微生物快速检测多环测试片、无菌培养基及其制备方法_3

文档序号:9466724阅读:来源:国知局
物快速检测多环测试片的制备包括如下步骤:
[00巧]冷水可凝胶膜制备:多环测试片培养室面积为80cm2,称取0. 2g经福照后的冷水 可凝胶粉(含0. 〇〇5wt%助溶剂),加入多环测试片底板的培养室中,加入0. 5ml无菌水,迅 速圆周振荡溶解并均匀铺于培养室底面上,烘干后盖上上盖,密封保存;
[0080] 无菌高浓度液体培养基制备:
[0081] 称取膜蛋白腺5g,酵母浸膏2. 5g,葡萄糖Ig, 0.OOlg稳定剂及消泡剂混合物;所述 稳定剂为簇甲基纤维素钢,消泡剂为乳化硅油,二者比例为1 : 1,加水100mL溶解混匀,灌 装至无菌瓶或袋中,12rc高溫高压灭菌15分钟,灭菌后密封保存。
[0082] PCA微生物快速检测多环测试片与PCA常规平板比较试验:
[0083] 试剂:包括无菌高浓度液体培养基的多环PCA测试片,PCA干粉培养基;
[0084]标准菌株,大肠杆菌(ATCC10536),鼠伤寒沙口氏菌(ATCC13311),蜡样芽抱杆 菌(ATCC11778),金黄色葡萄球菌(ATCC6538); 阳0化]标准菌浊度:IO8C即/ml;
[0086] 将标准菌梯度稀释,接菌浓度:10 7C即/ml,Iml;
[0087] 多环PCA测试片的使用前准备:取无菌高浓度PCA液体培养基,按照复原倍数10 倍,添加900ml无菌水复原备用。
[0088] 取含有冷水可凝胶膜的测试片,加入复原后的无菌液体培养基20ml,震荡IOs使 之与冷水可凝胶膜充分接触溶解。放置3分钟待液体培养基凝固后使用;
[0089] PCA干粉培养基的使用前准备:按照说明书称量配制,121度高溫高压灭菌15分 钟,冷却后倒平板,凝固后使用;
[0090] 接种标准菌梯度稀释液(接菌浓度10 7CFlVml,Iml),与PCA干粉培养基配制成的 平板培养基同步实验,按照GB4789. 2-2010标准方法,在36 +rC条件下培养48小时,观察 结果,计算菌落总数(菌落数乘W稀释倍数)如表1。
[0091] 表1:标准菌株实验结果
[0093] 表1结果表明两种方法菌落生长无数量级差异。上述测试目的和测试结果仅用于 说明多环测试片的可行性,测试过程的变化可能产生不同的结果。
[0094] 实施例2 阳0巧]参考图1、2、6所示,在本发明的一个示例性实施例中,一种微生物快速检测测试 片,包括底板1,上盖2及无菌培养基;所述底板1及上盖2为形状相适应,可上下咬合的多 环齿状结构,所述多环齿状结构为上下起伏的连续结构;底板1的多环齿状结构中部凹陷 形成培养室3 ;相应地,上盖2的多环齿状结构中部凸起形成培养室盖4 ;培养室底面31与 侧面32的角度为30-80°,侧面32最高点垂直于底面31的高度不小于0. 3cm;所述培养室 3用于放置无菌培养基,培养室底面内表面采用静电吸附膜制作或覆盖有静电吸附膜;所 述无菌培养基为凝胶分离式无菌培养基;所述凝胶分离式无菌培养基包括无菌高浓度液体 培养基和冷水可凝胶,冷水可凝胶为冷水可凝胶粉,在静电的作用下均匀吸附于培养室底 面上,无菌高浓度液体培养基和冷水可凝胶使用前隔绝,使用时混合;所述无菌高浓度液 体培养基单独密封包装,可W放置在培养室内,也可W与测试片分别密封包装;使用时,将 无菌高浓度液体培养基和冷水可凝胶在培养室中混合。
[0096] 所述底板及上盖横截面为同屯、的矩形;
[0097] 所述多环齿状结构的横截面形状为矩形; 阳09引所述多环齿状结构的高度为0. 4cm到Icm ;
[0099] 所述培养室面积为25-180cm2;
[0100] 所述多环齿状结构为2环; 阳101] 底板底面与侧面的角度可W保证冷水可凝胶与无菌高浓度液体培养基混合后,在 常溫下形成的固体培养基与底板紧密结合,不会在打开该多环测试片时从底板上脱落; 阳102] 冷水可凝胶静电吸附于培养室3中; 阳103] 冷水可凝胶选自结冷胶,卡拉胶,瓜尔胶,黄原胶,刺槐豆胶,鼠李聚糖胶中至少一 种;
[0104] 无菌高浓度液体培养基为无凝胶及琼脂成分的灭菌高浓度液体培养基;
[01化]所述微生物快速检测测试片的材质要求:透明,防水材料; 阳106] 所述底板1与上盖2的结合方式为分体; 阳107] 所述多环齿状结构的纵截面为相互配合的=角形和矩形形状的结合;
[0108] 所述底板及上盖厚度分别为0.1 mm-O. 6mm;微生物快速检测测试片长度5-15畑1, 宽度 5-14cm; 阳109] 微生物快速检测多环测试片的制备包括如下步骤:
