静态冷保存方法要高，但随着灌流时间延长，灌流液中的各指标逐渐下降、比传统的静态冷保存方法要低。表明本发明的离体肝脏灌流系统和灌流方法比传统的静态冷保存方法更适用于对离体肝脏进行较长时间的保存。
[0132]实施例4采用HTK作为灌流液进行离体肝脏灌流
[0133]采用与实施例2相同的方法对家猪离体肝脏进行灌流，但采用HTK液作为灌流液。
[0134]对比例3
[0135]采用与实施例2相同的方法获取家猪离体肝脏，将家猪离体肝脏置入HTK液中，于4°(:下保存。
[0136]检测例3
[0137]采用与检测例I相同的方法，比较实施例4和对比例3的保存方法对离体肝脏的保护功效，比较结果见图4A、图4B、图4C。
[0138]由图4A、图4B、图4C可见，采用HTK液作为灌流液时，本发明的离体肝脏灌流系统和灌流方法，在灌流的初始阶段，灌流液中ALT、AST和LDH这三个生化指标虽然比传统的静态冷保存方法要高，但随着灌流时间延长，传统的静态冷保存方法ALT、AST和LDH这三个生化指标急剧升高。表明本发明的离体肝脏灌流系统和灌流方法比传统的静态冷保存方法更适用于对离体肝脏进行较长时间的保存。
[0139]检测例4
[0140]实施例2、实施例3、实施例4分别灌流6小时，然后切除部分肝脏组织，分别检测肝脏组织中MDA (丙二醛)和MPO (髓过氧化物酶)的含量;对比例1、对比例2、对比例3静态保存6小时，然后切除部分肝脏组织，分别检测肝脏组织中MDA和MPO的含量;检测结果分别见图5A、图5B、图5C、图和图5E。
[0141]由图5A和图5B可见，利用实施例1的灌流系统、采用Saline对离体肝脏进行灌流后，经离体肝脏内循环后肝脏组织中MDA和MPO的含量比相应静态保存液要低(分别仅约为对比例 I 的 39.3%、72.2%)。
[0142]由图5C和图5D可见，利用实施例1的灌流系统、采用UW液对离体肝脏进行灌流后，经离体肝脏内循环后肝脏组织中MDA和MPO的含量比相应静态保存液要低(分别仅约为对比例2的38.7%、76.5%)。
[0143]由5E可见，利用实施例1的灌流系统、采用HTK液对离体肝脏进行灌流后，经离体肝脏内循环后肝脏组织中MDA的含量比相应静态保存液要低(仅约为对比例3的42.9%)。
[0144]以上检测结果均表明无论采用何种灌流液，本发明的离体肝脏灌流系统和灌流方法都能显著抑制氧化损伤及中性粒细胞浸润。
[0145]实施例5在亚低温条件下进行灌流
[0146]采用与实施例2相同的方法对家猪离体肝脏进行灌流，但将灌流液温控槽内的灌流液(HTK液)温度调节至20°C。
[0147]对比例4
[0148]采用与实施例2相同的方法获取家猪离体肝脏，将家猪离体肝脏置入HTK液中，于20 °C下保存。
[0149]检测例5
[0150]采用与检测例I相同的方法，比较实施例5和对比例4的保存方法对离体肝脏的保护功效，比较结果见图6A、图6B、图6C。
[0151]采用与检测例4相同的方法，检测经实施例5和对比例4保存后肝脏组织中MPO的含量，比较结果见图6D。
[0152]由图6A、图6B、图6C可见，在20°C下采用HTK液作为灌流液时，本发明的离体肝脏灌流系统和灌流方法，在整个灌流过程中，灌流液中ALT、AST和LDH这三个生化指标均比对比例4要低(分别仅为对比例4的约28.6 %、25 %、18.8 % )。
[0153]由图6D可见，在20°C下采用HTK液作为灌流液时，经本发明的离体肝脏灌流系统和灌流方法保存的离体肝脏组织中MPO的含量远远低于对比例4(仅约为对比例4的7% )。
[0154]上述检测结果表明本发明的离体肝脏灌流系统和灌流方法在亚低温条件下也能有效保存离体肝脏，保存效果大大优于传统的静态保存方法。
【主权项】
