一种微生物组合杀虫剂及其制备方法_4

文档序号:9356628阅读:来源:国知局
: 1.5的比例进行混合,即 真菌、放线菌分别制得同类菌混合液;再按这混合液真菌60、放线菌20的重量份比例进行 混合;将混合菌液l〇kg加入100kg经过净化后培养基液内,培养基液配料重量份比例为黄 豆粉1. 5,糊精0. 9,蛋白胨0. 4,磷酸氢二钾0. 3,碳酸钙0. 7,硫酸镁0. 6,硫酸铵0. 07,豆油 〇. 3,PH值为7. 2的配养液内;放入种子罐内,在温度30°C下,每小时搅拌200次,培养48小 时;镜检每克含菌量达到20亿/克时,停止培养,检查无杂菌即为合格种子菌液。将合格的 菌液按6%的比例,加入发酵罐内,发酵罐内培养基液如上文所述;培养45小时,经检查无 杂菌,菌液明显成芽孢和晶体,含量达20亿/克,即可为成品发酵物。
[0096] 第三步:进一步制备固体菌剂:首先取上述成品发酵物菌液按重量加入10%的碳 酸钙,搅拌30分钟;通过板框过滤;搅拌30分钟、调成浆状;再打上高位槽,进行喷雾干燥; 喷雾干燥后的菌粉经粉碎混合均匀,取样检查合格;及时用塑料袋包装密封;放入阴凉干 燥库房保存。
[0097] 实施例4
[0098] 制备微生物组合杀虫剂(单位kg):
[0099] 第一步:菌种培养:按照菌种的名称和编号,由中国微生物保藏委员会农业微生 物中心购回三大类砂土管菌种;三类微生物为真菌、放线菌和细菌。
[0100]真菌有2个,分别为:Paecilomyces farinosus (Dicks.)Brown粉拟青霉 ACCC-30190-中国农业科学院土肥所一北京林业大学武觐文赠送;原始编号:8601,防治 油松毛虫。Paecilomyces lilacinus (Thom) Samson淡紫色拟青霉ACCC-30677-云南省烟 草科学研究院祝明亮赠;原始编号:ZML086;采集地:云南;分离源:根结线虫卵;用作生物 防治研究。
[0101] 放线菌 4 个,分别为:(1)Streptomycesanulatus(Beijingrinckl912) wdksmanl953园环圈链霉菌ACCC-41456 -湖北省生物农药工程研究中心;原始编 号:HBERC00797 ;代谢产物具有杀虫活性;分离源:土壤;分离地点:河南卢氏五里川。 (2)"Streptomycesculicidicus"Yanetal?灭蚊链霉ACCC-41132-广东省广州微生 物研究所一上海植生所;原始编号:G頂4. 12MIK4. 1 ;杀蚊虫幼虫;分离源:土壤;分离地 点:广州。(3)StreptomycesgriseolussubsphangzhouensisACCC-40075 一浙江农业 科学院;原始编号:S26 ;产杀蚜素,对蚜虫、红蜘蛛及某些鳞翅目幼虫毒杀作用很强。(4) StreptomycescalvusBackusetal.,1957 秀裸链霉菌ACCC-41451-湖北省生物农药工 程研究中心;原始编号:HBERC00743 ;代谢产物具有杀虫活性;分离源:土壤;分离地点:浙 江龙游。
[0102] 细菌 8 个,分别为:(1)Bacillussubtilis(Enrenbergl835)cohnl872 枯草芽 孢杆菌ACCC-11088 -中国科学院微生物研究所;AS1. 0933 ; (2)BacillusSphaericus meyerandNeidel904球形芽抱杆菌ACCC-11096 -中国科学院微生物研究所一美 国;=AS1. 1672 ;原始编号:2115 ; (3)BacilluslaterosporusLaubach侧抱芽抱杆 菌ACCC-11079 -中国农科院土肥所一中国科学院微生物所AS1.0864 ;(4)Bacillus thuringienissubsp.AisawaiACCC-10016-武汉微生物农药厂;原始编号:096;(5) Bacillusthuringienissubsp.merrisoniACCC-10031 -武汉微生物农药厂;原始编号: 012 ; (6)Bacillusthuringiensissubsp.galleriae苏云金杆菌錯螺亚种ACCC-10027 - 中国科学院微生物所;(7)Bacillusthuringiensissubsp.Israelensis苏云金杆菌以色 列亚种ACCC-10038 -成都华宏实业公司一山东泰安生物研究所一世界卫生组织(WHO); (8)Bacillusthuringienissubsp.thuringienisACCC-10035 -中国农业科学院土壤肥 料研究所;原始编号:D25 ;
[0103] 在无菌条件下将这些砂土管菌种分别移接到装有牛肉膏、蛋白胨琼脂培养基的斜 面试管里;观察其纯度、无噬菌斑、无杂菌、涂片镜检有95 %以上形态正常;将纯度良好的 正常菌种进行单菌体液体摇床培养;按要求数量扩大摇床设施规模或重复置备一次,满足 下一步培养的要求。
[0104] 第二步:菌液的扩大培养:首先将菌液同类分别按1 : 1的比例进行混合,即真 菌、放线菌、细菌类分别制得同类菌混合液;再按这三大类型混合液真菌60、放线菌25、细 菌40的重量份比例进行混合.将混合菌液10kg加入90kg经过净化后培养基液内,培养基 液配料重量份比例为黄豆粉1. 2,糊精0. 6,蛋白胨0. 3,磷酸氢二钾0. 2,碳酸钙0. 5,硫酸 镁〇. 4,硫酸铵0. 05,豆油0. 2,PH值为7. 2的配养液内;放入种子罐内,在温度30°C±1°C 下,每小时搅拌200次,培养36小时;镜检每克含菌量达到20亿/克时,停止培养,检查无 杂菌即为合格种子菌液。将合格的菌液按5 %的比例,加入发酵罐内,发酵罐内培养基液如 上文所述;培养45小时,经检查无杂菌,菌液明显成芽孢和晶体,含量达20亿/克,即可为 成品发酵物。
