微生物快速检测多环测试片、无菌培养基及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种微生物快速检测多环测试片、测试片中包含的无菌培养基，并设 及无菌培养基的制备方法，属于微生物检验技术领域。
【背景技术】
[0002] 快速测试片是近年来发展起来的一种微生物快速检测方法，W滤纸为载体和W Petrifilm为载体的测试片己经得到众多检验部口的认可。W滤纸为载体的测试片由于培 养基与载体溶为一体，生长于滤纸和底板之间的微生物不方便挑取菌落进行进一步的分离 鉴定。W化trifilm为载体的测试片其圆形培养区边缘及边缘W外的菌落由于存在空气中 的菌在一定培养条件下带入的可能，在计数时造成菌落计数上的不准确。而化trifilm其 培养基与载体测试片的结合靠胶粘剂，对微生物的生长会有一定影响。鉴于W上缺陷，对快 速测试片改进的研究也日益受到本领域的重视。 阳00引公开号CN101497914A的发明《一种快速检测微生物的测试片及其制备方法和应 用》公开了一种快速测定微生物的测试片及其制备方法和应用，该测试片包括底板、中间缕 空的胶片和塑料膜，中间缕空的胶片的底面与底板粘合，胶片中间缕空部分形成凹槽培养 区，所述凹槽培养区内置有显色培养基；所述塑料膜的底面粘合有冷水可凝的凝胶剂，所述 塑料膜的底面与胶片的上表面在一侧边缘粘合。本发明测试片上下层粘合后福照灭菌包装 备用。本发明所述测试片能应用于菌落总数、大肠杆菌、大肠菌群、沙口氏菌、金黄色葡萄球 菌、副溶血性弧菌、铜绿假单胞菌等食源性致病微生物检测，操作简单，携带方便，测试时间 短、结果准确、可双面数菌。
[0004] 授权公告号CN203728842U的实用新型《微生物检测盒》公开的微生物检测盒， 其包括上模板W及下模板，所述下模板设置有一凸台，所述凸台内设置有安置槽，所述安置 槽内为含有吸水凝胶的选择性显色培养基层或者从下往上依次为含有吸水凝胶的选择性 显色培养基层和吸水滤纸。该实用新型通过在下模板设置安置槽，将含有吸水凝胶的选择 性显色培养基层或者含有吸水凝胶的选择性显色培养基层和吸水滤纸放置在安置槽，经脱 水、灭菌处理后，往安置槽内滴加ImL水样，水样迅速被安置槽内含有吸水凝胶的选择性显 色培养基层或者含有吸水凝胶的选择性显色培养基层和吸水滤纸吸收，培养后即可显现出 特有的菌落特征如颜色、晕环等，方便直接计数或自动计数仪计数，开展微生物学检验工 作。 阳0化]上述发明创造解决了一定的问题，但也存在一定缺陷，或者不利于培养基水分的 保持，或者上盖下盖结合过于严密，未考虑到微生物对氧气的需求，或者虽然考虑了微生 物对氧气需求的问题，但没有消除空气中浮游菌对检测结果的影响，或者含有胶粘剂的成 分，一定程度影响微生物生长，或者培养基与测试片的结合不够牢固，或者有滤纸或无纺布 等结构，不利于计数W及后续挑取菌落进行进一步鉴定。
[0006]同时，传统的微生物培养基多为粉末或颗粒状，也有即时可用的培养基。粉末状在 使用过程中有粉尘，吸入会危害使用人员的身体健康。粉末及颗粒培养基在使用时都需要 提前配制，消毒灭菌等准备工作。而即时可用的培养基分为即时可用的液体增菌液和即时 可用的琼脂平板，琼脂斜面等，存在运输不便，使用成本高的问题。且现有的培养基多含有 琼脂类物质，而目前测试片中多使用吸水凝胶或冷水可凝胶，也有配合吸水滤纸使用的，在 使用时，如上述公开的专利所述，滴加水样，使被凝胶或吸水滤纸吸收，即用于培养，易造成 培养基成分与水混合不够充分，营养不匀，因此研制一种对检测片来说更适用的培养基是 本领域丞待解决的问题。
【发明内容】
[0007] 针对上述问题，本发明提供一种无滤纸或无纺布、有供气通道、能够有效沉降空气 中浮游菌，结构简单，使用简便，适用于多种微生物检测，可完全替代传统平板，用于微生物 快速检测的一次性多环测试片。
[0008] 为实现上述目的，本发明采用了W下技术方案：
