一种微生物组合杀虫剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种微生物杀虫剂，尤其涉及一种微生物组合杀虫剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 二十世纪以来世界人口增长较快，对食物的需求总量要求也越来越大。人们发明 的"石油化学农业"，化肥和农药帮助人类获取了大量食物资源，促进了人类的发展和进步。
[0003] 目前，全世界有75亿人口，2050年后将达到90亿，本世纪末接近105亿人口的顶 峰。所以人类对食品的要求会大幅度增加。人类对"石油农业"的依靠也在不断加强。
[0004] 据世界权威部门统计，目前全世界人工合成的化学物质有1100多万种，近年来还 以每年增加100万种及3~4亿吨的数量不断增长。造成具有大量有毒的物质和有害物 质危害着全球的环境、海洋和空气，化学有毒物质的广谱特点和化学品复合化技术发展，也 增加了清除、降解、分解的难度，成为人类长期有害环境污染灾难的原头。我国现有农药厂 1700多家，每年生产约35万吨原药，加工制剂80~100万吨，农药有效成分品种40多个， 产品约7000多个，而且还进口大量的国外已不再使用的剧毒农药，施入国内土地。大量的 农药生产出来，在为人类利用的同时，又在毒害着人类自己。特别是大部分农药是具有内吸 性的毒素农药，毒性被直接吸收到农作物茎、叶、根的组织细胞内，并进入果实、种子内部， 造成毒害的长久性、顽固性非常警人。
[0005] 农药的使用与环境保护的关系，许多科学家都在激烈地辩论着关于现实和潜在的 损害问题，但有一个事实是显而易见的，即使是按推荐使用量使用，有些农药，特别是杀虫 剂，在使用后确实能存留相当长的时间而构成了对土壤和水体的污染。在某些实例中，虽然 使用浓度不大，但也是一个严重的威胁。例如，鹌鹑每日定量的食物中有lmg/kg的艾氏剂 也能导致100%的死亡。
[0006] 半个世纪以来，人们对化学合成农药的使用已习以为常，并由此带来了众所周知 的难题：食品、土壤、地下水、江河湖泊、海洋、空气都受到了化学残留的严重污染，同时对非 靶标昆虫和其他生物产生了副作用，导致生态系统的破坏。对化学农药产生抗性和复苏能 力的昆虫品种和数量不断增加。此外，由于合成剧毒农药的使用和处理不当，许多非致死事 件颇颇发生。
[0007] 鉴于许多化学合成农药会产生诸多的副作用，许多发达和发展中国家都不断意识 到化学合成农药所造成的环境污染和某些毒理效应的危害。由此，微生物和天然植物在发 展新型农药方面，已逐渐成为人们关注的重要角色。
[0008]由于以上种种原因，化学有毒物质，农药残留毒素对人类生存环境造成极大影响， 所以本发明涉及利用微生物来杀死害虫，代替化学农药，对人畜无毒无害，不破坏环境，是 一种安全的生物方法。
【发明内容】
[0009] 本发明所要解决的技术问题是提供一种微生物组合杀虫剂及其制备方法，克服了 现有技术的问题，具有能毒杀不同的昆虫和昆虫种类的特性，对金龟子、蚊虫、线虫、鳞翅 目，鞘翅目和膜翅目等几百种害虫具有毒杀作用强、速度快、范围广和毒杀彻底的优点。
[0010] 本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：
[0011] -种微生物组合杀虫剂，是由选自真菌、放线菌和/或细菌的2类或3类菌种制备 成的浓缩菌团制剂；所述重量份组分比例是：真菌40-60、放线菌15-25、和/或细菌20-40; 所述重量份组分比例优选是：真菌50、放线菌20、和/或细菌30。
[0012] 所述菌类，分别选自以下之2种或2种以上菌种：
[0013]真菌：（l)metarhiziumaunisopliae(metschn)sorok金龟子缘僵ACCC-30101 - 中国农业科学院土肥所一中国科学院微生物研究所AS3. 3675 -陕西楡林地区治沙 所，从白杨透翅蛾幼虫上分离；用于防玉米螟、金龟子、透翅蛾等。（2)PaeCil〇myceS farinosus(Dicks.)Brown粉拟青霉ACCC-30190 -中国农业科学院土肥所一北京林业大学 武觐文赠送；原始编号：8601，防治油松毛虫。
[0014] (3Paecilomyces lilacinus (Thom) Samson淡紫色拟青霉ACCC-30677-云南省烟 草科学研究院祝明亮赠；原始编号：ZML086 ;采集地：云南；分离源：根结线虫卵；用作生物 防治研究。
[0015]
[0016] 放线菌：
[0017] (1)Streptomycesanulatus(Beijingrinckl912)wdksmanl953 园环圈链霉菌 ACCC-41456 -湖北省生物农药工程研究中心；原始编号：HBERC00797 ;代谢产物具有杀虫 活性；分离源：土壤；分离地点：河南卢氏五里川。
[0018] (2) "Streptomyces culicidicuslan et al?灭蚊链霉菌ACCC-41132-广东省 广州微生物研究所一上海植生所；原始编号：G頂4. 12MIK4. 1 ;杀蚊虫幼虫；分离源：土壤； 分离地点：广州。
[0019] (3)StreptomycesgriseolussubsphangzhouensisACCC-40075-浙江农业科学 院；原始编号：S26;产杀蚜素，对蚜虫、红蜘蛛及某些鳞翅目幼虫毒杀作用很强。
