生物活性大分子的粘膜或肠给药的制作方法

专利名称：：生物活性大分子的粘膜或肠给药的制作方法生物活性大分子的粘膜或肠给药发明领域和背景本发明涉及给予生物活性大分子的方法和组合物，更具体地说，本发明涉及培养的植物细胞的肠(例如口服)或粘膜给药，所述培养的植物细胞表达用于预防或治疗应用的生物活性的重组肽或多肽。生物技术的革新已导致蛋白和肽治疗剂以及其它大分子药物的数量显著增加。目前在美国已批准了84种以上的大分子上市销售，几乎有350多种处于临床开发中。此外，预期基因组和蛋白质组技术的新近进展将继续增加大分子治疗候选物的产品线。但是，处理大分子通常面临许多挑战，药物开发者必须克服这些挑战，以便成功地将这些化合物开发成安全有效的治疗剂。例如，蛋白和肽往往会被蛋白水解酶破坏，或者就较高分子量的蛋白而言，可产生中和抗体。而且，这些分予可表现出低溶解性或弱稳定性，导致储存期限短。结果，大分子治疗剂经常快速失去其有效性，或需要频繁给药。这些因素不仅影响治疗成本，而且影响患者认同和依从，由此影响其治疗有用性。口服给药基于蛋白和肽的药物传递的最常见方法是利用侵入性药物传递方法，例如注射和灌输。尽管这些方法是给予用于系统性疾病的大分子药物的主要模式，但它们也是患者和医师最不期望的。这种传递方法的明显不利之处在于患者的认同和依从，将大部分大分子开发限制在其中相关成本或不便没有胜过使用侵入性给药途径需求的适应症。作为用于系统传递药物的非侵入性方法，口服给药提供了许多优势使用容易且方便、接触广泛空间的吸收表面、高度血管化、相对长的保留时间、失活的非代谢成分的自然清除以及更多优势。尽管如此，口服给予大分子药物的研究还没有指明匹配该途径潜力的令人满意的效力水平。其中一些障碍是丸剂和其它固定制剂的消化难度、生物活性大分子在胃肠道中的不稳定性、生物活性制剂在粘膜中的浓度以及胃肠膜对生物活性大分子的透性。在生物活性大分子达到它们的预期靶组织之前可失活或降解它们的胃中高酸性和酶降解使生物活性物质的口服给药途径复杂化。此外，生物活性大分子的有效浓度在胃肠道中遭遇的大空间中难以实现。因此，为有效起见，大部分药物必须被保护，以对抗上胃肠道中的吸收和/或环境，然后被突然释放道肠或结肠中。在医药工业中正使用多种策略来克服与口服或肠给予治疗性大分子如蛋白相关的问题。这些策略包括与载体共价连接、:没计用于在苛刻条件(例如胃和上胃肠道)中减慢或阻止活性成分释放的包衣和制剂(pH敏感性包衣、聚合物和多层包衣、嚢化、定时释放制剂、生物粘附系统、渗透控制型传递系统等)。但是，这种制剂中的生物活性物质的制备需要复杂和昂贵的方法。还使用增加粘膜处摄取的粘膜粘合剂和穿透增强剂(水杨酸盐、脂质-胆汁盐-混合胶束、甘油、酰基肉碱等)。但是，它们中的一些可引起严重的局部毒性问题，例如局部刺激、表皮层磨损和组织炎症。其它改善口服传递的策略包括混合生物活性制剂与蛋白酶抑制剂，例如抑肽酶、大豆胰蛋白酶抑制剂和阿马他定；但是，酶抑制剂不是选择性的，还抑制内源性大分子，引起不希望的副作用。因此，目前生物活性大分子的口服给药方法不能确保预期生物活性在耙组织处的有效传递。植物生物药物哺乳动物细胞自然地被认为适于表达哺乳动物基因。但是，其应用面临许多问题高培养成本，以及最要担心的污染。用体外哺乳动物细胞培养物获得的蛋白表达需要非常大的空间，引致高成本。在转基因动物(小鼠、绵羊和牛)乳液中生产重组蛋白可使某些生产成本降低。但是，仍有伦理问题以及病毒和亚病毒污染(朊病毒等)的问题。