[0009] 一种微生物快速检测测试片，包括底板，上盖及无菌培养基；所述底板及上盖为形 状相适应，可上下咬合的多环齿状结构，所述多环齿状结构为上下起伏的连续结构；底板的 多环齿状结构中部凹陷形成培养室，为方便叙述，将培养室分作底面和侧面；相应地，上盖 的多环齿状结构中部凸起形成培养室盖；培养室底面与侧面的角度为30-80°，侧面最高 点垂直于底面的高度不小于0. 3cm ;所述培养室用于放置无菌培养基；所述无菌培养基有 两种形式，一种为凝胶分离式无菌培养基，一种为靠静电吸附于培养室底面内表面的静电 吸附式无菌培养基；所述凝胶分离式无菌培养基包括无菌高浓度液体培养基和冷水可凝 胶，无菌高浓度液体培养基独立包装，与冷水可凝胶使用前隔绝，使用时混合；所述凝胶分 离式无菌培养基的两个组成部分，可W放置在培养室内也可W不放置在培养室内，而单独 无菌包装；使用时，将无菌高浓度液体培养基和冷水可凝胶在培养室中混合。所述静电吸附 式无菌培养基为含有冷水可凝胶的培养基干粉或颗粒，靠静电吸附于培养室底面，使用时 加无菌水溶解混合。
[0010] 优选的，所述底板及上盖横截面为同屯、的圆形或矩形；
[0011] 所述多环齿状结构的横截面形状为圆形或矩形；
[0012] 所述多环齿状结构的高度为0. 4cm到Icm ;
[0013] 所述培养室面积为25-180cm2;容纳培养基的量优选0. 04-0. 25mL/cm2;
[0014] 所述多环齿状结构不少于1环；
[0015] 所述多环齿状结构优选为2环；
[0016] 底板底面与侧面的角度可W保证无菌培养基与底板紧密结合，不会在打开该多环 测试片时从底板上脱落； 阳017]冷水可凝胶均匀涂抹于培养室的中央，或制成薄膜或其他形式置于培养室中，也 可置于培养室外，单独包装；
[0018] 冷水可凝胶原料包括结冷胶，卡拉胶，瓜尔胶，黄原胶，刺槐豆胶，鼠李聚糖胶中至 少一种.
[0019] 无菌高浓度液体培养基为无凝胶及琼脂成分的无菌高浓度液体培养基或无菌高 浓度液体显色培养基；
[0020]所述微生物快速检测测试片的材质要求：透明，防水材料；
[0021] 培养室底面内表面优选为静电吸附膜，静电吸附膜优选为S层共挤PE静电吸附 胺；
[0022] 所述底板与上盖的结合方式可为一体、分体或黏合结构，例如底板及上盖的一条 边可通过压敏胶粘合，形成可开合的结构；
[0023] 所述多环齿状结构的纵截面可为相互配合的多个=角形，楠圆形，梯形或矩形的 整体或部分，也可为W上形状整体或部分的任意组合；
[0024] 所述底板及上盖厚度分别为0.1 mm-O. 6mm;微生物快速检测测试片长度5-15畑1， 宽度 5-14cm。
[00巧]所述凝胶分离式无菌培养基中，冷水可凝胶与复原后无菌高浓度液体培养基的质 量体积比为：〇.〇〇5-15g : 1L;
[00%] 培养基为凝胶分离式培养基的微生物快速检测多环测试片的使用方法，包括如下 步骤：
[0027] 取无菌高浓度液体培养基，按照浓缩倍数复原备用；取含有冷水可凝胶的测试片， 或将独立包装的冷水可凝胶先加入测试片，再加入复原后的无菌液体培养基Iml至20ml， 震荡IOs使之与冷水可凝胶充分接触溶解，放置3分钟待液体培养基凝固后使用。
[0028] 培养基为静电吸附式培养基的微生物快速检测多环测试片的使用方法，包括如下 步骤：
[0029] 取含有培养基的测试片，培养基依靠静电吸附于测试片培养室底面内表面，加入 无菌水Iml至20ml，震荡IOs使培养基充分溶解，放置3分钟待液体培养基凝固后使用。
[0030] 本发明同时提供一种凝胶分离式无菌培养基，所述凝胶分离式无菌培养基包括使 用前隔绝的无菌高浓度液体培养基和冷水可凝胶，冷水可凝胶与复原后无菌高浓度液体培 养基的质量体积比为：0.005-15g : 1L;凝胶分离式无菌培养基可用于微生物检测片，也可 用于快速配制平板或增菌液；
[0031] 冷水可凝胶均匀涂抹于培养室的中央，或制成冷水可凝胶膜或其他形式置于培养 室中，使用之前与无菌高浓度液体培养基隔绝；
[0032] 优选的，冷水可凝胶由如下质量份数的原料组成：结冷胶：瓜尔胶：黄原胶为 1:4:5;
[0033] 所述冷水可凝胶还可W包括冷水可凝胶助溶剂：为加快冷水可凝胶的溶解及防止 在与无菌高浓度液体培养基混匀过程中结块，在冷水可凝胶中可加入一定量不影响微生物 生长的助溶剂；助溶剂为二氧化铁表面活性剂、二氧化娃表面活性剂、Bola表面活性剂中 至少一种，加入比例W冷水可凝胶计：〇. 〇〇〇5wt% -0. 5wt% ;
[0034] 冷水可凝胶可由本领域公知的方法制备，优选的，冷水可凝胶由W下方法制备：
[0035] 多环测试片培养室底面培养室底面内表面采用静电吸附膜制作或覆盖有静电吸 附膜，W培养室面积为SOcm2为例，称取0. 2g冷水可凝胶粉，冷水可凝胶粉的成分为瓜尔胶 0.〇8g，黄原胶0.1 g,刺槐