一种培养无菌蚕虫草的方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及蚕虫草的培养，尤其设及无菌培养蚕虫草。
【背景技术】
[0002] 冬虫夏草又名虫草，是我国民间惯用的一种名贵滋补药材，其营养成分高于人参， 可入药，也可食用，是上乘的佳肴，具有很高的营养价值。冬虫夏草由于其中所含的虫草素， 可W增强机体的免疫力，滋补肺肾，对肺癌、肝癌等有明显的抑制作用。在临床上对肺虚久 咳，气喘，肺结核咯血，盗汗，肾虚腰膝酸痛，阳瘦遗精，神经衰弱及化疗、放疗后的红细胞下 降都有疗效。虫草素含量的多少已成虫草质量优劣的重要标指。
[0003] 然而，冬虫夏草由于其稀缺性，价格非常昂贵，开发利用价廉优质蚕虫草替代稀缺 名贵的冬虫夏草，已成蚕虫草研发的热点课题。蚕虫草也称桑蚕虫草或家蚕虫草，是用蛹虫 草菌株抱子接种到桑蚕上人工培育而成的虫菌结合体。
[0004] 虫草素的分布依次为菌丝体培养液、菌丝体、子座逐渐增多。要提高虫草的质量， 唯有使菌丝生长旺盛，扩大生长面积；促进子座生长数量和长度。然而，现有的蚕虫草培养 技术中，所得到的虫草素含量较低，无法达到冬虫夏草的一般水平。因此，本领域一直存在 对蚕虫草培养方法进行改进的需要，W进一步提高蚕虫草中虫草素的含量。
【发明内容】
阳〇化]本发明提供了一种培养无菌蚕虫草的方法，其通过特定的条件和饲料饲育无菌蚕 作为蛹虫草菌生长的寄主，开发生产第Ξ代虫草，其虫草素含量是天然野生冬虫夏草的数 十倍至上百倍，其它有活性生物质世明显高于冬虫夏草。
[0006] 本发明的所述方法包括：
[0007] (1)将点青期或点青期W前的蚕卵用75%乙醇和4%甲醒溶液浸泡消毒灭菌；
[0008] (2)将经过所述消毒灭菌后的所述蚕卵置于无菌隔离器中解化，所述无菌隔离器 包括若干个水平放置的饲育盘，所述无菌隔离器保持解化过程在黑暗状态下进行，所述解 化过程保持25°C的恒定溫度，湿度为70-80%，对于整个所述无菌隔离器来说，经无菌处理 的空气的传输速率为250-350升/天，直至获得无菌蚁蚕；
[0009] (3)对在所述无菌隔离器中解化出的所述无菌蚁蚕用灭菌人工饲料喂养，所述 灭菌人工饲料为人工饲料经高压蒸汽灭菌，而后补足因灭菌损失的维生素获得，其中所 述灭菌人工饲料包括：基于所述灭菌人工饲料的总重量，干桑叶粉36. 5wt%、脱脂大豆 粉35. 4wt%、桑绿枝粉5wt%、玉米淀粉11.Owt%、薦糖4. 5 %、维生素B1. 5wt%、维生素 C1. 5wt%、宁樣酸2.Owt%、己豆酸0. 4wt%、氯化胆碱0. %，所述灭菌人工饲料的总 重量为lOOwt%，所述无菌隔离器保持饲养过程在黑暗状态下进行，所述饲养过程保持 27-29Γ的溫度，湿度为70-80%，对于整个所述无菌隔离器来说，经无菌处理的空气的传输 速率为250-350升/天，直至获得5龄第3~5天的无菌蚕；
[0010] (4)制取蛹虫草菌液，其中包括将天然蛹虫草菌种转种±豆液体培养基，并将所述 ±豆液体培养基置于真菌培养箱内在20°C避光振摇培养5至7天； W11] 妨将所述蛹虫草菌液注入步骤（3)中获得的所述5龄第3~5天的无菌蚕的腹 腔，注射量为0. 2~0. 3毫升/条，将注射后的所述无菌蚕仍然置于所述无菌隔离器中饲 养，所述无菌隔离器保持饲养过程在黑暗状态下进行，所述饲养过程保持27-29°C的溫度， 湿度为70-80%，对于整个所述无菌隔离器来说，经无菌处理的空气的传输速率为250-350 升/天，直至所述无菌蚕死亡僵硬并长出少量菌丝；