有利于植物系统作为动物源肽和多肽的来源的因素包括低成本的生物质生产；病毒、病原体和毒素的低污染风险；植物细胞折叠和组装多聚体蛋白的能力；就口服传递而言，下游处理要求低以及伦理问题减少。因此，将编码生物活性肽和/或多肽的哺乳动物基因转基因入植物细胞中可提供的理想途径，以降低的生产成本大量生产新重组生物活性分子，且没有动物细胞病毒或亚病毒污染的许多风险。在1983年，几个实验室发现，有可能将异源基因转移入植物细胞基因组中(Bevan等，1983;Herrera-Estrella等，1983a和b),并由这些遗传修饰过的细胞再生转基因植物。通常使用两种转化方法在植物中生产重组药物。在第一种方法中，使用农杆菌04gro6a"en'wm)介导的转化、颗粒轰击或其它标准转化技术生产稳定转化的转基因植物。烟草(7V/co"朋atokcwm)广泛用作模式表达系统，但已使用其它植物，包4舌本生》因(iWcoriawa6e/Zzaw/a"o)、4以南齐(/4/^6/<^0尸5&^2a//awa)、番痴、香蕉、芜菁、黑眼豆(black-eyedbean)、油菜(oilseedrape)、埃塞俄比亚芥菜、马铃薯、水稻、小麦和玉米。第二种策略是用重组病毒感染非转基因植物，所述重组病毒在其于宿主中复制时表达转基因。最常用的两种宿主-病毒系统是烟草和烟草花叶病毒(TMV)或豇豆与豇豆花叶病毒(CPMV)。在植物转基因的最初突破之后，在植物细胞和/或转基因植物中生产哺乳动物重组蛋白已获得许多优势。该领域中最先的真正意义的结果之一是在转基因烟草植物中生产抗体("植物抗体")。许多诊断性和治疗性"植物抗体"目前正变成可用的抗龋齿的烟草抗链球菌分泌性IgA(小鼠Guy的13IgG);诊断性苜蓿抗-人IgG-鼠IgG信号肽-C5-l(IgG);抗癌小麦和水稻癌胚抗原-鼠IgG信号肽；KDEL-ScFvT84.66(ScFv);抗癌烟草癌胚抗原-TMV前导序列；鼠IgG信号肽；KDEL-T84.66(IgG)(用农杆菌浸润瞬时表达)；烟草B细胞淋巴瘤治疗；独特型疫苗-水稻a-淀粉酶-38C13(scFv);烟草抗结肠癌表面抗原-鼠IgG信号肽；KDEL-C017-1A(IgG)以及大豆抗单纯疱渗病毒2-烟草伸展蛋白信号肽-抗-HSV-2(IgG)。在1990年，Sijmons和同事们在烟草和马铃薯的细胞中表达了人血清白蛋白基因。在马铃薯叶、茎干和块茎中获得约为总蛋白的0.02%的人血清白蛋白水平。以前已在植物中生产的其它哺乳动物重组蛋白包括人血红蛋白、抗胰蛋白酶蛋白酶、蛋白酶抑制剂、胶原蛋白和乳铁蛋白(参见Legrand等的美国专利申请第20030229925号；Lenee等的20040072317;以及Gruber等的20030096973);乙型肝炎表面抗原、干扰素、霍乱毒素、人表皮生长因子(EGF)、促红细胞生成素、h-GM-CSF和白介素。另外，已开发了用于接种和免疫的重组植物抗原("植物抗原，，)。几个公司已得到商品化(Prodigene，Inc.的TrypZean和AproliZeanTM)或处于临床实马全中[PlanetBiotechnology,Inc.(DoxoRxTM和CaroRxTM)和MeristemTherapeutics(用于CF的重组人脂酶"Meripase")]的植物源药物。在大多数情况下，植物源的生物活性重组蛋白需要由宿主组织分离。多种方法可用于将重组蛋白导入特定植物组织(例如种子、叶、根、块茎等)和细胞器(例如叶绿体)，以便获得高水平的表达，并提供最便利的植物物质用于提取。