待苗抽出新芽、新叶、新根后即可移栽大田，移栽地为云南省德宏热带农业科学研究所新建大棚内，移栽成活率在95%以上。
[0030]以上三种培养基PH值均为5.8?6.0，均含白糖25g/L，琼脂4.8g/L，土豆泥为新鲜土豆去皮切丝煮20min后用果汁机打碎成泥，香蕉泥为新鲜香蕉去皮煮20min用果汁机打碎成泥，西瓜汁为新鲜西瓜削去青色外皮把白色的皮和瓤一起煮20min后用果汁机打成汁。
[0031]实施例2:
[0032]喇叭唇石斛的无激素组织培养
[0033](1)采自云南省德宏热带农业科学研究所石斛种质资源圃成熟未开裂的喇叭唇石斛蒴果，常规消毒后，将种子均匀地播在3/4MS培养基+ 土豆泥50g/L培养基上，培养条件:培养温度23?26°C，先暗培养12d，再光照培养，每天光照10d，光照强度1500?30001x。
[0034]在上述培养过程中，种子培养15d后慢慢转绿，25d后种胚开始膨大，逐渐形成绿色的原球茎，之后原球茎不断增加，重叠堆积在培养基上。
[0035](2)将绿色原球茎转入3/4MS培养基+ 土豆泥120g/L+香蕉泥40g/L培养基中培养，培养条件:培养温度23?26°C，每天光照10h，光照强度1500?30001x。
[0036]上述条件培养中，原球茎不断增值、分化，18d后开始有分化苗出现，40d后，90%以上的分化苗长成2?3cm的幼苗，叶片大于2片，颜色正常，开始有微量根系长出，根长0.5 ?1.0cm。
[0037](3)将原球茎分化出的高2cm以上的幼苗转入1/2MS培养基+ 土豆泥100g/L+香蕉泥30g/L+西瓜汁20g/L+活性炭0.4g/L培养基中培养，培养条件:培养温度25?28°C，每天光照10h，光照强度2000?30001x。
[0038]上述条件培养55d后，95%以上的幼苗生成5cm以上的大苗，且叶色浓绿，根系发达，有6?10条长3cm以上粗壮根。
[0039](4)无菌苗的炼苗及移栽
[0040]炼苗:当瓶内80%以上的苗长至株高5?8cm，有5?8条长3cm以上粗壮根时可进行出瓶，方法是将可以出瓶的瓶苗从培养室内移置遮光率为70%?85%的温室大棚内，放置20d，之后再打开瓶盖继续放置7d，棚内要保持通风透气，控制好光照，使瓶苗逐渐接受自然光，适应自然环境。
[0041]移栽:移栽时将苗从瓶内取出，用自来水将附在根上的培养基清洗干净，然后放进稀释2000倍的多菌灵、百菌清等杀菌剂溶液中消毒5min，捞起放在透气塑料筐上晾干水分，按3株/丛，株行距5cmX 5cm移栽到铺好基质的苗床上,基质选用透气的椰壳+水苔，栽后注意保持环境通风、遮阳，苗床上无积水，湿度保持在75%?85%之间，待苗抽出新芽、新叶、新根后即可移栽大田，移栽地为云南省德宏热带农业科学研究所新建大棚内，移栽成活率在95%以上。
[0042]以上三种培养基PH值均为5.8?6.0，均含白糖25g/L，琼脂4.8g/L，土豆泥为新鲜土豆去皮切丝煮20min后用果汁机打碎成泥，香蕉泥为新鲜香蕉去皮煮20min用果汁机打碎成泥，西瓜汁为新鲜西瓜削去青色外皮把白色的皮和瓤一起煮20min后用果汁机打成汁。
【主权项】
1.一种喇叭唇石斛的无激素组织培养方法，具体包括以下步骤: (1)种子的无菌萌发 将成熟未开裂的喇叭唇石斛蒴果经消毒处理，种子均匀播入3/4MS培养基+ 土豆泥40?70g/L培养基中，培养条件:培养温度23?26°C，先暗培养7?12d，再光照培养，每天光照10h，光照强度1500?30001x ； (2)原球茎的增值分化 将绿色原球茎转入3/4MS培养基+ 土豆泥100?120g/L+香蕉泥20?40g/L培养基中培养，培养条件:培养温度23?26°C，每天光照10h，光照强度1500?30001x ； (3)无菌苗的生根壮苗培养 将原球茎分化出的2?3cm的幼苗转入1/2MS培养基+ 土豆泥80?100g/L+香蕉泥20?30g/L+西瓜汁20?30g/L+活性炭0.4g/L培养基中培养，培养条件:培养温度25?28°C，每天光照10h，光照强度2000?30001x ； (4)无菌苗的炼苗及移栽 炼苗:当瓶内80%以上的苗长至株高5?8cm，有5?8条长3cm以上粗壮根时可进行出瓶，方法是将可以出瓶的瓶苗从培养室内移置遮光率为70%?85%的温室大棚内，放置20d，之后再打开瓶盖继续放置7d，棚内要保持通风透气，控制好光照； 移栽:移栽时将苗从瓶内取出，用自来水将附在根上的培养基清洗干净，然后放进稀释2000倍的多菌灵、百菌清等杀菌剂溶液中消毒5min，捞起放在透气塑料筐上晾干水分，按3株/丛，株行距5cm X 5cm移栽到铺好基质的苗床上,基质选用透气的椰壳+水苔，栽后注意保持环境通风、遮阳，苗床上无积水，湿度保持在75%?85%之间，待苗抽出新芽、新叶、新根后即可移栽大田； 以上培养基PH值均为5.8?6.0，均含白糖25g/L，琼脂4.8g/L，土豆泥为新鲜土豆去皮切丝煮20min后用果汁机打碎成泥，香蕉泥为新鲜香蕉去皮煮20min用果汁机打碎成泥，西瓜汁为新鲜西瓜削去青色外皮把白色的皮和瓤一起煮20min后用果汁机打成汁。2.根据权利要求1所述的一种喇叭唇石斛的无激素组织培养方法，其特征在于种子无菌萌发时先进行7?12d的暗培养，再进行光照培养，每天光照10h，光照强度1500?30001xo3.根据权利要求1所述的一种喇叭唇石斛的无激素组织培养方法，其特征在于所用培养基的添加物为新鲜的土豆泥、香蕉泥、西瓜汁，土豆泥为新鲜土豆去皮切丝煮20min后用果汁机打碎成泥，香蕉泥为新鲜香蕉去皮煮20min用果汁机打碎成泥，西瓜汁为新鲜西瓜削去青色外皮把白色的皮和瓤一起煮20min后用果汁机打成汁； 种子无菌萌发培养基为3/4MS培养基+ 土豆泥40?70g/L，原球茎的增值分化培养基为3/4MS培养基+ 土豆泥100?120g/L+香蕉泥20?40g/L，生根壮苗培养基为1/2MS培养基+ 土豆泥80?100g/L+香蕉泥20?30g/L+西瓜汁20?30g/L+活性炭0.4g/L。4.根据权利要求1所述的一种喇叭唇石斛的无激素组织培养方法，其特征在于炼苗时将可以出瓶的瓶苗从培养室内移置遮光率为70%?85%的温室大棚内，放置20d，之后再打开瓶盖继续放置7d，棚内保持通风透气，控制好光照。5.根据权利要求1所述的一种喇叭唇石斛的无激素组织培养方法，其特征在于移栽基质为透气的椰壳+水苔，移栽前用稀释2000倍的多菌灵、百菌清等杀菌剂溶液中消毒3? 5min，按3株/丛，株行距5cm X 5cm进行移栽。
【专利摘要】本发明公开一种喇叭唇石斛的无激素组织培养方法，属于农业技术领域，该方法包括喇叭唇石斛种子无菌萌发、原球茎的增值分化、无菌苗生根壮苗、炼苗及移栽四个阶段，所用的培养基不使用任何激素，添加新鲜的土豆泥、香蕉泥、西瓜汁，依次为：3/4MS培养基+土豆泥40～80g/L培养基、3/4MS培养基+土豆泥100～120g/L+香蕉泥20～40g/L培养基、1/2MS培养基+土豆泥80～100g/L+香蕉泥20～30g/L+西瓜汁20～30g/L+活性炭0.4g/L培养基。本发明可有效降低种苗生产成本，有利于保持种苗的优良性状，提高种苗使用的安全性。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105325290
【申请号】CN201410401179
【发明人】姚春, 白燕冰, 李泽生
【申请人】云南省德宏热带农业科学研究所
【公开日】2016年2月17日
【申请日】2014年8月13日