[0012] (6)将步骤巧）中获得的长出少量菌丝的死亡僵硬的无菌蚕从所述饲育盘中取 出，转入白天25°C光照、夜间20°C黑暗交替的无菌环境中培养38-42天，此间保持所述环境 湿度95%W上，即获得全身长满菌丝和长短不等的抱子梗的无菌蚕虫草。
[0013] 在本发明的一个实施方式中，所述灭菌人工饲料中还包括无机盐，所述无机盐选 自W下物质的任意组合：碳酸巧、氯化钢、硫酸钟、硫酸儘、憐酸巧、硫酸儀、水合硫酸铜、水 合硫酸铁W及氣化钢。
[0014] 在本发明的一个实施方式中，所述的培养蚕虫草的方法，其中所述饲育盘为抽屉 式饲育盘。
[0015] 基于本发明的蚕虫草的培养方法，所得到的单位产量的蚕虫草中所提取的虫草素 的量大幅提高，有利地提供了冬虫夏草的廉价替代产品。
【具体实施方式】
[0016] 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，W下结合实施例，对本发明 进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用W解释本发明，并不用于 限定本发明。
[0017] 实施例1 阳01引 （1)将点青期或点青期W前的蚕卵用75%乙醇和4%甲醒溶液浸泡消毒灭菌；
[0019] (2)将经过所述消毒灭菌后的所述蚕卵置于无菌隔离器中解化，所述无菌隔离器 包括若干个水平放置的饲育盘，所述无菌隔离器保持解化过程在黑暗状态下进行，所述解 化过程保持25°C的恒定溫度，湿度为70-80%，对于整个所述无菌隔离器来说，经无菌处理 的空气的传输速率为250-350升/天，直至获得无菌蚁蚕；
[0020] (3)对在所述无菌隔离器中解化出的所述无菌蚁蚕用灭菌人工饲料喂养，所述 灭菌人工饲料为人工饲料经高压蒸汽灭菌，而后补足因灭菌损失的维生素获得，其中所 述灭菌人工饲料包括：基于所述灭菌人工饲料的总重量，干桑叶粉36. 5wt%、脱脂大豆 粉35. 4wt%、桑绿枝粉5wt%、玉米淀粉11.Owt%、薦糖4. 5 %、维生素B1. 5wt%、维生素 C1. 5wt%、宁樣酸2.Owt%、己豆酸0. 4wt%、氯化胆碱0. %，所述灭菌人工饲料的总 重量为lOOwt%，所述无菌隔离器保持饲养过程在黑暗状态下进行，所述饲养过程保持 27-29Γ的溫度，湿度为70-80%，对于整个所述无菌隔离器来说，经无菌处理的空气的传输 速率为250-350升/天，直至获得5龄第3~5天的无菌蚕；
[0021] (4)制取蛹虫草菌液，其中包括将天然蛹虫草菌种转种±豆液体培养基，并将所 述±豆液体培养基置于真菌培养箱内在20°C避光振摇培养5至7天； 阳02引妨将所述蛹虫草菌液注入步骤（3)中获得的所述5龄第3~5天的无菌蚕的腹 腔，注射量为0. 2~0. 3毫升/条，将注射后的所述无菌蚕仍然置于所述无菌隔离器中饲 养，所述无菌隔离器保持饲养过程在黑暗状态下进行，所述饲养过程保持27-29°C的溫度， 湿度为70-80%，对于整个所述无菌隔离器来说，经无菌处理的空气的传输速率为250-350 升/天，直至所述无菌蚕死亡僵硬并长出少量菌丝；
[0023] (6)将步骤巧）中获得的长出少量菌丝的死亡僵硬的无菌蚕从所述饲育盘中取 出，转入白天25°C光照、夜间20°C黑暗交替的无菌环境中培养38-42天，此间保持所述环境 湿度95% W上，即获得全身长满菌丝和长短不等的抱子梗的无菌蚕虫草。
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