[0020](4) Streptomyces calvus Backus et al.，1957秀裸链霉菌ACCC-41451-湖北 省生物农药工程研究中心；原始编号：HBERC00743 ;代谢产物具有杀虫活性；分离源：土壤； 分离地点：浙江龙游。
[0021]
[0022] 细菌：
[0023] (l)Bacillussubtilis(Enrenbergl835)cohnl872 枯草芽抱杆菌ACCC-11088 - 中国科学院微生物研究所；AS1. 0933;防治花生线虫病。
[0024](2) Bacillus Sphaericus meyer and Neidel904球形芽抱杆菌ACCC-11096-中 国科学院微生物研究所一美国；=AS1. 1672 ;原始编号：2115 ;杀蚊子。
[0025](3)Bacillus laterosporus Laubach侧抱芽抱杆菌ACCC-11079-中国农科院土 肥所一中国科学院微生物所AS1. 0864 ;能杀死蚊子幼虫；产溶菌酶。
[0026](4)Bacillus thuringienis subsp. Aisawai ACCC-10016-武汉微生物农药厂； 原始编号：〇96 ;制备抗原标准菌株，毒杀鳞翅目昆虫。
[0027] (5)Bacillusthuringienissubsp.merrisoniACCC-10031 -武汉微生物农药 厂；原始编号：〇12;毒杀鳞翅目昆虫。
[0028] (6)Bacillusthuringiensissubsp.galleriae苏云金杆菌錯螺亚种 ACCC-10027 -中国科学院微生物所；毒杀菜青虫。
[0029] (7)Bacillusthuringiensissubsp.Israelensis苏云金杆菌以色列亚种 ACCC-10038 -成都华宏实业公司一山东泰安生物研究所一世界卫生组织（WHO);杀灭蚊子 幼虫、I子效果较好。
[0030] (8)Bacillusthuringienissubsp.thuringienisACCC-10035 -中国农业科学 院土壤肥料研究所；原始编号：D25;抗噬菌体毒杀玉米螟；分离源：从HD-187菌株中自然 选育而得。
[0031] (9)Bacillusthuringiensissuhsp.berliner苏云金杆菌柏氏变种 ACCC-10022 -中国农业科学院土壤肥料研究所；原始编号：D26 ;防治鳞翅目昆虫；分离源： 菌粉。
[0032] (10)Bacillusthuringiensissubsp.Dendrolimus苏云金杆菌松蜀亚种 ACCC-10062 -苏联；毒杀松毛虫。
[0033] (ll)Bacillusthuringienissubsp.sottoACCC-10033 -武汉微生物农药厂- 英国；原始编号：〇16 ;制备抗原标准菌株，毒杀鳞翅目昆虫。
[0034] 所选取的每类菌种的每个菌种培养纯液之间按照（0.5-1. 5) : (0.5-1. 5)比例混 合。
[0035] 所选取的每类菌种的每个菌种培养纯液之间按照1:1比例混合。
[0036] 所述制剂为每20亿/毫升高浓度产品，并进一步得到液体产品和固体产品。
[0037] 本发明还提供了所述微生物组合杀虫剂的制备方法，包括以下步骤：
[0038] (1)将各种菌种分别常规培养为菌种培养纯液：
[0039] (2)菌液的扩大培养：将每类真菌、放线菌和/或细菌的每个菌种培养纯液之间按 照所述比例进行混合制成每类混合菌液；再将所述每类混合菌按所述重量份组分比例进行 混合；培养液培养，发酵得到成品制剂。
[0040] 所述步骤（2)是将混合菌液与培养液按1 : (8-10)的比例培养，所述培养液配料 组分重量份比例为：黄豆粉1-1. 5,糊精0. 3-0. 9,蛋白胨0. 2-0. 4,磷酸氢二钾0. 1-0. 3,碳 酸钙 0? 3-0. 7,硫酸镁 0? 2-0. 6,硫酸铵 0? 03-0. 07,豆油 0? 1-0. 3;PH值为 7. 2。
[0041] 优选所述混合菌液与培养液按1 : 9的比例培养，所述培养液配料组分重量份比 例为：黄豆粉1. 2,糊精0. 6,蛋白胨0. 3,磷酸氢二钾0. 2,碳酸钙0. 5,硫酸镁0. 4,硫酸铵 〇? 05,豆油 0? 2。
[0042] 所述混合菌液加入经过净化后的培养基液内；放入种子罐内，在温度3〇°c±rc 下，每小时搅拌200次，培养36-48小时；镜检每克含菌量达到20亿/克时，停止培养，检 查无杂菌即为合格种子菌液。将合格的菌液按5%的比例，加入发酵罐内培养基液，培养 30-45小时，经检查无杂菌，菌液明显成芽孢和晶体，含量达20亿/克，即可为成品发酵物。
[0043] 所述方法还包括步骤（3)固体菌剂的制备：在成品菌液中加入8-10%的碳酸钙， 搅拌30分钟；板框过滤；搅拌30分钟，调成浆状；喷雾干燥；粉碎混合均匀，即得。
[0044] 本发明首先是构建杀虫剂菌株体系，其中球形芽胞杆菌Bacillus sphaericus TS-1与苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis H4是两种重要的昆虫病原菌，前者对淡 色库蚊的毒性与国外159