一种用于良种选育的检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种用于良种选育的检测方法，根据GenBank数据库获得人和小鼠TLR2基因序列，用DNA分析软件对人和小鼠TLR2核苷酸序列进行排序，根据同源域保守区设计引物；用这对引物扩增对待检测的猪模版cDNA进行PCR扩增，对PCR的扩增产物进行分离、纯化，用 DNA分析软件对扩增 T LR2 核苷酸序列进行分析。本发明所提供的一种用于良种选育的检测方法，利用PCR技术进行猪的免疫相关基因TLR2的基因突变检测，为使用基因手段进行良种猪选育提供基础。
【专利说明】
-种用于良种选育的检测方法
技术领域
[0001] 本发明设及一种用于良种选育的检测方法，属于基因选种技术领域。
【背景技术】
[0002] 在食用猪养殖中，为了避免因为猪感染各类疾病造成的损失，人民往往通过使用 抗生素等手段来控制发病，但猪肉中的抗生素残留会导致人食用后引发过敏反应(变态反 应)和中毒现象，或使机体产生耐药性；同时过量使用抗菌素会使猪本身的敏感菌产生耐药 性，使药效下降;药物残留还有致崎作用、致突变作用、致癌作用和激素(样)作用;兽药及其 代谢产物通过粪便、尿等进入环境，被动植物富集，然后进入食物链，同样危害人类健康;兽 药残留严重影响畜禽产品出口贸易。
[0003] 因此通过遗传手段来选取本身抗病力较好的种猪，从而提高猪机体自身抗病力， 使猪少发病，而达到控制疾病，是一种更好的解决方式。在与免疫力相关的基因中，Toll样 受体(Toll-like receptors,化R)是参与非特异性免疫(天然免疫）的一类重要蛋白质分 子，也是连接非特异性免疫和特异性免疫的桥梁。TLR是单个的跨膜非催化性蛋白质，可W 识别来源于微生物的具有保守结构的分子。当微生物突破机体的物理屏障，如皮肤、粘膜等 时，TLR可W识别它们并激活机体产生免疫细胞应答，TLR有多种亚型，如化R2、TLR4等，TLR2 能识别各种细菌病原体的脂蛋白，包括革兰阴性菌、革兰阳性菌、分支杆菌、螺旋菌等病 原体的脂蛋白。目前的现有研究中针对猪TLR4基因检测的研究较多，但对TLR2的检测尚未 设及。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷，提供一种用于良种选育的检 测方法，运一方法可通过筛选出TLR2基因变异的猪种，为繁育抗病力更高的猪种提供参考。
[0005] 为解决上述技术问题，本发明提供一种用于良种选育的检测方法，包括W下步骤： 一、 根据GenBank数据库获得人和小鼠化R2基因序列，用DNA分析软件对人和小鼠化R2 核巧酸序列进行排序，根据同源域保守区设计引物； 正义引物：5' -CGACGTTGACTGAGGTTACC -3' 反义引物：5' -CATGCTGATCGCTGTGAATCT -3' 用运对引物扩增对待检测的猪模版CDNA进行PCR扩增； 二、 对PCR的扩增产物进行分离、纯化； S、用DNA分析软件对扩增T LR2核巧酸序列进行分析。
[0006] 所述PCR的反应体积为2扣L，内含lXPCRBuffer，MgCl20.5mmol/L，dNTP 0.4mmol/L,上游引物和下游引物0.1祉mol/L,模板DNA 30iig;PCR的反应条件为预变性 94°C4min; 94°C40s，58°C40s，72°C50s，共40个循环；72°C 延伸7min。
[0007] 所述扩增DNA序列的长度为278bp。
[000引所述猪模版CDNA的提取方法为标准蛋白酶K酪/氯仿DNA提取方法。
[0009] 所述DNA分析软件为DNA S化r。
[0010] 所述猪模版cDNA的提取来源可W为血液或组织。
[00川本发明所达到的有益效果:本发明根据GenBank数据库获得人和小鼠化R2基因序 列设计引物，对不同品种的猪化R2基因编码区进行PCR扩增，W寻找件及突变位点，为分析 突变位点与抗病性之间的关系提供基础，更进一步根据检测结果，可W为筛选出抗病力较 强的猪种提供参考及依据。
[0012] 因此，本发明所提供的一种用于良种选育的检测方法，利用PCR技术进行猪的免疫 相关基因 TLR2的基因突变检测，为使用基因手段进行良种猪选育提供基础。
