预处理后，使用中性洗涤剂清洗，然后用蒸馏水冲洗5遍，在无菌条件下将其转至无菌瓶内；用无菌水冲洗3遍后，冲洗干净后用75%的酒精进行消毒20s，用无菌水冲洗5次，再加入0.1%汞溶液放在振荡器上进行振荡消毒5min，然后用无菌水冲洗5次以上，沥干水分；
用无菌手术刀片纵向割开果荚，挑出种子，散铺于萌发培养基中，接种后的种子在18 °(:黑暗条件下培养5 d后，升温至25 °C黑暗条件下继续培养1 d，接着置于光照周期12 h.d-1,光照强度3.2 μπιο?.m 2.s 1的散光条件下培养；
所述萌发培养基的配方为:以MS为基础培养基，蔗糖11.8g/L、琼脂3.9g/L，复方中药提取液 0.5g/L、椰汁 8g/L、6-BA 0.lmg/L, ρΗ6.5 ；
所述复方中药提取液的制备方法为:
如下所述均为质量份； 取6份罗汉果，3份天山雪莲，1份党参，1份淫羊藿，1.7份茯苓，0.8份连翘，上述药物按传统煎煮方法加300份煎煮至30份水时，过滤，紫外线灭菌于3°C备用；
实体镜下观察萌发情况并统计萌动率和萌发率。萌动指种子膨大；萌发指膨大的种子能够形成原球茎。
[0019]结果:培养30d后，萌动率达到99.8%，萌发率高达92.1%，这是对濒危植物佛手参种子育苗研究的重大突破。
[0020]诱导佛手参原球茎分化:
(3)获得佛手参种子萌芽得到的原球茎；
(4)愈伤组织形成:
将佛手参种子萌芽得到的原球茎移至诱导增殖培养基；
所述诱导增殖培养基的配方为:以MS为基础培养基，蔗糖15.8 g/L、琼脂3.9g/L，海藻糖 5 g/L,复方中药提取液 0.3g/L、椰汁 5g/L、6-BA 0.lmg/L、pH6.5 ；
所述复方中药提取液的制备方法为:
如下所述均为质量份；
取5份党参，2份天山雪莲，1份青果，1份淫羊藿，1.6份积雪草，0.5份凌霄花，上述药物按传统煎煮方法加300份煎煮至30份水时，过滤，紫外线灭菌于3°C备用；
(5)待根状茎和愈伤组织长出以后，将根状茎切为长约0.2cm的节段，愈伤组织切成0.2cmX0.2cm小块平铺于新鲜的诱导增殖培养基上；置于温度26°C，光照周期12h.d-1,光照强度22 μπιο?.πι2.s 1的条件下培养，每45 d继代一次，继代3次后的增殖倍数为4.1，分化率高达81.2%。
[0021]再生植株形成与生长
(6)分化出芽后，很快在芽基部长出多条根，这时转入壮苗培养基:
所述壮苗培养基的配方为:以MS为基础培养基，蔗糖20.lg/L、琼脂3.9g/L，胶原蛋白
0.2g/L、海藻糖 4g/L、椰汁 6g/L、6-BA 0.2mg/L、ρΗ6.5 ；
置于温度26°C，光照周期12 h.d-1,光照强度25 μπιο?.m 2.s 1的条件下培养；
壮苗培养5周后，分化的芽发育形成健康的小苗，存活率为92.3%。
[0022]实施例3:
一种佛手参的快速繁殖方法，其特征在于，步骤如下:
种子萌发:
(1)预处理:
取佛手参中度成熟种子，未开裂且易与胎座剥离的黄色种子，用流水冲洗30min，然后加入预处理液中，置于恒温超声波发生器(功率:25KHz)，在28°C恒温处理3min ;
所述预处理液的配方为:苹果酸lg/L，漆酶0.8g/L (酶活为5000u/g)，甘氨酸2g/L,其余为纯净水；
(2)萌发培养基培养:
预处理后，使用中性洗涤剂清洗，然后用蒸馏水冲洗5遍，在无菌条件下将其转至无菌瓶内；用无菌水冲洗3遍后，冲洗干净后用75%的酒精进行消毒20s，用无菌水冲洗5次，再加入0.1%汞溶液放在振荡器上进行振荡消毒5min，然后用无菌水冲洗5次以上，沥干水分； 用无菌手术刀片纵向割开果荚，挑出种子，散铺于萌发培养基中，接种后的种子在18 °(:黑暗条件下培养5 d后，升温至25 °C黑暗条件下继续培养1 d，接着置于光照周期12 h.d-1,光照强度3.2 μπιο?.m 2.s 1的散光条件下培养；
所述萌发培养基的配方为:以MS为基础培养基，蔗糖11.8g/L、琼脂3.9g/L，复方中药提取液 0.5g/L、椰汁 8g/L、6-BA 0.lmg/L, ρΗ6.5 ；
所述复方中药提取液的制备方法为:
如下所述均为质量份；
取6份罗汉果，3份天山雪莲，1份党参，1份淫羊藿，1.7份茯苓，0.8份连翘，上述药物按传统煎煮方法加300份煎煮至30份水时，过滤，紫外线灭菌于3°C备用；
实体镜下观察萌发情况并统计萌动率和萌发率。萌动指种子膨大；萌发指膨大的种子能够形成原球茎。
[0023]结果:培养30d后，萌动率达到99.8%，萌发率高达92.1%，这是对濒危植物佛手参种子育苗研究的重大突破。
[0024]诱导佛手参原球茎分化:
(3)获得佛手参种子萌芽得到的原球茎；
(4)愈伤组织形成:
将佛手参种子萌芽得到的原球茎移至诱导增殖培养基；
所述诱导增殖培养基的配方为:以MS为基础培养基，蔗糖15.8 g/L、琼脂3.9g/L，海藻糖 5 g/L,复方中药提取液 0.3g/L、椰汁 5g/L、6-BA 0.lmg/L、pH6.5 ；
所述复方中药提取液的制备方法为:
如下所述均为质量份；
取5份党参，2份天山雪莲，1份青果，1份淫羊藿，1.6份积雪草，0.5份凌霄花，上述药物按传统煎煮方法加300份煎煮至30份水时，过滤，紫外线灭菌于3°C备用；
(5)待根状茎和愈伤组织长出以后，将根状茎切为长约0.2cm的节段，愈伤组织切成0.2cmX0.2cm小块平铺于新鲜的诱导增殖培养基上；置于温度26°C，光照周期12h.d-1,光照强度22 μπιο?.πι2.s 1的条件下培养，每45 d继代一次，继代3次后的增殖倍数为4.1，分化率高达81.2%。
[0025]再生植株形成与生长
(6)分化出芽后，很快在芽基部长出多条根，这时转入壮苗培养基:
所述壮苗培养基的配方为:以MS为基础培养基，蔗糖19.4g/L、琼脂3.9g/L，胶原蛋白
0.4g/L、海藻糖 3g/L、椰汁 6g/L、6-BA 0.3mg/L、pH6.5 ；
置于温度26°C，光照周期12 h.d-1,光照强度25 μπιο?.m 2.s 1的条件下培养；
壮苗培养5周后，分化的芽发育形成健康的小苗，存活率为85.7%。
[0026]可见，本发明是对佛手参育苗的重大突破，其可分化得到大量健康的小苗，存活率为 78.1-92.3%ο
[0027]以上所述，仅为本发明较佳的【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种佛手参的快速繁殖方法，其特征在于，步骤如下: 种子萌发: (1)预处理: 取佛手参中度成熟种子，未开裂且易与胎座剥离的黄色种子，用流水冲洗30min，然后加入预处理液中，置于恒温超声波发生器(功率:25KHz)，在28°C恒温处理3min ; 所述预处理液的配方为:苹果酸lg/L，漆酶0.8g/L (酶活为5000u/g)，甘氨酸2g/L,其余为纯净水； (2)萌发培养基培养: 预处理后，使用中性洗涤剂清洗，然后用蒸馏水冲洗5遍，在无菌条件下将其转至无菌瓶内；用无菌水冲洗3遍后，冲洗干净后用75%的酒精进行消毒20s，用无菌水冲洗5次，再加入0.1%汞溶液放在振荡器上进行振荡消毒5min，然后用无菌水冲洗5次以上，沥干水分； 用无菌手术刀片纵向割开果荚，挑出种子，散铺于萌发培养基中，接种后的种子在18 °(:黑暗条件下培养5 d后，升温至25 °C黑暗条件下继续培养1 d，接着置于光照周期12 h.d-1,光照强度3.2 μπιο?.m 2.s 1的散光条件下培养； 所述萌发培养基的配方为:以MS为基础培养基，蔗糖11.8g/L、琼脂3.9g/L，复方中药提取液 0.5g/L、椰汁 8g/L、6-BA 0.lmg/L、ρΗ6.5 ； 所述复方中药提取液的制备方法为: 如下所述均为质量份； 取6份罗汉果，3份天山雪莲，1份党参，1份淫羊藿，1.7份茯苓，0.8份连翘，上述药物按传统煎煮方法加300份煎煮至30份水时，过滤，紫外线灭菌于3°C备用； 诱导佛手参原球茎分化: (3)获得佛手参种子萌芽得到的原球茎； (4)愈伤组织形成: 将佛手参种子萌芽得到的原球茎移至诱导增殖培养基； 所述诱导增殖培养基的配方为:以MS为基础培养基，蔗糖15.8 g/L、琼脂3.9g/L，海藻糖 5 g/L,复方中药提取液 0.3g/L、椰汁 5g/L、6-BA 0.lmg/L、pH6.5 ； 所述复方中药提取液的制备方法为: 如下所述均为质量份； 取5份党参，2份天山雪莲，1份青果，1份淫羊藿，1.6份积雪草，0.5份凌霄花，上述药物按传统煎煮方法加300份煎煮至30份水时，过滤，紫外线灭菌于3°C备用； (5)待根状茎和愈伤组织长出以后，将根状茎切为长约0.2cm的节段，愈伤组织切成0.2cmX0.2cm小块平铺于新鲜的诱导增殖培养基上；置于温度26°C，光照周期12h.d-1,光照强度22 μπιο?.πι2.s 1的条件下培养，每45 d继代一次，继代3次后的增殖倍数为4.1，分化率高达81.2% ; 再生植株形成与生长 (6)分化出芽后，很快在芽基部长出多条根，这时转入壮苗培养基: 所述壮苗培养基的配方为:以MS为基础培养基，蔗糖18.8-20.lg/L、琼脂3.9g/L，胶原蛋白 0.2-0.5g/L、海藻糖 3-4g/L、椰汁 6g/L、6_BA 0.2-0.3mg/L、ρΗ6.5 ；置于温度26°C，光照周期12 h.d-1,光照强度25 μπιο?.m 2.s 1的条件下培养。2.权利要求1所述的提高濒危植物佛手参种子萌芽率的方法，其特征在于:壮苗培养5周后，分化的芽发育形成健康的小苗，存活率为78.1-92.3%。
【专利摘要】本发明公开了一种佛手参的快速繁殖方法，其利用多种物理和生物手段，成本低廉，操作方便，可以大幅提高种子的萌发率，原球茎的分化率，而且可以进行壮苗培养，炼苗后转入温室最终存活率高。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105409771
【申请号】CN201510844349
【发明人】谢再法, 姚凤鸣, 郭锋燕
【申请人】浙江拓普药业股份有限公司
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2015年11月30日