一种微生物培养基及其应用
【技术领域】
[0001 ]本发明属于培养基领域，尤其涉及一种微生物培养基及其应用。
【背景技术】
[0002] 随着科技的进步，人们对细胞分子医学的研究更加深入。目前，细胞治疗已经成功 在临床上进行应用，包括自体免疫细胞治疗和自体干细胞治疗。对肿瘤病人来说，自体免疫 细胞治疗给他们带来了新的健康福音;对一些疑难杂症病人来说，自体干细胞治疗给他们 的生活带来了新的动力。所以细胞治疗在未来的生命科学技术研究有非常重要的意义。
[0003] 所谓细胞治疗是指利用某些具有特定功能的细胞，采用生物工程方法获取后在体 外进行增殖培养，使这些细胞具有增强免疫、杀死病原体和肿瘤细胞、促进组织器官再生和 机体康复等治疗功效，然后将这些具有治疗功效的细胞回输到病患体内，从而达到治疗疾 病的目的。
[0004] 为了保证细胞在回输到体内时的安全性，必须在细胞回输到内体之前对其是否存 在微生物进行快速检出。目前，细胞培养过程中微生物的检出方法主要是在培养基中对细 胞样本进行培养，观察是否有微生物菌落形成，从而判断细胞样本中是否存在微生物。但由 于多数细胞样本在前期培养时都会添加抗生素，如青霉素、链霉素等，而抗生素的存在会在 一定抑制细胞样本中微生物的生长，但并不会真正地杀死微生物，从而造成检出结果缓慢 甚至出现假阴性。
【发明内容】
[0005] 有鉴于此，本发明的目的在于提供一种微生物培养基及其应用，采用本发明提供 的培养基对细胞样本中的微生物进行检出时，可以降低细胞样本中的抗生素对微生物生长 的抑制作用，提高检出的速度和准确度。
[0006] 本发明提供了一种微生物培养基，包括基础培养基、血清、β_内酰胺拮抗剂和氨基 糖苷类拮抗剂;所述基础培养基、血清、内酰胺拮抗剂和氨基糖苷类拮抗剂的用量比800 ~1300(g):0.5~7(mL):l~5(mL):l~5(mL)〇
[0007] 优选的，所述基础培养基包括水、无机盐、维生素、氨基酸和葡萄糖。
[0008] 优选的，所述维生素包括B族维生素和/或维生素 D。
[0009] 优选的，所述无机盐包括NaCl。
[0010] 优选的，所述基础培养基还包括凝固剂。
[0011]优选的，所述凝固剂为琼脂。
[0012] 优选的，所述基础培养基还包括酵母膏。
[0013] 优选的，所述微生物培养基还包括显色剂。
[0014] 优选的，所述显色剂为酚红。
[0015] 本发明提供了一种上述技术方案所述的微生物培养基在细胞样本微生物检出中 的应用。
[0016] 与现有技术相比，本发明提供了一种微生物培养基及其应用。本发明提供的微生 物培养基包括基础培养基、血清、内酰胺拮抗剂和氨基糖苷类拮抗剂;所述基础培养基、 血清、内酰胺拮抗剂和氨基糖苷类拮抗剂的用量比800~1300(g) :0.5~7(mL):l~5 (mL):l~5(mL)。本发明提供的微生物培养基含有基础培养基、血清、β-内酰胺拮抗剂和氨 基糖苷类拮抗剂，通过各组分之间的协同作用保证微生物可以在该培养基中良好生长，减 小抗生素对微生物的生长抑制，从而提高细胞样本中微生物的检出速度和准确度。实验结 果表明：微生物在本发明提供的培养基中可以保持良好的生长态势，该培养基能够有效降 低抗生素对微生物生长的抑制作用。
【具体实施方式】
[0017] 下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例 仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技 术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范 围。
[0018] 本发明提供了一种微生物培养基，包括基础培养基、血清、β-内酰胺拮抗剂和氨基 糖苷类拮抗剂;所述基础培养基、血清、内酰胺拮抗剂和氨基糖苷类拮抗剂的用量比800 ~1300(g):0.5~7(mL):l~5(mL):l~5(mL)〇
[0019] 本发明提供的微生物培养基包括基础培养基、血清、β-内酰胺拮抗剂和氨基糖苷 类拮抗剂。其中，所述基础培养基含有微生物生长繁殖所需的基本营养物质，可供大多数微 生物生长。在本发明提供的一个实施例中，所述基础培养基包括水、无机盐、维生素、氨基酸 和葡萄糖。在本发明提供的一个实施例中，所述无机盐包括NaCl。在本发明提供的一个实施 例中，所述无机盐和水的质量比为(〇. 2~3): 1000。在本发明提供的一个实施例中，所述维 生素包括B族维生素和/或维生素 D。在本发明提供的一个维生素包括B族维生素和维生素 D 的实施例中，所述B族维生素和维生素 D的质量比为（1~5):(1~5)。