一种抑瘤功能茶树良种的选育方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于茶树种质资源领域，具体涉及一种抑瘤功能茶树良种的选育方法。
【背景技术】
[0002] 现代科学研宄表明，茶叶具有抗氧化、抗肿瘤、抗衰老、抗病毒、抗菌、降血压、降血 脂以及降血糖等药理功能和保健功能。茶叶含有机化合物400种以上，无机矿物质15种以 上，其中主要的抗肿瘤功能成分有茶多酚及其氧化产物、咖啡因、茶色素和茶氨酸等。
[0003] 茶多酚的主要成分是儿茶素，儿茶素由若干单体组成，以酯型儿茶素中的表儿茶 素没食子酸酯（ECG)、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG)的含量较多，约占儿茶素总量的 75%，其药理活性也最强。酯型儿茶素可以抑制癌细胞生长，诱导癌细胞分化和凋亡，具有很 强的抗癌作用（陈宗懋，2003Jankunetal.，1997;Tanetal.，2000)。EGCG是抑制乳 腺癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌、结肠癌以及黑色素瘤最有效的儿茶素单体（KAVURMAMM，et al.，2005;CHEND，etal.，2008)，可通过多种途径防止肿瘤的发生和转移（LambertJ D，etal.，2005;TachibanaH,etal.，2004;ShimizuM，etal.，2005)。而ECG在抑制人 体病毒侵染、清除脂质自由基方面作用显著。Ravindranath等发现ECG对转移性前列腺癌 (DU154)、中等分化、低分化上皮卵巢癌（HH450和HH639)等生殖器官来源的恶性肿瘤 的抑制作用较EGCG显著（MAZIGHIM，etal.，2004)。EGCG、ECG均能以时间依赖和浓度 依赖的方式抑制BEL-7402细胞生长，并诱导细胞凋亡，EGCG对人肝癌细胞BEL-7402细 胞的抑制作用较ECG强(黄莉霞，2013)。公开号为CN1732917A的发明专利公开了一种含 EGCG、ECG、EGC、EC、TFG的抗肿瘤茶叶活性单体组合物，其抗癌活性比单体好。该组合物是 茶叶的水提取物或醇提取物的中未经纯化的混合物提取物，按其公开的组合份量组配。专 利公开号为CN1757408A的发明专利申请公开了一种防治癌症和肿瘤的绿茶药物及其制备 方法与应用，其原料由绿茶茶粉(绿茶为云南大叶、金萱、黄金桂、英红九号中的一种或几种 的混合物)、绿茶提取物和分离的单体EGCG、ECG、EGC、EC、TFC等调配而成，对癌细胞的作用 能力比单体EGCG强。但以上专利提到的儿茶素单体纯合物均需从茶叶原料中提取纯化再 重新配比组合，工艺复杂，价格昂贵，化学方法提取纯化的单体可能存在少量化学残留，大 大限制了这些组合物在抗癌方面的应用，而且上述专利的实施例都是体外细胞实验，与体 内的抗癌效果存在差异。
[0004] 咖啡因（caffeine, 1，3, 7-trimethyixanthine)同属茶叶中重要的功能性成分， 具有提神醒脑、抗氧化、抗癌、抗肥胖、抗菌、抗忧郁、止痛以及利尿等作用。咖啡因能促进 UVB辐射诱导人永生化表皮细胞系（HaCaT细胞）细胞凋亡，以确保不可逆损伤细胞和潜 在癌细胞的清除功能(雷霞，2011)。韩国专家李昌隽在《CancerResearch》发表论文指出 从普通咖啡和绿茶中提取的咖啡因可以有选择地阻止三磷酸肌醇受体活动，从而抑制神经 胶质细胞肿瘤生长(李昌隽，2011)。咖啡因是近年来发现的肿瘤化疗增强剂，可强化抗癌 药杀死细胞的作用，与化疗物质顺铂(万双林，2003)、紫杉醇(孙超，2009)、氨甲喋呤(孙刚， 2008)和苯巴比妥(王艳萍，2001)等有很好的协同作用。
[0005] 韩驰（1989)等公开了海南红茶、海南绿茶、福建花茶、福建铁观音和杭州绿茶这 5种茶类对甲基苄基亚硝胺（NMBzA)致大鼠食道肿瘤的影响，发现各饮茶组饮茶量一致 时，各种茶叶之间的抑瘤效果不同，以福建铁观音和福建花茶效果最好，而海南红茶和绿茶 较差，并提出"似乎同一产地的茶作用相似"、"与茶叶的生长环境关系较为密切"。马丽英 (1993)等公开了杭州炒青(茶多酚含量18. 47%)、福建花茶(茶多酚21. 71%)及福建铁观音 (茶多酚10. 90%) 3种茶类具有一定的抗氧化性，福建花茶的茶多酚含量高，抗氧化作用较 强。实际上，福建花茶成分复杂，能做花茶的茶树品种比较多，可窨茶的花源也不尽相同，可 能是茉莉花、也可能是其他茶用香花。以上研宄没有指明具体的茶树品种，也没有具体的活 性成分及类型和数量。罗一帆（2006)等用不同品种茶叶对体外癌细胞的抗癌活性进行了 研宄，结果表明，在控制茶多酚用量一致的条件下，其各种儿茶素的含量却不同，4个品种茶 叶的超氧阴离子自由基（〇_ 2)的清除率（SCR)、诱导凋亡效应和对癌细胞增殖与生长的抑制 能力的大小为英红九号〉云大〉小叶〉台茶，说明茶叶品种不同，其化学成分、儿茶素的组 成与配比差异较大，这是决定其抗癌作用的物质基础。但未见指出具体成分及其配比，该研 宄是体外癌细胞实验的结果，未见体内试验结果。