【具体实施方式】
[0013] 下面对本发明作进一步描述。W下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方 案，而不能W此来限制本发明的保护范围。
[0014] -种用于良种选育的检测方法，包括W下步骤： 一、 根据GenBank数据库获得人和小鼠化R2基因序列，用DNA分析软件对人和小鼠化R2 核巧酸序列进行排序，根据同源域保守区设计引物； 正义引物：5' -CGACGTTGACTGAGGTTACC -3' 反义引物：5' -CATGCTGATCGCTGTGAATCT -3' 用运对引物扩增对待检测的猪模版CDNA进行PCR扩增； 二、 对PCR的扩增产物进行分离、纯化； S、用DNA分析软件对扩增T LR2核巧酸序列进行分析。
[0015] 所述PCR的反应体积为2扣L，内含lXPCRBuffer，MgCl20.5mmol/L，dNTP 0.4mmol/L,上游引物和下游引物0.1祉mol/L,模板DNA 30iig;PCR的反应条件为预变性 94°C4min; 94°C40s，58°C40s，72°C50s，共40个循环；72°C 延伸7min。
[0016] 所述扩增DNA序列的长度为278bp。
[0017] 所述猪模版cDNA的提取方法为标准蛋白酶K酪/氯仿DNA提取方法。
[001引所述DNA分析软件为DNA S化r。
[0019] 所述猪模版cDNA的提取来源可W为血液或组织。
[0020] 本发明所达到的有益效果:本发明根据GenBank数据库获得人和小鼠化R2基因序 列设计引物，对不同品种的猪化R2基因编码区进行PCR扩增，W寻找件及突变位点，为分析 突变位点与抗病性之间的关系提供基础，更进一步根据检测结果，可W为筛选出抗病力较 强的猪种提供参考及依据。
[0021] W上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人 员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可W做出若干改进和变形，运些改进和变形 也应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种用于良种选育的检测方法，其特征在于，包括以下步骤： 一、 根据GenBank数据库获得人和小鼠 TLR2基因序列，用DNA分析软件对人和小鼠 TLR2 核苷酸序列进行排序，根据同源域保守区设计引物； 正义引物：5' -CGACGTTGACTGAGGTTACC -3' 反义引物：5 ' -CATGCTGATCGCTGTGAATCT -3 ' 用这对引物扩增对待检测的猪模版cDNA进行PCR扩增； 二、 对PCR的扩增产物进行分离、纯化； 三、 用DNA分析软件对扩增T LR2核苷酸序列进行分析。2. 根据权利要求1所述的一种用于良种选育的检测方法，其特征在于，所述PCR的反应 体积为25yL，内含 1XPCR Buffer, MgCl2〇.5mmol/L, dNTP 0.4mmol/L，上游引物和下游 引物 0.18ymol/L，模板DNA 30yg;PCR的反应条件为预变性94°C4min; 94°C40s，58°C 40s，72°C50s，共40个循环；72°C 延伸7min。3. 根据权利要求1所述的一种用于良种选育的检测方法，其特征在于，所述扩增DNA序 列的长度为278bp。4. 根据权利要求1所述的一种用于良种选育的检测方法，其特征在于，所述猪模版cDNA 的提取方法为标准蛋白酶K酚/氯仿DNA提取方法。5. 根据权利要求1所述的一种用于良种选育的检测方法，其特征在于，所述DNA分析软 件为DNA star。6. 根据权利要求4所述的一种用于良种选育的检测方法，其特征在于，所述猪模版cDNA 的提取来源可以为血液或组织。
【文档编号】C12Q1/68GK105861717SQ201610363069
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年5月27日
【发明人】宋阳
【申请人】苏州铭冠软件科技有限公司