垂枝樱花的组织培养方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及一种垂枝樱花的组织培养方法。
【背景技术】
[0002] 樱花传统的繁殖方式为嫁接繁殖，但其成苗慢，难以大量快速生产。随着组织培养 技术的发展，组织培养为樱花的快速繁殖和工厂化生产提供了一条有效途径。国内学者对 樱花的研究主要集中在山樱花、东京樱花、福建山樱花、野山樱等种类和品种上。垂枝樱花 为近年来才发展起来的观赏樱花，由于其枝条柔垂飘逸、美观，越来越多的应用于园林绿化 和美化中。
[0003] 对于垂枝樱花组织培养方面的研究主要有：南京林业大学荣冬青等报道了垂枝早 樱"红枝垂"的组培技术，以带芽茎段为外植体，启动培养基为MS+BA1. 0mg/L+NAA0.1 mg/ L，芽的诱导率为80% ;增殖培养基为MS+BAO. 5mg/L+NAA0. lmg/L+蔗糖35g/L，增殖系数为 4.15;生根培养基为1/213+熟41.〇11^/1+1841.〇11^/1，生根率达95%(荣冬青，王贤荣.垂 枝早樱"红枝垂"的组培快繁试验.林业科技开发，2008)。
[0004] 徐兆波等人也就垂枝樱花的引种观察与繁殖技术进行了研究，繁殖技术中组织培 养仅就垂枝樱花抗寒砧木的组培进行了研究，采用的繁殖材料为休眠芽和萌动芽，但研究 中未形成完整植株（徐兆波，陈秀云等.垂枝樱花引种观察与繁育技术研究.莱阳农学院 学报，2001)。
[0005] 综上所述，目前对于垂枝樱花的组织培养方法的研究报道较少，且不系统，并且存 在繁殖系数不高的一些问题。究其原因，在樱花的组织培养过程中，大部分种类或品种都会 遇到节间不伸长，容易老化，或出现叶片卷曲，玻璃化等现象，只有此问题彻底解决，才能使 组培达到较好的效果。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种垂枝樱花的组织培养方法，以克服现有垂枝樱花的组织 培养中存在的节间缩短，增殖系数低的问题。
[0007] 为达到上述目的，本发明是通过以下的技术方案来实现的：
[0008] 本发明所述的垂枝樱花的组织培养方法，包括：外植体的准备、启动培养、增殖培 养和生根培养；所述增殖培养的培养基含有6-BA0. 2~0. 5mg/L、ΝΑΑ0. 03~0. 07mg/L和 GA5 ~15mg/L〇
[0009] 本发明改良增殖培养基配方，能够解决垂枝樱花中普遍存在的节间缩短、繁殖系 数低的问题，优选的，所述增殖培养的培养基的配方为：MS+6-BA0. 2~0. 5mg/L+NAA0. 03~ 0· 07mg/L+GA5 ~15mg/L+ 鹿糖 30 ~40g/L+ 琼脂 5 ~8g/L。
[0010] 进一步优选的，所述增殖培养的培养基中，6-BA的浓度为0. 3~0. 5mg/L，NAA的 浓度为〇. 〇5mg/L，GA的浓度为10mg/L。更进一步的，所述增殖培养的培养基中，6-BA的浓 度为 0· 3mg/L 或 0· 5mg/L。
[0011] 优选的，所述的外植体为带腋芽茎段或茎尖，取自当年生春稍枝条的中上部。
[0012] 消毒后，对茎尖基部、带腋芽茎段的两端切口进行修剪，修剪成1~I. 5cm的单芽 茎尖或单芽茎段进行启动培养。
[0013] 优选的，所述启动培养的培养基的配方为：
[0014] MS+BA0. 4 ~0· 6mg/L+NAA0. 03 ~0· 07mg/L+ 蔗糖 30 ~40g/L+ 琼脂 5 ~8g/L。
[0015] 进一步优选的，所述启动培养的培养基中，6-BA的浓度为0. 5mg/L，NAA的浓度为 0. 05mg/L〇
[0016] 增殖培养基和启动培养基中，蔗糖的浓度具体可以为30g/L，琼脂的浓度具体可以 为 6. 5g/L。
[0017] 优选的，所述增殖培养的方法包括：启动培养20~30天后，从组培苗上取1~2cm 的单芽茎段，垂直接种于培养基中进行培养。
[0018] 与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明垂枝樱花的组培方法具有较低的 污染率，启动效果好，启动培养的诱导分化率可达到84%，增殖培养阶段能够正常拔节，组 培苗生长健壮，解决了传统樱花组织培养过程中普遍出现的节间缩短，容易老化的问题，且 增殖系数可达到7. 0。
【附图说明】
[0019] 图1为实施例1对外植体进行消毒灭菌的图片；
[0020] 图2为实施例1外植体接种到启动培养基时的图片；
[0021] 图3为实施例1启动培养10天的图片；
[0022] 图4为实施例1增殖培养20天的图片；
[0023] 图5为实施例1增殖培养25天的图片；
[0024] 图6为实施例1生根培养20天全株的图片；
[0025] 图7为实施例1生根培养20天根部的图片；
[0026] 图8为实施例2采用仅添加6-BA0. 5mg/L和ΝΑΑ0. 05mg/L两种植物生长调节剂的 培养基进行增殖培养20天的图片。
【具体实施方式】
[0027] 下面结合具体实施例，进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价 形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。
[0028] 实施例1
[0029] 材料：材料为樱花其中之一品种"垂枝樱花"，选取当年生带腋芽茎段。
[0030] 本实施例垂枝樱花的组织培养方法包括以下步骤：
[0031] 1、材料采集
[0032] 在3-5月份晴朗天气条件的中午，截取垂枝樱花健壮无病害嫩枝中上部位作为外 植体，去掉叶片留叶柄。采集外植体时要注意所选材料的优良性、纯正性、准确性，切忌随便 采取，以免造成不必要的损失。选择生长健壮、无病虫害的春稍枝段为材料，对所采的材料 要及时接种，防止失水萎蔫或污染霉烂。
[0033] 2、材料预处理
[0034] 将采集来的樱花材料进行修整，去掉不需要的部分，剪切成2_3cm小段，每段至少 保留1-2个腋芽，然后将材料放在洗衣粉中浸泡15分钟，用流水反复冲洗lh。
[0035] 3、消毒灭菌
[0036] 对材料进行预处理之后，转入超净工作台进行消毒处理。把外植体剪成1-1. 5cm 长的茎尖或带有一个腋芽的茎段，用70%的酒精处理lmin，然后用0. 1 %的HgClJI毒处理 lOmin，处理期间不断摇晃，使材料充分达到灭菌效果，再用无菌水冲洗5遍。
[0037] 4、启动培养
[0038] 将经过消毒灭菌的茎尖基部、茎段两端切口稍作修剪，修剪成1-1. 5cm的单芽茎 尖或单芽茎段。直立式接种于启动培养基上进行培养，培养温度为25°C，光照强度30001x， 光照时间12h/天。
[0039] 启动培养基的配方为：MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. 05mg/L+蔗糖30g/L，并附加琼脂 6. 5g/L，pH 值调整为 5. 8。
[0040] 5、增殖培养
[0041] 将经过启动培养25d生长的组培苗，截取成I. 5cm左右的单芽茎段，减去下部较大 的能接触到培养基的叶片，垂直接种于增殖培养基中进行培养，培养温度为25°C，光照强度 30001x，光照时间12h。