[0110]多环测试片培养室底面内表面采用静电吸附膜制作或覆盖有静电吸附膜,W培养 室面积为SOcm2为例,称取0. 2g冷水可凝胶粉,冷水可凝胶的成分为瓜尔胶0. 08g,黄原胶 0.Ig,刺槐豆胶0. 019,助溶剂二氧化铁表面活性剂0.OOlg,加入多环测试片底板的培养室 中,高频振荡使冷水可凝胶粉在静电的作用下均匀吸附于培养室底面上,盖上上盖,密封后 福照灭菌,保存; 阳111 ] 无菌高浓度液体培养基制备:
[0112] W平板计数琼脂(PCA)为例,常规方法配制1升PCA培养基,所需原料成分为膜蛋 白腺5g,酵母浸膏2. 5g,葡萄糖Ig,琼脂15g,加水配制为1升。本实施例称取膜蛋白腺5邑, 酵母浸膏2. 5g,葡萄糖Ig,0.0 Olg稳定剂及消泡剂混合物;所述稳定剂为簇甲基纤维素钢, 消泡剂为乳化硅油,二者比例为1 : 1,各成分混合后加水100mL溶解混匀,形成浓度为原培 养基浓度10倍的高浓度液体PCA培养基,灌装至无菌瓶或袋中,121°C高溫高压灭菌15分 钟,灭困后酱封保存。复原时添加900ml无困水,充分震汤混匀。 阳11引实施例3
[0114] 参考图1、2、7所示,在本发明的一个示例性实施例中,一种微生物快速检测测试 片,包括底板1,上盖2及无菌培养基;所述底板1及上盖2为形状相适应,可上下咬合的多 环齿状结构,所述多环齿状结构为上下起伏的连续结构;底板1的多环齿状结构中部凹陷 形成培养室3,为方便叙述,将培养室3分作底面31和侧面32 ;相应地,上盖2的多环齿状 结构中部凸起形成培养室盖4 ;培养室底面31与侧面32的角度为30-80°,侧面32最高点 垂直于底面31的高度不小于0. 3cm;所述培养室3用于放置无菌培养基;所述无菌培养基 为凝胶分离式无菌培养基;所述凝胶分离式无菌培养基包括无菌高浓度液体培养基和冷水 可凝胶,冷水可凝胶为冷水可凝胶膜,设置于培养室中,无菌高浓度液体培养基和冷水可凝 胶使用前隔绝,使用时混合;所述无菌高浓度液体培养基单独密封包装,可W放置在培养室 内,也可W与测试片分别密封包装;使用时,将无菌高浓度液体培养基和冷水可凝胶在培养 室中混合。
[0115] 所述多环齿状结构的高度为0. 4cm到Icm ;
[0116] 所述培养室面积为25-180cm2;
[0117] 所述多环齿状结构为2环;
[0118] 底板底面与侧面的角度可W保证无菌水与培养基混合后,在常溫下形成的固体培 养基与底板紧密结合,不会在打开该多环测试片时从底板上脱落;
[0119] 冷水可凝胶选自结冷胶,卡拉胶,瓜尔胶,黄原胶,刺槐豆胶,鼠李聚糖胶中至少一 种;
[0120] 无菌高浓度液体培养基为灭菌高浓度液体培养基或无菌高浓度液体显色培养 基; 阳121] 所述微生物快速检测测试片的材质要求:透明,防水材料; 阳122] 所述底板1与上盖2的结合方式为分体; 阳123] 所述多环齿状结构的纵截面为相互配合的多个楠圆形的一部分;
[0124]所述底板1及上盖2厚度分别为0.1 mm-O. 6mm;微生物快速检测测试片长度 5-15cm,宽度 5-14cm。 阳1巧]微生物快速检测多环测试片的制备包括如下步骤:
[01%]W培养室面积为SOcm2为例,称取0. 2g冷水可凝胶粉,冷水可凝胶的成分为瓜尔 胶0. 099g,黄原胶0.Ig,助溶剂二氧化娃表面活性剂0.OOlg,加入多环测试片底板的培养 室中,加入0. 5ml无菌水,迅速圆周振荡溶解并均匀铺于培养室底面上,冷冻干燥后盖上上 盖,密封后福照灭菌,保存; 阳127] 无菌高浓度液体培养基制备:
[0128] W平板计数琼脂(PCA)为例,常规方法配制1升PCA培养基,所需原料成分为膜蛋 白腺5g,酵母浸膏2. 5g,葡萄糖Ig,琼脂15g。本实施例称取膜蛋白腺5g,酵母浸膏2. 5邑, 葡萄糖Ig, 0.OOlg稳定剂及消泡剂混合物;所述稳定剂为簇甲基纤维素钢,消泡剂为乳化 硅油,二者比例为1 : 1,各成分混合后加水100mL溶解混匀,形成浓度为原培养基浓度10 倍的高浓度液体PCA培养基,灌装至无菌瓶或袋中,121°C高溫高压灭菌15分钟,灭菌后密 封保存。使用时按比例添加无菌水复原。 阳129]实施例4
[0130]参考图1、2、7所示,在本发明的一个示例性实施例中,一种微生物快速检测测试
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