重组蛋白也可以是分泌性的；但是，分泌的重组蛋白(例如分泌的"植物抗体")比保留在植物组织中的重组蛋白更倾向于降解。要知晓的是，之前已提出给予表达重组蛋白的全林或植物细胞培养物(参见例如拟南芥中的重组蛋白表达，美国专利申请20030084484)。但是，没有提供支持重组蛋白向耙组织转运的实验数据。植物细胞培养物植物细胞培养物可用于生产重组肽和多肽。植物细胞可在生物反应器中的营养培养基中于受控的条件下无菌生长，并可由生物质或培养液收集外源蛋白。已在植物细胞培养物中生产了包括抗体和抗体片段、酶、白介素、干扰素、人激素、生长因子、血液因子、疫苗、核糖体失活蛋白、蓖麻毒素和人抗胰蛋白酶在内的重组生物活性大分子(关于综述，参见Doran，CurrentOpinioninBiotech2000;11;199-204)。尽管农业系统可提供整体更高的收率，但体外细胞培养提供了操作外源蛋白水平的能力更大、整体生长周期更短以及用于调节目的的生长环境更可控的优势。最近，本发明人已公开了一种用于植物细胞的特有高产一次性培养系统，其已被表明对在培养物中生产生物活性肽和多肽有效(参见PCTIL/2005/000228,该文献通过引用结合到本文中)，证实生产生物活性的人(3干扰素、人X因子、人葡糖脑苷脂酶和传染性法氏嚢病VPII蛋白。目前正评价重组植物细胞源的葡糖脑苷脂酶作为高歇病(Gaucherdisease)治疗的未来应用。植物源重组生物活性大分子的口服给药自从早期的农业遗传工程以来，就一直在寻求可食用的转基因植物提供重组生物活性制剂的用途。业已研究了可食用叶类作物(例如莴苣)、谷物(例如玉米、水稻、大麦和小麦)、豆科植物(例如大豆和豌豆)以及水果和蔬菜(例如马铃薯、胡萝卜、番茄和香蕉)的转化对重组疫苗的有效传递。已成功证实经表达抗原性蛋白基因的可食用转基因植物(玉米、马铃薯)进行口服DNA接种。已在喂祠转基因马铃薯的小鼠中检测到抗霍乱毒素B亚单位的粘膜和血清免疫应答，在摄取转基因马铃薯块茎的人中检测到抗LT-B肠毒素抗原的粘膜和血清免疫应答(Mason等，Vaccine1998;16:1336-1340)，在摄取转基因羽扇豆和莴苣(Kapusta等FASEBJ，1999;13:1796-99)以及转基因粘果酸浆(Gao等；WJourGastroent.2003;9:996-1002)的人和小鼠中检测到抗乙肝表面抗原的粘膜和血清免疫应答。最近已在番茄中检验了多组分可食用HIV和HBV疫苗(Shchelkunov等，Vestn.Ross.AkadMedNauk2004;11:50-55);最近已成功检验了抗霍乱、轮状病毒和ETEC的多组分可食用马铃薯疫苗(关于综述，参见Korban等，JAmColNutr2002;21:212S-217S)。Webster等(JofVirol,2002;76:7910-12)已报道用转基因马铃薯源的麻疹病毒血细胞凝集素蛋白疫苗成功地免疫和加强小鼠抗麻渗。Smart等(JImmunol2003;171:2116-26)已表明，喂饲表达向曰葵种子抗原的转基因羽扇豆可提供给小鼠抗实验性哞喘的保护作用。业已提出了多种制备和使用口服给药用的转基因植物物质的方法。Kirk等(美国专利申请号20040175440)公开了表达异源蛋白的转基因植物的稳定脱水匀浆物的制备，以及所述匀浆物的口服给药，所述匀浆物包含重组受精作用相关肽和多肽，例如透明带糖蛋白、GnRH、LHRH、LH、LDH和抗津奇子抗原，用于诱导有效的避孕抗体。