[0006] 另外，现有专利中茶叶大都以中药制剂成分中的一种用于治疗癌症。如公开号为 CN1158698A的中国发明专利涉及一种包括茶叶和枸杞、金银花、茉莉、菊花、红花、甘草及人 参等的保健茶。
[0007] 茶叶抗肿瘤涉及体外抗肿瘤和体内抗肿瘤两方面。体外抗肿瘤研宄是茶水与培 养基共培养癌细胞，茶水与靶细胞直接接触，再检测其抗肿瘤作用，该环境与体内有较大差 异；动物体内的抗肿瘤研宄是茶水经动物饮用后经若干代谢途径才能到达靶器官而起到杀 死癌细胞或诱导癌细胞凋亡作用，所以本发明采用体外方法先初筛，再进行体内试验，以体 内抗肿瘤效果为主要依据。
[0008] 综上所述，国内外未见能在体外和动物体内高效抑制肿瘤的茶树良种（优良种 质、优良品系、优良品种）的选育方法及其茶叶中必须含有的活性成分的种类及其数量的专 利和公开资料。
【发明内容】
[0009] 本发明在于提供一种抑瘤功能茶树良种的选育方法。
[0010] 本发明采取的技术方案如下： 本发明的一种抑瘤功能茶树良种的选育方法，采用地理远缘杂交，杂交后代测定茶树 鲜叶干物重中生物活性成分的含量，筛选具备茶树基本活性成分含量的基础上，总儿茶素 含量彡22%，其中EGCG含量彡12%，儿茶素C含量彡2%，ECG含量彡3. 5% ;咖啡因含量彡4. 5% 的种质，即为抑瘤功能茶树良种。
[0011] 所述选育方法具体包括以下步骤： 1) 选择海拔300米以下，相对湿度达90%以上的茶园，所述茶园比普通茶园每年每公顷 增施硫酸钾550-650Kg、过磷酸钙300-400Kg以及绿肥钝叶决明（Ckssia ) 鲜茎叶8500-9500Kg ; 2) 引进、种植茶多酚含量占茶叶干重25%以上的地理远缘品种及其杂交后代的株系 (如：Z5T南 公弄茶、亥公茶、冰岛大叶茶、励库大叶茶、75T抗10号、宝红茶；福建 八 仙、梅占、迎春、春兰、1005、0(：-1、111^-2、1^(：-3;湖北--鄂茶5号；湖南--湘红茶1号； 广东一一乐昌白毛尖、红茵、英红九号；广西一一横县小叶种；海南一一海南大叶茶等)，并 测定以下五个指标：总儿茶素含量彡22%、EGCG含量彡12%、儿茶素C含量彡2%、ECG含量 彡3. 5%、咖啡因含量彡4. 5%，从中筛选出至少达到以上1个指标且父母本指标互补的品种 或品系作为地理远缘杂交制种亲本，其中母本达到的指标数多父本达到的指标数，父本母 本毗邻种植，采用人工授粉或蜜蜂传粉，进行简单杂交或多父本杂交； 4) 茶果成熟后播种育苗，待苗高20-30cm去除顶芽，在11月份至翌年2月份时将植株 高达35cm以上的苗木按品种逐一单株移栽定植； 5) 茶苗科学栽培三年后逐季、逐一单株测定其茶树鲜叶干物重中生物活性成分的含 量，在具备茶树基本活性成分含量的基础上，总儿茶素含量多22%，其中EGCG含量多12%，儿 茶素C含量彡2%，ECG含量彡3. 5% ;咖啡因含量彡4. 5% ;按以上指标连续测定三年，若同一 单株同一茶季连续三年都达到以上指标，则该单株立即扦插育苗、繁殖，即为抑瘤功能茶树 良种。
[0012] 在儿茶素单体中EGCG抗癌活性最强(李伟，2006) ;ECG不仅可抑制多种化学致癌 物诱致的突变，还能够抑制一些混合致癌物的致突变作用；C可以通过血液循环进入全身； 咖啡因具有抗氧化、抗肿瘤的功能，可以增强抗癌药物杀死癌细胞的功能。该抑瘤功能茶叶 的儿茶素总量，特别是其中EGCG、ECG、C的含量以及咖啡因的含量都显著高于普通茶叶，以 上各天然活性成分配比科学，形成协同高效的抗肿瘤功能。
[0013] 本发明还保护了由所述的选育方法得到的抑瘤功能茶，其中所述抑瘤功能茶由所 述抑瘤功能茶树良种在生物活性成分的含量达到指标的茶季按一芽一心标准采摘，并进行 杀青、烘干，得到抑瘤功能茶。
[0014] 以及，所述的抑瘤功能茶在制备抗肿瘤药物或保健品中的应用。优选地，所述肿瘤 包括肝癌、卵巢癌、宫颈癌、肺癌、脑