一种柞蛹虫草中药材的人工培育方法、炮制、检测及其用图
【技术领域】
[0001] 本发明属中药材技术领域，具体涉及一种柞蛹虫草中药材的人工培育方法、炮制、 特征成分的检测及其用途。
【背景技术】
[0002] 蛹虫草Cordyceps militaris (Linn. et. Fr.) Link为麦角菌科虫草属，又名北冬虫 夏草、北虫草、蛹草、东北虫草等，天然野生蛹虫草始载于《新华本草纲要》，后收载于《中华 本草》、《中药辞海》、《全国中草药汇编》、《中国药用孢子植物》、《中华药海》等中药典籍中。 蛹虫草作为冬虫夏草的模式种，可作为冬虫夏草入药。此外，人工培育蛹虫草已获得成功， 中国专利申请87106987. 3、中国专利申请00130381. 3、中国专利申请201210376581. X公 开了蛹虫草的人工培育方法。蛹虫草菌已收载在国家食品药品监督管理局国家药品标准 WS3-286(Z-039)-2005(Z) "蛹虫草菌粉"药品标准中。上述公开的文献并未考虑不同光源 交替照射对于蛹虫草培育的作用以及蛹虫草作为中药材全草入药的炮制、特征成分的检测 及其新的用途。
[0003] 目前蛹虫草人工培养品基本上作为高档食用菌类烹调用，其食用部位为人工培育 的蛹虫草子实体，即真菌部分，而没有蛹体。卫生部2009年根据《中华人民共和国食品卫生 法》和《新资源食品管理办法》的规定，批准蛹虫草为新资源食品，其用于食品生产加工。其 公告规定：蛹虫草：即人工培养的蛹虫草子实体。种属：子囊菌亚纲、麦角菌科、虫草属。生 产工艺简述：接种蛹虫草菌种到培养基上进行人工培养，采收蛹虫草子实体，经烘干等步骤 而制成。食用量<2克/天。使用范围：直接食用、酒类、罐头、调味品、饮料。国家药品标 准中蛹虫草菌粉亦指是菌粉。口服，每日3次，每次lg。而相关中药典籍明确指明蛹虫草必 须全草入药，即连蛹（蚕蛹部分）带草（真菌部分）一起入药。冬虫夏草也是连虫带草一 起入药（实际上是以虫为主）。再有，人工培育的蛹虫草成分复杂，而其作为中药材用于临 床治疗必须保证每批产品特征成分的检测、炮制工艺符合规定，并具有确切的治疗效果。因 此，对于蛹虫草人工培养品成分的检测及控制、炮制工艺的确定，对其质量控制、提高疗效 及保证安全性非常重要。本发明提供了一种用活柞蚕人工培养的柞蛹虫草中药材、炮制方 法、特征检测方法及用途，与市场上的各种食用级的蛹虫草子实体或蛹虫草菌粉不同，本发 明是将柞蛹虫草全草作为中药材及中药饮片使用并具有明确的治疗效果。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种人工培育的柞蛹虫草中药材的培育及炮制方法。采用 活的、健康的柞蚕蚕蛹，人工接种蛹虫草菌在温度15~25°C，培育时间45~60天，采用蓝 光（60-100勒克斯）及白光（350-400勒克斯）每日交替照射各8-10小时的条件下培育出 有效成份稳定可控的作蛹虫草中药材。同时，作蛹虫草中药材（连蛹带草）的炮制在温度 不超过60°C的条件下进行炮制，工艺为烘干及粉碎，最大限度的保证柞蛹虫草中药材有效 成份的活性。
[0005] 本发明的另一个目的是提供所述人工培育的柞蛹虫草中药材的特征检测方法：采 用高效液相、高效液相-质谱联用检测系统及对照品对柞蛹虫草中药材成分进行定性检测 及成分指认，并采用指纹特征图谱进行指纹检测，5个特征色谱峰相对保留时间在±5%之 内。经过鉴定，各指纹成分分别为：峰1为：尿苷，峰2为：酪氨酸，峰3为：腺苷，峰4为：虫 草素，峰5为：N-(2)羟基腺苷。
[0006] 本发明的另一个目的是保证所述人工培育的柞蛹虫草中药材其相关成分在各批 次中的稳定性。
[0007] 本发明还有一个目的是提供所述人工培育的柞蛹虫草中药材在临床治疗的新用 途。
[0008] 以下通过【具体实施方式】对本发明作进一步的详细描述，但并不限制本发明，本领 域技术人员可以根据发明做出各种改变和变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发 明所附权利要求的范围。
[0009] 本发明的目的是通过如下技术方案实现：
[0010] A -种柞蛹虫草中药材的人工培育方法及炮制方法
