微生物颗粒培养基的简便制备方法与流程

本发明涉及培养基制备领域，尤其涉及一种微生物颗粒培养基的简便制备方法。

背景技术：

微生物培养基在微生物检测以及研究等方面的应用及其广泛。一般而言，微生物培养基的典型组分包括蛋白质水解产物、无机盐、维生素、痕量金属和碳水化合物等，有时还需根据不同微生物生长的需求，添加一些特殊的物质(例如维生素或辅因子以及抗生素)等。

目前根据微生物培养基的状态，可大致分为液体培养基、粉末培养基以及颗粒培养基等。其中液体培养基具有能马上使用等优点，但是不利于培养基的长期保存和运输。作为液体培养基的替代形式，目前比较普遍使用粉状培养基。粉状培养基通常具有比液体培养基更长的保质期，并且在配制后，可通过照射(例如γ或紫外线照射)或环氧乙烷渗透将培养基灭菌。但是，粉状培养基具有若干缺点。粉末状培养基在生产过程中会产生粉尘污染，危害生产人员的身体健康；而且粉末状培养基在水中会发生聚团凝结现象，溶解速度也比较的慢。

相比较而言，颗粒培养基因为颗粒大，无粉尘污染，且溶解速度快，具有许多优点。但在实际制备中，需要使用造粒机来对粉末培养基进行造粒，往往只能在大型的工厂使用专门的设备来进行。而且在造粒过程中需使用热风等来对颗粒进行干燥，对于一些含有热敏感添加剂的培养基不适用。

技术实现要素：

为解决上述问题，本发明提供一种微生物颗粒培养基的简便制备方法，能在几个小时内实现小批量微生物颗粒培养基的快速制备。

本发明的微生物颗粒培养基的简便制备方法，具体步骤如下：

将制备微生物培养基的各固体试剂制备成粉末并过标准检验筛，过筛后按所需培养基成分配比用天平称出后混匀得到培养基粉末；

将混匀后的培养基粉末均匀平摊开在无菌环境中，紫外线照射后放入无菌容器中，用无菌玻璃棒搅拌培养基粉末的同时喷洒75％酒精，将培养基粉末湿润到一定程度后，用大孔径检验筛过滤；

过滤后的颗粒放入收集筛，收集筛过滤后，将收集筛上保留的颗粒放入无菌托盘，无菌托盘放入普通超净台，用超净台风机风干，制备得到微生物颗粒培养基；

大孔径检验筛上的大颗粒、收集筛筛下的小颗粒及培养基粉末重新放入无菌容器造粒直至所有培养基粉末形成颗粒培养基。

优选的，标准检验筛为50-70目检验筛；更优选的，标准检验筛为60目检验筛。

优选的，紫外线照射的时间为0.5-2h，更优选的，紫外线照射的时间为1h。

优选的，大孔径检验筛为10-15目检验筛，更优选的，大孔径检验筛为12目检验筛。

优选的，收集筛为35-45目收集筛；更优选的，收集筛为40目检验筛。

优选的，无菌托盘在超净台风机风干的具体操作为，风干的同时进行紫外照射1-2小时。

相比目前颗粒培养基的制备方法，本发明的有益效果在于:(1)本发明的制备方法更简单，不需要大型设备，适应性广；(2)在制粒过程中不需加热，能较好保持培养基中热敏感物质的活性；(3)本发明整合了75％酒精和紫外线的双重灭菌方式，制备的颗粒培养基不需要再次灭菌，使用方便，无菌率高，可以直接用于微生物的培养。

附图说明

图1为本发明实施例颗粒培养基制备的流程图。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明实施例提供了一种微生物颗粒培养基的简便制备方法，具体步骤如下：

S1将制备微生物培养基的各固体试剂制备成粉末并过50-70目标准检验筛，过筛后按所需培养基成分配比用天平称出后混匀得到培养基粉末。

本步骤中，将制备微生物培养基的各固体实际制备成粉末过筛，可以使不同成分的试剂达到统一目径，有利于后续制备颗粒。

S2将混匀后的培养基粉末均匀平摊开在无菌环境中，紫外线照射0.5-2h后放入无菌容器中，用无菌玻璃棒搅拌培养基粉末的同时喷洒75％酒精，将培养基粉末湿润到一定程度后，用大孔径10-15目检验筛过滤。

本步骤中，把混匀后的粉末试剂均匀平摊开在无菌环境中，可以保证紫外线的充分照射杀菌，紫外杀菌后的培养基再加入75％酒精后无菌率高，同时将粉末成团，过大孔径筛可以将大团的颗粒打散从而保证颗粒的形成。

S3过滤后的颗粒放入35-45目收集筛，收集筛过滤后，将收集筛上保留的颗粒放入无菌托盘，无菌托盘放入普通超净台，用超净台风机风干，风干的同时进行紫外照射1-2小时，风干后即制备完成颗粒培养基。

本步骤中，超净台风机吹干的同时紫外照射能够同时起到消毒和风干的效果。制备得到的颗粒大小位于10-15目与35-45目之间，该大小的颗粒在具有优异溶解性能的同时兼顾颗粒的美观性，能够符合市售产品的基本要求，如果颗粒较大，则在培养基使用时有可能造成称量不便，造成称量重量过多或多少；如果颗粒较小，则其溶解碎裂成粉末，造成溶解性能不高，因此，在本发明的上述颗粒大小的基础上能够兼具美观性和快速溶解性。