Brandle等(2002年5月3日申请的美国专利申请号02/137,647)公开了用作物)，以及提取生物活性分子的方法，所述生物活性分子通过刺激对活性自身抗原的口服耐受用于调节自身免疫病，例如炎性肠病(IBD)和糖尿病。但是，上述现有技术都没有教导经口服给予表达生物'活性重组大分子的转基因植物细胞培养物，将重组肽和/或多肽系统给予至血液循环和/或内脏器官或器官系统。因此，对于经给予转基因植物细胞进行生物活性大分子肠(例如口服)或粘膜给药的方法和组合物仍有广泛公知的需要，得到这些方法和组合物应是高度有利的。发明概述按照本发明的一个方面，一是供一种将生物活性形式的生物活性重组生物分子系统传递给有需要的受试者的方法，该方法包括经口或粘膜给予受试者治疗有效量的植物细胞，所述植物细胞表达外源生物活性重组生物分子，由此将生物活性形式的生物活性重组生物分子系统传递给受试者。按照本发明的另一方面，4是供一种将生物活性形式的生物活性重组生物分子局部传递给有需要的受试者的方法，该方法包括经口或粘膜给予受试者治疗有效量的植物细胞，所述植物细胞表达外源生物活性重组生物分子，由此将生物活性形式的生物活性重组生物分子局部传递给受试者。按照下述本发明优选实施方案的其它特征，植物细胞包含基本完整的细胞壁。按照所述优选实施方案的再其它特征，植物细胞包含基本完整的细胞膜。按照所述优选实施方案的再其它特征，植物细胞包含基本完整的细胞壁和细胞膜。按照所述优选实施方案的再其它特征，植物细胞作为分离的细胞给予。按照所述优选实施方案的再其它特征，植物细胞作为脱水的植物细月包纟合予。按照本发明的又一方面，4是供一种药物组合物，其包含作为活性成分的植物细胞和药物可接受的载体，所述植物细胞表达外源生物活性的重组生物分子。按照所述优选实施方案的再其它特征，药物可接受的载体是非免疫原性载体。按照所述优选实施方案的再其它特征，药物可接受的载体不刺激肠道、淋巴组织。按照本发明的又一方面，」提供用于在受试者中局部传递生物活性生物分子的单位剂型，该单位剂型包含治疗有效量的表达外源生物活性生物分子的植物细胞。按照本发明的又一方面，提供用于在受试者中系统传递生物活性生物分子的单位剂型，该单位剂型包含治疗有效量的表达外源生物活性生物分子的植物细胞。按照所述优选实施方案的再其它特征，单位剂型配制用于口服给药。按照所述优选实施方案的再其它特征，单位剂型配制用于粘膜给药。按照所述优选实施方案的再其它特征，植物细胞包括脱水植物细胞。按照本发明的又一方面，^是供一种在有需要的受试者中治疗疾病的方法，所述方法包括经肠或粘膜给予受试者治疗有效量的植物细胞，所述植物细胞表达外源生物活性生物分子，由此治疗受试者中的疾病。按照所述优选实施方案的再其它特征，生物活性生物分子包括重组人葡糖脑苷脂酶蛋白，所述疾病是高歇病(Gaucherdisease)。按照所述优选实施方案的再其它特征，生物活性生物分子包括重组人葡糖脑芬脂酶蛋白，所述疾病是法布里病(Fabrydisease)。按照所述优选实施方案的再其它特征，生物活性生物分子包括重组人葡糖脑苦脂酶蛋白，所述疾病是癌症按照所述优选实施方案的再其它特征，所述疾病是系统疾病。按照所述优选实施方案的再其它特征，所述疾病是慢性疾病。按照所述优选实施方案的再其它特征，所述疾病是急性疾病。按照本发明的又一方面，提供表达外源生物活性生物分子的植物细胞用于生产药物的应用。按照所述优选实施方案的再其它特征，植物细胞包含基本完整的细胞壁。