在本发明提供的一个实 施例中，所述维生素和水的质量比为(2~10): 1000。在本发明提供的一个实施例中，所述氨 基酸包括但不限于L-谷氨酰胺、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸和L-缬氨酸中的一种或多种;在本发明提供的另一个实施例 中，所述氨基酸为非必须氨基酸。在本发明提供的一个实施例中，所述氨基酸和水的质量比 为(0.5~5): 1000。在本发明提供的一个实施例中，所述葡萄糖和水的质量比为（1~10): 1000。在本发明提供的一个实施例中，所述基础培养基还包括凝固剂。在本发明提供的一个 实施例中，所述凝固剂为琼脂。在本发明提供的一个实施例中，所述凝固剂和水的质量比为 (25~40): 1000。在本发明提供的一个实施例中，所述基础培养基还包括酵母膏。在本发明 提供的一个实施例中，所述酵母膏和水的质量比为(0.5~5) :1000。
[0020] 在本发明中，所述血清的主要作用为微生物的生长提供了生长因子的作用，促进 其的生长。在本发明提供的一个实施例中，所述血清为小牛血清。
[0021] 在本发明中，所述β-内酰胺拮抗剂的主要作用是与氨基糖苷类拮抗剂协同作用， 在保证其自身不抑制微生物生长的前提下，破坏抗生素对微生物生长的抑制作用。在本发 明提供的一个实施例中，所述内酰胺拮抗剂购于广东环凯微生物科技有限公司。
[0022] 在本发明中，所述氨基糖苷类拮抗剂的主要作用是与β-内酰胺拮抗剂协同作用， 在保证其自身不抑制微生物生长的前提下，破坏抗生素对微生物生长的抑制作用。在本发 明提供的一个实施例中，所述氨基糖苷类拮抗剂购于广东环凯微生物科技有限公司。
[0023] 在本发明中，所述基础培养基、血清、β-内酰胺拮抗剂和氨基糖苷类拮抗剂的用量 比800~1300(8):0.5~7(!^) :1~5(1^):1~5(111〇;在本发明提供的一个实施例中，所述基 础培养基、血清、β-内酰胺拮抗剂和氨基糖苷类拮抗剂的用量比800(g) :0.5(mL):l(mL):l (mL) 〇
[0024] 在本发明提供的一个实施例中，所述微生物培养基还包括显色剂。所述显色剂的 作用是与微生物显色，从而利于培养基中微生物菌落的观察。由于多少微生物在生长过程 中均会释放c〇 2,故本发明优选使用的显色剂为酚红。在本发明提供的一个实施例中，所述 显色剂与基础培养基的用量比为0.2~0.5(mL):800~1300(g)
[0025] 在本发明提供的一个实施例中，所述微生物培养基包括水、无机盐、维生素、氨基 酸、葡萄糖、凝固剂、酵母膏、血清、β-内酰胺诘抗剂、氨基糖苷类诘抗剂和显色剂。所述水、 无机盐、维生素、氨基酸、葡萄糖、凝固剂、酵母膏、血清、β-内酰胺拮抗剂、氨基糖苷类拮抗 剂和显色剂的用量比为1000(g) :0.2~3(g):2~10(g) :0.5~5(g): 1 ~10(g):25~40(g): 0.5~5(g):0.5~7(mL):1~5(mL):1~5(mL):0·2~0·5(mL)〇
[0026] 在本发明中，直接将上述各组分混合均匀即可得到本发明提供的微生物培养基。 在本发明提供的一个所述微生物培养基包括、无机盐、维生素、氨基酸、葡萄糖、凝固剂、酵 母膏、血清、β_内酰胺诘抗剂、氨基糖苷类诘抗剂和显色剂的实施例中，所述组成培养基的 各组分可以按照以下方式进行混合：
[0027] 首先将凝固剂、无机盐、酵母膏和水混合，得到第一混合液。然后对第一混合液进 行高温灭菌，灭菌后的第一混合液与葡萄糖、内酰胺拮抗剂和氨基糖苷类拮抗剂混合，得 到第二混合液。所述的第一混合液与葡萄糖、内酰胺拮抗剂和氨基糖苷类拮抗剂混合的 温度优选为45~55°C，更优选为45~50°C。最后将所述第二混合液、血清、维生素和氨基酸 混合均匀，得到本发明提供的微生物培养基。所述第二混合液、血清、维生素和氨基酸混合 的温度优选为35~45°C，更优选为35~40°C。
[0028] 本发明提供的微生物培养基含有基础培养基、血清、β-内酰胺拮抗剂和氨基糖苷 类拮抗剂，通过各组分之间的协同作用保证微生物可以在该培养基中良好生长，减小抗生 素对微生物的生长抑制，从而提高细胞样本中微生物的检出速度和准确度。实验结果表明： 微生物在本发明提供的培养基中可以保持良好的生长态势，该培养基能够有效降低抗生素 对微生物生长的抑制作用。
[0029] 本发明提供了一种上述技术方案所述的微生物培养基在细胞样本微生物检出中 的应用。
[0030] 在本发明提供的应用中，使用所述培养基对细胞样本是否含有微生物进行检出， 该过程具体为:在所述微生物培养基中培养细胞样品，观察培养基中是否出现微生物菌落。