一种白芨组织培养基及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物组织培养领域，具体涉及一种白芨组织培养基及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 白芨，又名白及，为兰科白及属多年生草本植物。以干燥块茎药用，具有收敛止血， 消肿生肌之功效。临床上常用于治疗肺结核咳血、胃溃疡吐血、便血以及外伤出血等疾病。 白芨的块茎含有丰富的白芨多糖，其主要成分是葡萄甘露聚糖，目前这种物质被广泛地应 用于食品工业、医学卫生材料和日化工业化中。
[0003]白芨种子微如尘埃，在自然环境中极难萌发，野生资源随着需求量的增大急剧减 少，濒临灭绝。目前，白芨已列入《中华人民共和国野生植物保护条例》。
[0004] 近年来，由于白芨价格的飞涨，野生资源不断减少，白芨的组织培养技术成为了当 前研宄的热点。白芨组织培养的相关技术已经成熟，但由于培养周期较长，培育的原球茎较 小，影响后期炼苗以及栽培的成活率。
【发明内容】
[0005] 本发明要解决的技术问题是提供一种白芨组织培养基，以缩短白芨组织培养周 期，保证种苗原球茎大且均一。
[0006] 本发明还要解决的技术问题是提供上述白芨组织培养基的制备方法。
[0007] 为解决上述问题，本发明采用的技术方案如下：
[0008] -种白芨组织培养基，它包括种子萌发培养基和壮苗培养基；
[0009]其中，
[0010] 种子萌发培养基的配方为1/2MS大量元素+0? 5~I. 0mg/L6-苄胺基嘌呤+0? 2~ I.Omg/L萘乙酸+50~100g/L马铃薯+25g/L蔗糖+6.Og/L琼脂，溶剂为水，pH为5. 8~ 6. 0 ；
[0011] 壮苗培养基为的配方为N6大量元素+MS有机物+MS微量元素+0. 1~I.Omg/L萘 乙酸+50~100g/L香蕉泥+25g/L鹿糖+6. 0g/L琼脂，溶剂为水，pH为5. 8~6. 0。
[0012] 其中，所述的MS大量元素的配方为硝酸铵1600~1700mg/L+硝酸钾1800~ 2000mg/L+二水合氯化钙430~440mg/L+七水合硫酸镁350~400mg/L+磷酸二氢钾170~ 200mg/L，溶剂为水。
[0013] 其中，所述的N6大量元素的配方为硝酸钾2500~3000mg/L+硫酸铵450~500mg/ L+二水合氯化钙150~200mg/L+七水合硫酸镁150~200mg/L+磷酸二氢钾400~500mg/ L，溶剂为水。
[0014] 其中，所述的MS微量元素的配方为四水合硫酸锰22. 3mg/L+七水合硫酸锌8. 6mg/ L+六水合氯化钴0? 025mg/L+五水合硫酸铜0? 025mg/L+碘化钾0? 83mg/L+硼酸6. 2mg/L+ 七水合硫酸亚铁27. 8mg/L+乙二胺四乙酸二钠37. 3mg/L，溶剂为水。
[0015] 其中，所述的MS有机物的配方为烟酸0. 1~0. 5mg/L+盐酸吡哆醇0. 1~0. 5mg/ L+盐酸硫胺素0? 1~I.Omg/L+甘氨酸2~4mg/L+肌醇50~100mg/L，溶剂为水。
[0016] 上述的白芨组织培养基的制备方法，它包括如下步骤：
[0017] (1)按配方量配置MS大量元素、MS微量元素、MS有机物和N6大量元素备用；
[0018] ⑵将配方量的马铃薯和香蕉切成lcm*lcm*lcm的小块，分别加水搅拌后，得到马 铃薯泥和香蕉泥；
[0019] (3)将步骤（1)和步骤（2)得到的MS大量元素、MS微量元素、MS有机物、N6大量 元素、马铃薯泥和香蕉泥按配方量配置种子萌发培养液和壮苗培养液；
[0020] (4)将步骤（3)得到的种子萌发培养液和壮苗培养液分别调节pH至5. 8~6. 0， 分装后于121°C高压灭菌20~30min;
