一种迷迭香组培体系的建立方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种迷迭香组培体系的建立方法。
【背景技术】
[0002]选迭香i Rosemarinus o//ici/?a7i5.)系唇形科迷迭香属多年生常绿亚灌木，原产于环地中海沿岸，现在欧洲，美国，中国等地区均有分布，全株富含抗氧化成分，主要包括鼠尾草酸、鼠尾草酚、迷迭香酚、熊果酸、迷迭香酸等，具有抗炎、抗菌抗病毒、抗肿瘤、免疫调节、抑制尿酸生成等多方面的药理作用，主要应用在食品保藏技术，化妆品和医药等方面。比起传统的化学防腐剂，迷迭香提取物具有价格低廉、高效安全和丰富收集途径等优势，尤其是在肉类和富油食品的安全卫生与保存的应用上。
[0003]我国对迷迭香引种栽培起步较晚，大约在20世纪70年代末和80年代初期，开始作为香料作物引进，并取得成功，目前在北京、贵州、新疆、云南等地均有种植。我国科学家对于迷迭香的进一步研宄己取得一定的成绩，但是仍然存在着优良品种引进与驯化的相关问题，对于适宜我国大部分地区环境生长的品种开发以及迷迭香的大量快速繁殖的报道仍然较少。迷迭香繁殖较为困难，其主要繁殖方式包括种子繁殖、扦插繁殖以及压条繁殖等。利用种子繁殖时，其种子存在发芽难和发芽率低的问题，大大减少了成活率及成苗率，成本较高，收益少；利用扦插和压条的方式进行繁殖时，其扦插的枝条不易生根或者较为缓慢，不容易成活，也造成了迷迭香成苗率的问题。因此，急需建立了系统的迷迭香组织培养植株再生体系，以提高其繁殖速度和规模，从而实现迷迭香种苗的工厂化生产。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供出一种迷迭香组培体系的建立方法，本发明以带芽茎段为外植体，经过诱导、增殖、生根以及炼苗移栽等步骤成功地获得了迷迭香组织培养再生植株，建立了系统的迷迭香组织培养植株再生体系，从而实现了本发明的目的。
[0005]本发明的一种迷迭香组培体系的建立方法，包括以下的步骤:
(I)外植体消毒:采集回来的茎段以淸水冲洗10?30min后并用毛刷轻轻刷去上面的杂质，在超净工作台中用70%?80%乙醇溶液中消毒10?30s，后用无菌水洗3?5次，再用5%?10%安替富民溶液漂洗5?lOmin，用无菌水冲洗4?6次后用无菌滤纸吸去水分后备用O
[0006](2)诱导培养:将步骤(I)消毒好的茎段按成对芽为一个单位切成约1.5cm长的茎段，剪去茎段底部处理过程中褐化部分，接种到诱导培养基中进行芽诱导培养。接种后先在25?28°C条件下全暗培养3?10天，然后置于每天光照10?14小时，光照强度为2000?30001x，置于培养温度为25?28°C的条件下培养直至形成不定芽。
[0007](3)增殖培养:将步骤(2)培养得到的芽苗，从基部切取芽并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25?28°C条件下全暗培养2?3天，然后置于每天光照11?15小时，光照强度为2000?30001x，置于培养温度为25?28°C的条件下培养，30天继代一次。
[0008](4)生根培养:将步骤(2)或(3)的芽苗长至1.5?2.5cm高时，切割成单芽并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25?28°C条件下全暗培养2?3天，然后置于每天光照14?16小时，光照强度为3000?50001x，培养温度为25?28°C的条件下培养至生根。
[0009](5)炼苗移栽:将长至3?4cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗5?7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入由泥炭土:輕石=I:1混合成的基质中于每天光照10?12小时，光照强度为3000?50001x，培养温度为25?28°C，空气湿度为80%?90%的培养箱中培养5?7天，然后移栽定植于大田中。
[0010]上述步骤(2)所述的诱导培养基为:MS+0.2?1.0mg/L 6-BA+15?30g/L蔗糖+3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 ?5.8。
[0011]上述步骤(3 )所述的增殖培养基为:MS+0.0I?0.2mg/L ΝΑΑ+0.2?2.0mg/L6-BA+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 ?5.8。
[0012]上述步骤(4)所述的生根培养基为:MS+0.5?3.0mg/L IBA+15?30g/L蔗糖+3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 ?5.8。
[0013]本发明的优点是-H'香、Rosemarinus o//ici/?a7i5.)系唇形科迷迭香属多年生常绿亚灌木，其植株富含酚、酮、酸、萜类等多种化合物，具有很强的抗氧化作用，在抗疲劳、抗衰老、抗抑郁和抗癌等方面具有良好的发展前景，是一种很好的经济型植物。目前迷迭香主要以种子繁殖、扦插、压条等方式进行种苗繁育，存在繁殖系数低、成苗率低、成本高、收益少等缺点，制约了迷迭香产业的发展。利用植物组织培养技术提高其繁殖速度和规模，从而实现迷迭香种苗的工厂化生产。本发明以带芽茎段为外植体，经过诱导、增殖、生根以及炼苗移栽等步骤成功地获得了迷迭香组织培养再生植株，建立了系统的迷迭香组织培养植株再生体系。
【具体实施方式】
[0014]以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
[0015]实施例1
(I)外植体消毒:采集回来的茎段以淸水冲洗1min后并用毛刷轻轻刷去上面的杂质，在超净工作台中用75%乙醇溶液中消毒10s，后用无菌水洗4次，再用5%安替富民溶液漂洗5min，用无菌水冲洗4次后用无菌滤纸吸去水分后备用。
[0016](2)诱导培养:将步骤(I)消毒好的茎段按成对芽为一个单位切成约1.5cm长的茎段，剪去茎段底部处理过程中褐化部分，接种到诱导培养基中进行芽诱导培养。接种后先在25°C条件下全暗培养3天，然后置于每天光照10小时，光照强度为20001χ，置于培养温度为25°C的条件下培养直至形成不定芽，诱导率为91.4%。所述的诱导培养基为:MS+0.5mg/L 6-BA+16g/L 蔗糖 +3.8g/L 琼脂，pH 为 5.5。
[0017](3)增殖培养:将步骤(2)培养得到的芽苗，从基部切取芽并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25°C条件下全暗培养2天，然后置于每天光照12小时，光照强度为25001x，置于培养温度为25°C的条件下培养，30天继代一次，增殖系数为5.7。所述的增殖培养基为:MS+0.lmg/L NAA+1.2mg/L 6_BA+23g/L 蔗糖 +