[0105] 第三步:进一步制备固体菌剂:首先取上述成品发酵物菌液,按重量加入9%的碳 酸钙,搅拌30分钟;通过板框过滤;搅拌30分钟、调成浆状;再打上高位槽,进行喷雾干燥; 喷雾干燥后的菌粉经粉碎混合均匀,取样检查合格;及时用塑料袋包装密封;放入阴凉干 燥库房保存。真菌40-60、放线菌15-25、和/或细菌20-40;
[0106] 实施例5
[0107] 制备微生物组合杀虫剂(单位kg):
[0108] 第一步:菌种培养:按照菌种的名称和编号,由中国微生物保藏委员会农业微生 物中心购回放线菌和细菌菌种;
[0109] 放线菌 3 个,分别为:(1)"Streptomycesculicidicus"Yanetal?灭蚊链霉菌 ACCC-41132 -广东省广州微生物研究所一上海植生所;原始编号:G頂4. 12MIK4. 1 ;杀蚊虫 幼虫;分离源:土壤;分离地点:广州。(2)Streptomycesgriseolussubsphangzhouensis ACCC-40075 -浙江农业科学院;原始编号:S26 ;产杀蚜素,对蚜虫、红蜘蛛及某些鳞翅 目幼虫毒杀作用很强。(3)StreptomycescalVusBackusetal.,1957秀裸链霉菌 ACCC-41451 -湖北省生物农药工程研究中心;原始编号:HBERC00743 ;代谢产物具有杀虫 活性;分离源:土壤;分离地点:浙江龙游。
[0110] 细菌 6 个,分别为:(1)Bacillusthuringienissubsp.merrisoniACCC- 10031 -武汉微生物农药厂;原始编号:012 ;毒杀鳞翅目昆虫。(2)Bacillus thuringiensissubsp.galleriae苏云金杆菌錯螺亚种ACCC-10027 -中国科学院微生物 所;毒杀菜青虫。(3)Bacillusthuringiensissubsp.Israelensis苏云金杆菌以色列亚种 ACCC-10038 -成都华宏实业公司一山东泰安生物研究所一世界卫生组织(WHO);杀灭蚊子 幼虫、效果较好。(4)Bacillusthuringienissubsp.thuringienisACCC-10035 -中 国农业科学院土壤肥料研究所;原始编号:D25 ;抗噬菌体毒杀玉米螟;分离源:从HD-187 菌株中自然选育而得。(5)Bacillusthuringiensissuhsp.berliner苏云金杆菌柏氏 变种ACCC-10022 -中国农业科学院土壤肥料研究所;原始编号:D26 ;防治鳞翅目昆虫; 分离源:菌粉。(6)Bacillusthuringiensissubsp.Dendrolimus苏云金杆菌松蜀亚种 ACCC-10062 -苏联;毒杀松毛虫。
[0111] 制备方法同实施例1。不同在于:第二步:菌液的扩大培养:首先将菌种同类纯液 分别按1 : 1的比例进行混合,即放线菌、细菌类分别制得混合液;再按这三大类型混合液 放线菌20、细菌30的重量份比例进行混合。
[0112] 实施例6
[0113] 制备微生物组合杀虫剂(单位kg):
[0114] 第一步:菌种培养:按照菌种的名称和编号,由中国微生物保藏委员会农业微生 物中心购回真菌、细菌菌种;
[0115]真菌有 3 个,分别为:(l)metarhiziumaunisopliae(metschn)sorok金龟子缘僵 菌ACCC--30101 -中国农业科学院土肥所一中国科学院微生物研究所AS3. 3675 -陕西 楡林地区治沙所,从白杨透翅蛾幼虫上分离;用于防玉米螟、金龟子、透翅蛾等。
[0116] (2) Paecilomyces farinosus (Dicks.)Brown粉拟青霉ACCC-30190 -中 国农业科学院土肥所一北京林业大学武觐文赠送;原始编号:8601,防治油松毛虫。(3) Paecilomyces lilacinus (Thom) Samson淡紫色拟青霉ACCC-30677 -云南省烟草科学 研究院祝明亮赠;原始编号:ZML086 ;采集地:云南;分离源:根结线虫卵;用作生物防治研 究。
[0117] 细菌 11 个,分别为:(l)Bacillussubtilis(Enrenbergl835)cohnl872 枯草芽抱 杆菌ACCC-11088 -中国科学院微生物研究所;AS1. 0933 ;防治花生线虫病。(2)Bacillus SphaericusmeyerandNeidel904球形芽抱杆菌ACCC-11096 -中国科学院微生物研究所 -美国;=AS1. 1672 ;原始编号:2115 ;杀蚊子。(3)BacilluslaterosporusLaubach侧抱 芽孢杆菌ACCC-11079 -中国农科院土肥所一中国科学院微生物所AS1. 0864 ;能杀死蚊子 幼虫;产溶菌酶。(4)Bacillusthuringienissubsp.AisawaiACCC-10016-武汉微生物 农药厂;原始编号:〇96;
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