[0021] (5)将步骤⑷所得的种子萌发培养液和壮苗培养液冷凝后即得本发明中的种子 萌发培养基和壮苗培养基。
[0022] 步骤（4)中，调节pH所用的试剂为lmol/L氢氧化钾水溶液和lmol/L盐酸水溶液。
[0023] 有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下优势：
[0024] 1、利用本发明配制的培养基，假鳞茎形成率能达到95%，组培苗成苗率超过 98 %，且原球茎大，移栽炼苗成活率高。
[0025] 2、本发明采用N6和MS相结合的方式壮苗，营养成分丰富，适合白芨苗原球茎的增 殖和生根，大大缩短了白芨培养的周期，降低了生产成本。
【附图说明】
[0026] 图1为实施例2中白发种子明发不意图。
[0027] 图2为实施例2中白芨壮苗培养示意图。
【具体实施方式】
[0028] 根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实 施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本 发明。
[0029] 实施例1
[0030] 按配制10L白芨组织培养培养基计，其配制方法如下：
[0031] 1、称取750g去皮的马铃薯，将马铃薯切成IcmXIcm左右的小块，在搅拌机中加入 IL去离子水，搅拌15min，将马铃薯打成泥状物；
[0032] 2、称取500g去皮香蕉，将其切成IcmXIcm左右的小块，在搅拌机中加入IL去离 子水，搅拌15min，将香蕉打成泥状物；
[0033] 3、称取两份250g蔗糖和60g琼脂粉，分别加到10L的容器A中（配制种子萌发培 养基）和10L的容器B中（配制壮苗培养基）；
[0034] 4、将步骤1中制的马铃薯泥倒入容器A中，2中制的香蕉泥转到容器B中；
[0035]5、量取250mLMS大量元素的20倍母液、IOmLMS微量元素的1000倍母液、IOmLMS 有机物的1000倍母液、4mLNAA0. 5mg/L母液和20mL6-BA0. 5mg/L母液，倒入容器A中；量取 500mLN6大量元素的20倍母液、IOmLMS微量元素的1000倍母液、IOmLMS有机物的1000倍 母液和20mLNAA0. 5mg/L母液，倒入容器B中；
[0036] 6、加去离子水定容到10L，搅拌均匀后调pH至5. 8,分装到组培瓶中，每瓶60mL， 121°C高压灭菌20min，灭菌完成后取出，置于组培室中冷却，待其凝固后即为所配制的培养 基。
[0037] 实施例2
[0038] 按实施例1中培养基配制方法，琼脂粉添加量与实例1中的相同，在种子萌发和壮 苗生根培养两个阶段分别以表1所列培养基组合进行筛选，以优选最适培养基组合配方。 表1说明：①培养基配方优化筛选主要是设计不同的基础培养基、激素浓度、天然添加物等 对培养基进行了优化设计；②表1中N6+1/2MS为N6的大量元素和1/2MS的微量元素、有机 物的组合；③本实例中种子萌发培养基的筛选所用材料为白芨蒴果，将白芨蒴果经表面消 毒处理，在无菌条件下切开获取种子，并经过无菌操作播种于表1的种子萌发培养基中；本 实例中白芨壮苗生根培养基配方的筛选所用材料为白芨种子萌发而来的从生芽，无菌操作 接种于表1的壮苗生根培养基中。④针对白芨组培快繁的过程，不同的培养阶段设计了二 组培养基配方，种子萌发阶段主要观察种子萌发的快慢、长势、颜色等指标判断配方是否合 理；壮苗生根培养阶段，主要通过观察苗的生长势、颜色，假鳞茎形成的速度、大小及移栽成 活率等指标来判断配方的好坏。通过观察和各项指标的测定，并用"▲"和"A"的多少代 表配方的好坏，"▲"越多表示越好，"A"比"▲"要低一个等次。
[0039]
【主权项】
