的4个牛津杯中分别注入0.ImL无菌水。
[0030] 菌落直径（mm)=菌落直径平均值-6. 0 抑菌率=[(对照组菌落直径一实验组菌落直径）/对照组菌落直径]X100% 各实验组、对照组对藏红花球茎腐烂病病原细菌及真菌的抑菌率如表1所示。
[0031] 表1农药提取物溶液对藏红花球茎腐烂病病原细菌及真菌的抑菌率
【主权项】
1. 一种用于防治藏红花球茎腐烂病的农药提取物，其特征在于，该农药提取物为10~ 20份互叶白千层、30~40份灰绿藜和10~20份牛至的叶和茎经乙醇提取的农药提取物， 具体方法为，将新鲜的互叶白千层、灰绿藜和牛至叶和茎切碎，按照料液比1 : (8~10)g/ml 加入体积分数为95 %的乙醇浸泡24~30h，再用超声波辅助浸泡20~30min，将混合物在 70~75°C下回流两次，合并滤液即得农药提取物。
2. -种如权利要求1所述的用于防治藏红花球茎腐烂病的农药提取物的使用方法， 其特征在于，首先，将得到的农药提取物加入助剂和水进行稀释；其次，在藏红花的幼苗期 至开花期，对藏红花的的叶和茎每隔七天喷施一次农药提取物溶液；然后，在藏红花的开花 期，对藏红花的叶和球茎每隔五天喷施农药提取物溶液；最后，在藏红花的球茎发育期，对 藏红花的叶和球茎每隔四天喷施农药提取物溶液，即可防治藏红花球茎腐烂病。
3. 根据权利要求2所述的用于防治藏红花球茎腐烂病的农药提取物的使用方法，其特 征在于，所述助剂为抗冻剂和分散剂的混合物，且其摩尔比为1:1。
4. 根据权利要求3所述的用于防治藏红花球茎腐烂病的农药提取物的使用方法，其特 征在于，农药提取物溶液的稀释浓度为300~400ppm。
【专利摘要】本发明公开了一种用于防治藏红花球茎腐烂病的农药提取物及使用方法，该农药提取物由新鲜的互叶白千层、灰绿藜和牛至的叶和茎经乙醇提取而成，在原料中加入乙醇浸泡再用超声波辅助浸泡，然后进行两次回流，合并滤液即得农药提取物。将得到的农药提取物加入助剂和水进行稀释，在藏红花的幼苗期、开花期以及发育期进行喷洒，即可防治藏红花球茎腐烂病。本发明提取农药对藏红花球茎腐烂病的防效高达93.4％及94.3％4％，可有效缓解藏红花球茎腐烂病病情，而且本发明提取农药从天然植物中提取，对藏红花不存在农药残留问题，因此可以减少对环境的污染，安全性高，且成本低。
【IPC分类】A01P3-00, A01N65-28, A01P1-00, A01G13-00, A01G7-06
【公开号】CN104642406
【申请号】CN201510123216
【发明人】倪春仙
【申请人】倪春仙
【公开日】2015年5月27日
【申请日】2015年3月20日