[0011] -种作蛹虫草中药材，为麦角菌科虫草属蛹虫草Cordyceps militaris(Linn. et. Fr.) Link的人工培养品。本品系蛹虫草菌接种在天蚕蛾科昆虫作蚕（Antheraea pernyi Geurin-Meneville)的活蛹上，在温度为15~25°C条件下，经过45~60天培育，采用蓝光 (60-100勒克斯）及白光（350-400勒克斯）每日交替照射各8-10小时，培养出的子座和蛹 体的复合体：由蛹体与从蛹体长出的多个子座相连而成，二者结合紧密。蛹体呈长椭圆形， 长2~4. 5cm，直径1~2. 5cm ;表面覆盖黄白色至黄色菌膜，剥落后呈黑褐色至黑色，蛹体 腹部有环纹10~25个；质较脆，易折断，断面略平坦，灰棕色。子座4~20个，细长扁圆柱 形，长2~8cm，直径0. 15~0. 25cm ;表面橙黄色至橙红色，少有分枝，顶端偶有膨大；质柔 韧，断面黄白色。气微腥，味微咸。
[0012] B柞蛹虫草中药材的特征检测方法
[0013] 采用高效液相、高效液相-质谱联用检测系统及对照品对本发明的柞蛹虫草中药 材成分进行定性检测及成分指认，并采用指纹特征图谱进行指纹检测（图2、图3)。本发明 实施例1-1、1-2、1-3、1-4、1-5、1-6共6批样品中均呈现5个特征色谱峰，以虫草素（峰4) 为参照，相对保留时间分别为：〇. 32 (峰1)、0. 55 (峰2)、0. 87 (峰3)、1 (峰4)、1. 17 (峰5)。 且5个特征色谱峰相对保留时间在±5%之内。经过鉴定，各指纹成分分别为：峰1为：尿 苷，峰2为：酪氨酸，峰3为：腺苷，峰4为：虫草素，峰5为：N-⑵羟基腺苷。
[0014] C柞蛹虫草中药材相关成分的检测
[0015] 包括：水分、重金属、砷盐、炽灼残渣、含量。
[0016] D本发明柞蛹虫草中药材临床上用于感冒的治疗 [0017] 其特点是：疗程短、见效快且无毒副作用。
【附图说明】
[0018] 图1是本发明实施例1-2培育的柞蛹虫草中药材图片。
[0019] 图2是本发明实施例1-2培育的柞蛹虫草中药材的特征图谱。
[0020] 图3是本发明实施例1-2培育的柞蛹虫草中药材的LC-MS-MS (液相色谱-串联质 谱）色谱图总离子图。
[0021] 具体实施方法
[0022] 下面实施例用于进一步说明但不限于本发明。
[0023] 实施例1 :本发明柞蛹虫草中药材的培育与炮制
[0024] 1-1取无杂菌污染的蛹虫草菌液1200毫升（吉林省蚕业科学研究院），健康的活 柞蚕蛹1000枚（河北省承德医学院蚕业研究所），在百级空气洁净接种室人工接种。每枚 活柞蚕蛹接种1. 2毫升蛹虫草菌液。培育条件：温度15°C，时间45天，采用蓝光（100勒克 斯）及白光（400勒克斯）每日交替照射各10小时，即蓝光（C0B光源，深圳市永恒晟光电 有限公司）照射10小时，白光（白炽灯，南通三星电瓷照明有限公司）照射10小时，培养 出的子座和蛹体的复合体。本品由蛹体与从蛹体长出的多个子座相连而成，二者结合紧密。 蛹体呈长椭圆形，长2~4. lcm，直径1~2. 2cm ;表面覆盖黄白色至黄色菌膜，剥落后呈黑 褐色至黑色，蛹体腹部有环纹10~22个；质较脆，易折断，断面略平坦，灰棕色。子座4~ 18个，细长扁圆柱形，长2~6cm，直径0. 15~0. 18cm ;表面橙黄色至橙红色，少有分枝，顶 端偶有膨大；质柔韧，断面黄白色。气微腥，味微咸。炮制方法：在温度为60°C以下的条件 将培育的柞蛹虫草进行红外干燥，并在温度为60°C以下的条件下研末为细粉。即按中国药 典规定：指能全部通过五号筛，并含能通过六号筛不少于95%的粉末。
[0025] 1-2取无杂菌污染的蛹虫草菌液1200毫升（吉林省蚕业科学研究院），健康的活 柞蚕蛹1000枚（河北省承德医学院蚕业研究所），在百级空气洁净接种室人工接种。每枚 活柞蚕蛹接种1. 2毫升蛹虫草菌液。培育条件：温度18°C，时间60天，采用蓝光（100勒克 斯）及白光（350勒克斯）每日交替照射各9小时，即蓝光（C0B光源，深圳市永恒晟光电有 限公司）照射9小时，白光（白炽灯，南通三星电瓷照明有限公司）照射9小时，培养出的子 座和蛹体的复合体。本品由蛹体与从蛹体长出的多个子座相连而成，二者结合紧密。蛹体 呈长椭圆形，长2. 5~4. 5cm，直径1. 5~2. 5cm ;表面覆盖黄白色至黄色菌膜，剥落后呈黑 褐色至黑色，蛹体腹部有环纹16~25个；质较脆，易折断，断面略平坦，灰棕色。子座5~ 20个，细长扁圆柱形，长3~8cm，直径0. 18~0. 25cm ;表面橙黄色至橙红色，少有分枝，顶 端偶有膨大；质柔韧，断面黄白色。气微腥，味微咸。炮制方法：在温度为60°C以下的条件 将培育的柞蛹虫草进行微波干燥，并在温度为60°C以下的条件下研末为细粉。即按中国药 典规定：指能全部通过五号筛，并含能通过六号筛不少于95%的粉末。
[0026] 1-3取无杂菌污染的蛹虫草菌液1300毫升（吉林省蚕业科学研究院），健康的活 柞蚕蛹1000枚（河北省承德医学院蚕业研究所），在百级空