1. 一种白芨组织培养基，其特征在于，包括种子萌发培养基和壮苗培养基； 其中， 种子萌发培养基的配方为1/2MS大量元素+0. 5~I. 0mg/L6-苄胺基嘌呤+0. 2~ 1.0 mg/L萘乙酸+50~100g/L马铃薯+25g/L蔗糖+6. Og/L琼脂，溶剂为水，pH为5. 8~ 6. 0 ； 壮苗培养基为的配方为N6大量元素+MS有机物+MS微量元素+0. 1~1.0 mg/L萘乙酸 +50~100g/L香蕉泥+25g/L鹿糖+6. Og/L琼脂，溶剂为水，pH为5. 8~6. 0。
2. 根据权利要求1所述的白芨组织培养基，其特征在于，所述的MS大量元素的配方为 硝酸铵1600~1700mg/L+硝酸钾1800~2000mg/L+二水合氯化钙430~440mg/L+七水 合硫酸镁350~400mg/L+磷酸二氢钾170~200mg/L，溶剂为水。
3. 根据权利要求1所述的白芨组织培养基，其特征在于，所述的N6大量元素的配方为 硝酸钾2500~3000mg/L+硫酸铵450~500mg/L+二水合氯化钙150~200mg/L+七水合 硫酸镁150~200mg/L+磷酸二氢钾400~500mg/L，溶剂为水。
4. 根据权利要求1所述的白芨组织培养基，其特征在于，所述的MS微量元素的配方为 四水合硫酸锰22. 3mg/L+七水合硫酸锌8. 6mg/L+六水合氯化钴0. 025mg/L+五水合硫酸铜 0? 025mg/L+碘化钾0? 83mg/L+硼酸6. 2mg/L+七水合硫酸亚铁27. 8mg/L+乙二胺四乙酸二 钠37. 3mg/L，溶剂为水。
5. 根据权利要求1所述的白芨组织培养基，其特征在于，所述的MS有机物的配方为烟 酸0? 1~0? 5mg/L+盐酸[!比卩多醇0? 1~0? 5mg/L+盐酸硫胺素0? 1~I. 0mg/L+甘氨酸2~ 4mg/L+肌醇50~100mg/L，溶剂为水。
6. 权利要求1所述的白芨组织培养基的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： (1)按配方量配置MS大量元素、MS微量元素、MS有机物和N6大量元素备用； ⑵将配方量的马铃薯和香蕉切成的小块，分别加水搅拌后，得到马铃薯 泥和香蕉泥； (3) 将步骤（1)和步骤⑵得到的MS大量元素、MS微量元素、MS有机物、N6大量元素、 马铃薯泥和香蕉泥按配方量配置种子萌发培养液和壮苗培养液； (4) 将步骤（3)得到的种子萌发培养液和壮苗培养液分别调节pH至5. 8~6.0,分装 后于121°C高压灭菌20~30min ; (5) 将步骤（4)所得的种子萌发培养液和壮苗培养液冷凝后即得本发明中的种子萌发 培养基和壮苗培养基。
7. 根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤（4)中，调节pH所用的试剂为 lmol/L氢氧化钾水溶液和lmol/L盐酸水溶液。
【专利摘要】本发明公开了一种白芨组织培养基及其制备方法，它包括种子萌发培养基和壮苗培养基；其中，种子萌发培养基的配方为1/2MS大量元素+0.5～1.0mg/L6-苄胺基嘌呤+0.2～1.0mg/L萘乙酸+50～100g/L马铃薯+25g/L蔗糖+6.0g/L琼脂；壮苗培养基为的配方为N6大量元素+MS有机物+MS微量元素+0.1～1.0mg/L萘乙酸+50～100g/L香蕉泥+25g/L蔗糖+6.0g/L琼脂。与现有技术相比，利用本发明产品，白芨假鳞茎形成率能达到95％，组培苗成苗率超过98％，且原球茎大，移栽炼苗成活率高。同时，本发明产品还大大缩短了白芨培养的周期，降低了生产成本。
【IPC分类】A01H4-00
【公开号】CN104871977
【申请号】CN201510287350
【发明人】席刚俊, 徐超, 史俊, 汪善峰, 李警保
【申请人】江苏农林职业技术学院
【公开日】2015年9月2日
【申请日】2015年5月29日