S4大孔径检验筛上的大颗粒、收集筛筛下的小颗粒及培养基粉末重新放入无菌容器造粒直至所有培养基粉末形成颗粒培养基。

本步骤可以在不浪费原材料的情况下尽可能使粉末成粒。

为了更清楚详细地介绍本发明实施例所提供的微生物颗粒培养基的简便制备方法，以下将结合具体实施例进行说明。

实施例1

将制备微生物培养基的各固体试剂制备成粉末并过60目标准检验筛，过筛后按所需培养基成分配比用天平称出后混匀得到培养基粉末；

将混匀后的培养基粉末均匀平摊开在无菌环境中，紫外线照射1h后放入无菌容器中，用无菌玻璃棒搅拌培养基粉末的同时喷洒75％酒精，将培养基粉末湿润到一定程度后，用大孔径12目检验筛过滤；

过滤后的颗粒放入40目收集筛，收集筛过滤后，将收集筛上保留的颗粒放入无菌托盘，无菌托盘放入普通超净台，用超净台风机风干，风干的同时进行紫外照射1-2小时，风干后即制备完成颗粒培养基；

大孔径检验筛上的大颗粒、收集筛筛下的小颗粒及培养基粉末重新放入无菌容器造粒直至所有培养基粉末形成颗粒培养基。

实施例2

将制备微生物培养基的各固体试剂制备成粉末并过50目标准检验筛，过筛后按所需培养基成分配比用天平称出后混匀得到培养基粉末；

将混匀后的培养基粉末均匀平摊开在无菌环境中，紫外线照射0.5h后放入无菌容器中，用无菌玻璃棒搅拌培养基粉末的同时喷洒75％酒精，将培养基粉末湿润到一定程度后，用大孔径10目检验筛过滤；

过滤后的颗粒放入35目收集筛，收集筛过滤后，将收集筛上保留的颗粒放入无菌托盘，无菌托盘放入普通超净台，用超净台风机风干，风干的同时进行紫外照射1-2小时，风干后即制备完成颗粒培养基；

大孔径检验筛上的大颗粒、收集筛筛下的小颗粒及培养基粉末重新放入无菌容器造粒直至所有培养基粉末形成颗粒培养基。

实施例3

将制备微生物培养基的各固体试剂制备成粉末并过70目标准检验筛，过筛后按所需培养基成分配比用天平称出后混匀得到培养基粉末；

将混匀后的培养基粉末均匀平摊开在无菌环境中，紫外线照射2h后放入无菌容器中，用无菌玻璃棒搅拌培养基粉末的同时喷洒75％酒精，将培养基粉末湿润到一定程度后，用大孔径15目检验筛过滤；

过滤后的颗粒放入45目收集筛，收集筛过滤后，将收集筛上保留的颗粒放入无菌托盘，无菌托盘放入普通超净台，用超净台风机风干，风干的同时进行紫外照射1-2小时，风干后即制备完成颗粒培养基；

大孔径检验筛上的大颗粒、收集筛筛下的小颗粒及培养基粉末重新放入无菌容器造粒直至所有培养基粉末形成颗粒培养基。

采用实施例1的制备方法制备200g颗粒大肠杆菌培养基，具体流程参见图1。

将制备大肠杆菌培养基的各固体试剂制备成粉末并过60目标准检验筛，过筛后按所需培养基成分配比用天平称出，组分配比为：蛋白胨100g、氯化钠29g、磷酸氢二钾59g、磷酸二氢钾12g，混匀得到培养基粉末；

将混匀后的培养基粉末均匀平摊开在无菌环境中，紫外线照射1h后放入无菌容器中，用无菌玻璃棒搅拌培养基粉末的同时喷洒75％酒精，将培养基粉末湿润到一定程度后，用大孔径12目检验筛过滤；

过滤后的颗粒放入40目收集筛，收集筛过滤后，将收集筛上保留的颗粒放入无菌托盘，无菌托盘放入普通超净台，用超净台风机风干，风干的同时进行紫外照射1-2小时，风干后即制备完成颗粒培养基；

大孔径检验筛上的大颗粒、收集筛筛下的小颗粒及培养基粉末重新放入无菌容器造粒直至所有培养基粉末形成颗粒培养基。

将制备好的颗粒培养基加入无菌水复溶，肉眼可见在1分钟内即完全溶解。溶解后培养基pH值为6.93，颜色透明，溶解后液体与常规制备的培养基液体基本相同，说明颗粒培养基成分在配制过程中改变较少，能保持基本的性能需求。

进一步验证制备的颗粒培养基是否污染细菌以及对大肠杆菌ATCC25922的培养情况，结果显示复溶后的颗粒培养基在37℃培养3天后，无杂菌生长，说明制备过程中紫外性和75％酒精有很好的灭菌效果。并且接入大肠杆菌的复溶培养基在培养24小时后，即可见明显的菌生长，菌浊度与现配的液体培养基浊度相当，说明制备过程中培养基各成分的营养等不受影响。