白及种子无菌萌发平衡培养基的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明属于植物组培快繁技术领域；具体是一种白及种子无菌萌发平衡培养基。
【背景技术】
[0002]白及(Bletilla striata)为兰科白及属植物，产陕西南部、甘肃东南部、江苏、安徽、浙江、江西、福建、湖北、湖南、广东、广西、四川和贵州等地。生于海拔100-3200米的常绿阔叶林下、栋树林或针叶林下以及路边草丛或岩石缝中。其干燥块茎是著名中药，用药历史久远。性苦、涩、甘，微寒，入归肺、肝、胃经，有收敛止血、清热消湿、消肿生肌、抗菌等功效。临床上广泛用于治疗体内外出血证如咳血吐血、外伤出血、皮肤皲裂、肺结核咳血、溃疡病出血；疮疡肿毒；烧烫伤；免疫调节；肿瘤等，疗效显著。因此，白及具有很高的药用价值和经济价值。传统上，白及用药主要利用野生资源，随着利用强度的加深，资源已逐渐萎缩，目前白及已被列为国家二级保护植物，资源供求矛盾较为突出。因此，白及人工规模化种植是解决白及资源可持续利用、满足现实需求的必由之路。白及为多年生草本，虽然能开花结果，但种子无胚乳，在自然状态下，极少萌发成苗。传统上，药农主要依靠块茎繁殖，繁殖效率低，块茎消耗量大，种植成本高。国内外学者尝试组培快繁技术进行白及种苗繁育，但传统组培技术存在组培接种环节多，成本高等弊端。因此，如何优化完善白及组培快繁技术，降低种苗生产成本，具有较大的现实意义和价值。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是针对现有技术的不足提供一种白及种子无菌萌发平衡培养基，采用该培养基能利用种子一次接种培养获得根、假鳞茎、叶分化齐全的白及无菌苗，以解决白及种子不含胚乳，自然状态下难以萌发或萌发率极低，传统上通过种子无菌培养生产白及无菌苗，接种步骤较多，生产成本高的问题。
[0004]本发明采用的技术方案:白及种子无菌萌发平衡培养基，所述培养基组成为:包含调整的MS基础培养基、100-150ml/L椰子汁、0-2mg/L 6-BA、0_2mg/L NAA的特定固体培养基。
[0005]一种采用白及种子无菌萌发平衡培养基进行白及种子无菌培养萌发的方法，包括以下步骤:
(I)将采集的白及蒴果用自来水、84消毒液、75%酒精、无菌蒸馏水进行组合消毒灭菌。
[0006](2)将白及种子播种于无菌培养基上。培养基组成为:包含调整的MS基础培养基、100-150ml/L 椰子汁、0-2mg/L 6-BA、0_2mg/L NAA 的特定固体培养基。
[0007](3)将播有种子的培养瓶置于1600-2000LX的光照强度、室温20_30°C的环境条件下，培养4-5个月，获得根、假鳞茎、叶分化齐全的白及组培瓶苗。
[0008](4)将瓶苗转移到栽培基质中进行炼苗栽培；控制白天生长温度为15 — 25° C，空气相对湿度保持在70%以上，室外炼苗上方用塑料薄膜覆盖，并设置遮阳网适当遮阴；
(5)获得健壮种苗。
[0009]采用本发明的白及种子无菌萌发平衡培养基，将白及种子在平衡培养基上进行培养，经过一次接种培养可以获得根、假鳞茎、叶分化齐全的白及无菌苗，萌发率达到90%以上。本发明有效解决了白及种子无菌培养接种步骤较多的问题，降低劳动强度并降低生产成本，可用于白及种苗规模化生产。
【具体实施方式】
[0010]实施例1
(I)于8月底采集成熟未开裂的白及蒴果，用自来水冲洗数次；84消毒液消毒30分钟、75%酒精消毒10分钟、无菌蒸馏水洗3次，进行组合消毒灭菌。
[0011](2)将白及种子播种于无菌培养基上。培养基组成为:包含调整的MS基础培养基、150ml/L椰子汁、Omg/L 6_BA、0mg/L NAA的特定固体培养基；
(3)将播有种子的培养瓶置于光照强度1500-2000LX、温度20-30°C环境条件下，培养4-5个月，获得根、假鳞茎、叶分化齐全的白及组培瓶苗，萌发率达到90% ;
(4)将种苗转移到栽培基质中进行炼苗栽培；控制白天生长温度为15— 25°C，空气相对湿度保持在70%以上，上方用塑料薄膜覆盖，并设置遮阳网适当遮阴；
(5)获得健壮种苗。
[0012]实施例2
(I)于8月底采集成熟未开裂的白及蒴果，用自来水冲洗数次；84消毒液消毒30分钟、75%酒精消毒10分钟、无菌蒸馏水洗3次，进行组合消毒灭菌。
[0013](2)将白及种子播种于无菌培养基上。培养基组成为:包含调整的MS基础培养基、150ml/L椰子汁、0.05mg/L 6_BA、0.lmg/L NAA的特定固体培养基；
(3)将播有种子的培养瓶置于光照强度1500-2000LX、温度20-30°C环境条件下，培养4-5个月，获得根、假鳞茎、叶分化齐全的白及组培瓶苗，萌发率达到90% ;
(4)将种苗转移到栽培基质中进行炼苗栽培；控制白天生长温度为15— 25°C，空气相对湿度保持在70%以上，上方用塑料薄膜覆盖，并设置遮阳网适当遮阴；
(5)获得健壮种苗。
【主权项】
1.白及种子无菌萌发平衡培养基，其特征是:所述培养基组成为:包含调整的MS基础培养基、100-150ml/L椰子汁、0-2mg/L 6-BA、0_2mg/L NAA的特定固体培养基。2.一种采用白及种子无菌萌发平衡培养基进行白及种子无菌培养萌发的方法，其特征是:包括以下步骤: (1)将采集的白及蒴果用自来水、84消毒液、75%酒精、无菌蒸馏水进行组合消毒灭菌； (2)将白及种子播种于无菌培养基上，所述培养基组成为:包含调整的MS基础培养基、100-150ml/L椰子汁、0-2mg/L 6-BA、0_2mg/L NAA的特定固体培养基； (3)将播有种子的培养瓶置于1600-2000LX的光照强度、室温20-30°C的环境条件下，培养4-5个月，获得根、假鳞茎、叶分化齐全的白及组培瓶苗； (4)将瓶苗转移到栽培基质中进行炼苗栽培；控制白天生长温度为15— 25° C，空气相对湿度保持在70%以上，室外炼苗上方用塑料薄膜覆盖，并设置遮阳网适当遮阴； (5)获得健壮种苗。
【专利摘要】本发明公开了一种白及种子无菌萌发平衡培养基。所述培养基组成为：包含调整的MS基础培养基、100-150ml/L椰子汁、0-2mg/L？6-BA、0-2mg/L？NAA的特定固体培养基。采用本发明的白及种子无菌萌发平衡培养基，将白及种子在平衡培养基上进行培养，经过一次接种培养可以获得根、假鳞茎、叶分化齐全的白及无菌苗，萌发率达到90%以上。本发明能有效解决白及种子无菌培养接种步骤较多的问题，降低劳动强度并降低生产成本，可用于白及种苗规模化生产。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105210884
【申请号】CN201510758526
【发明人】张朝阳, 付雨薇, 陈永霞, 何俊梅
【申请人】贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室
【公开日】2016年1月6日
【申请日】2015年11月10日