1.一种离体肝脏灌流系统，其特征在于，包括: 用于盛装灌流液的灌流液温控槽； 用于放置离体肝脏的离体肝保存槽； 连接在灌流液温控槽和离体肝保存槽之间、且用于向所述离体肝脏的门静脉输送灌流液的门静脉灌流通路； 连接在灌流液温控槽和离体肝保存槽之间、且用于向所述离体肝脏的肝动脉输送灌流液的肝动脉灌流通路； 连接在灌流液温控槽和离体肝保存槽之间、且用于将从离体肝脏流出的灌流液回收至灌流液温控槽中的灌流液回流通路； 与所述离体肝保存槽相连、且用于收集胆汁的胆汁收集器。2.如权利要求1所述的离体肝脏灌流系统，其特征在于，所述门静脉灌流通路包括连接在灌流液温控槽和离体肝保存槽之间的门静脉进液管，所述门静脉进液管上设有: 与所述灌流液温控槽相连、用于除去灌流液中的气泡的第一除泡模块； 与所述第一除泡模块相连、用于驱使灌流液进入门静脉进液管的门静脉微栗； 与所述门静脉微栗相连、用于监测门静脉进液管内灌流液压力和流速的第一监测模块； 用于联通门静脉进液管和离体肝脏门静脉的第一联接件； 所述离体肝脏灌流系统还包括用于接收所述第一监测模块输出的信号、并根据该信号调节门静脉进液管内灌流液压力和流速的第一控制模块。3.如权利要求2所述的离体肝脏灌流系统，其特征在于，所述第一联接件为螺旋形管或静脉留置针。4.如权利要求2或3所述的离体肝脏灌流系统，其特征在于，所述门静脉进液管上还设有处于第一监测模块下游的第一采样管。5.如权利要求1所述的离体肝脏灌流系统，其特征在于，所述肝动脉灌流通路包括连接在灌流液温控槽和离体肝保存槽之间的肝动脉进液管，所述肝动脉进液管上设有: 与所述灌流液温控槽相连、用于除去灌流液中的气泡的第二除泡模块； 与所述第二除泡模块相连、用于驱使灌流液进入肝动脉进液管的肝动脉微栗； 与所述肝动脉微栗相连、用于监测肝动脉进液管内灌流液压力和流速的第二监测模块； 用于联通肝动脉进液管和离体肝脏肝动脉的第二联接件； 所述离体肝脏灌流系统还包括用于接收所述第二监测模块输出的信号、并根据该信号调节肝动脉进液管内灌流液压力和流速的第二控制模块。6.如权利要求1所述的离体肝脏灌流系统，其特征在于，还包括与所述灌流液温控槽相连、用于向灌流液中充氧的氧合模块。7.如权利要求1所述的离体肝脏灌流系统，其特征在于，所述灌流液回流通路包括联通离体肝保存槽和灌流液温控槽的灌流液回收管，该灌流液回收管上设有回流微栗； 所述灌流液回收管的进液端带有联通灌流液回收管和离体肝脏肝静脉的第三联接件。8.如权利要求7所述的离体肝脏灌流系统，其特征在于，所述灌流液回收管上设有第三采样管。9.一种离体肝脏灌流方法，其特征在于，使用如权利要求1?8任一所述的离体肝脏灌流系统实现，包括: (1)将离体肝脏置入离体肝保存槽中，将灌流液温控槽内的灌流液温度调节至4?6°C、20 ?25°C 或 36 ?37°C; (2)接通门静脉灌流通路、肝动脉灌流通路和灌流液回流通路，使门静脉灌流通路内灌流液流速维持在40?200ml/min，灌流液压力维持在4?1mmHg;使肝动脉灌流通路内灌流液流速维持在1?100ml/min，灌流液压力维持在20?30mmHg ； (3)灌流过程中，采用胆汁收集器收集胆汁。10.如权利要求9所述的离体肝脏灌流方法，其特征在于，步骤(2)中，使门静脉灌流通路内灌流液流速维持在80?150ml/min，灌流液压力维持在6?8mmHg;使肝动脉灌流通路内灌流液流速维持在40?80ml/min，灌流液压力维持在20?25mmHg。
【专利摘要】本发明公开了一种离体肝脏灌流系统和离体肝脏灌流方法。该系统包括：灌流液温控槽；离体肝保存槽；用于向所述离体肝脏的门静脉输送灌流液的门静脉灌流通路；用于向所述离体肝脏的肝动脉输送灌流液的肝动脉灌流通路；用于将从离体肝脏流出的灌流液回收至灌流液温控槽中的灌流液回流通路；与离体肝保存槽相连、且用于收集胆汁的胆汁收集器。本发明利用两个通路分别从门静脉和肝动脉处对离体肝脏的进行灌流，适用于离体肝脏保存过程中存在的损伤防护，可显著缓解肝脏再灌注损伤，具有较强的可靠稳定性及重复性；本发明可以在低温、亚低温、常温条件下对离体肝脏进行有效保存，改变了现有技术需要在低温保存、不能满足边缘供肝保存要求的局限性。
【IPC分类】A01N1/02
【公开号】CN105660604
【申请号】CN201610080086
【发明人】李建辉, 谢海洋, 贾俊君, 胡贵权, 陈旭东, 郑骏, 姜骊, 周燕飞, 张静, 周琳, 郑树森
【申请人】浙江大学
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年2月4日