按照所述优选实施方案的再其它特征，植物细胞包含基本完整的细胞膜。按照所述优选实施方案的再其它特征，植物细胞包含基本完整的细胞壁和细胞膜。按照所述优选实施方案的再其它特征，植物细胞作为分离的细胞给予。按照所述优选实施方案的再其它特征，植物细胞作为脱水植物细胞给予。按照所述优选实施方案的再其它特征，重组生物分子是多核苷酸或多肽。按照所述优选实施方案的再其它特征，重组生物分子是多肽。按照所述优选实施方案的再其它特征，所述重组生物分子选自治疗性生物分子、i貪断性生物分子和药妆品(cosmeceutical)。按照所述优选实施方案的再其它特征，脱水植物细胞还含赋形剂。按照所述优选实施方案的再其它特征，植物细胞包括苜蓿植物细胞。按照所述优选实施方案的再其它特征，植物细胞包括由烟草获得的才直物细月包。按照所述优选实施方案的再其它特征，植物细胞包括得自烟草细胞系的植物细胞。按照所述优选实施方案的再其它特征，植物细胞包括植物根细胞。按照所述优选实施方案的再其它特征，植物根细胞选自发根农杆菌(Jgro6ac&n'wwn'feoge"es)转^b的才艮细月包、芽菜细月包、姜纟田月包、辣才艮细胞和胡萝卜纟田胞。按照所述优选实施方案的再其它特征，植物根细胞是胡萝卜细胞。按照所述优选实施方案的再其它特征，重组生物分子选自原核蛋白、真核蛋白、嵌合蛋白、病毒蛋白。按照所述优选实施方案的再其它特征，病毒蛋白是传染性法氏嚢病病毒的病毒蛋白VPII。按照所述优选实施方案的再其它特征，真核蛋白是人干扰素P。按照所述优选实施方案的再其它特征，真核蛋白是人凝血因子。按照所述优选实施方案的再其它特征，真核蛋白是人X因子。按照所述优选实施方案的再其它特征，真核蛋白是人溶酶体酶。按照所述优选实施方案的再其它特征，真核蛋白是人葡糖脑苷脂酶。按照所述优选实施方案的再其它特征，真核蛋白是人oc半乳糖苷酶。按照所述优选实施方案的再其它特征，真核蛋白是人生长激素。按照所述优选实施方案的再其它特征，真核蛋白是FSH。按照所述优选实施方案的再其它特征，真核蛋白是乙酰胆碱酯酶。按照所述优选实施方案的再其它特征，重组生物分子是非免疫原性的。按照所述优选实施方案中的再其它特征，药物配制用于系统传递。按照所述优选实施方案的再其它特征，药物配制用于局部传递。本发明通过提供适于系统或局部传递的用于粘膜或肠给予生物活性大分子的方法和组合物，成功地解决了目前已知做法的缺点。除非另有定义，否则本文^f吏用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属领域的一般技术人员的通常理解相同的含义。尽管类似或等适宜的方法和材料。在相抵触时，以本发明的说明书包括定义为准。另外，所述材料、方法和实施例仅是说明性的，无限制意图。附图简述本文仅通过实施例并参照附图描述本发明。现在要具体地详细谈到附图，要强调的是，显示的细节仅作为示例和用于说明性论述本发明优选实施方案的目的，提供这些细节是为了提供一般认为最有用和最容易理解的本发明原则和概念方面的描述。就此而言，没有尝试展现出比基本理解本发明所需更详细的本发明结构细节，说明书连带附图使本领域技术人员更显而易见如何可实施本发明的几种形式。在附图中图1是条形图，图示了喂词表达重組蛋白的胡萝卜培养物的小鼠肝脏中的GCD活性。图2是条形图，图示了与乡合予原初BY2细胞的动物相比，给予表达hGH的BY2细胞的垂体切除大鼠中提升的hGH水平。图3a-b是条形图，图示了口服给予表达hGCD的植物细胞的大鼠脾脏(图3a)和肝脏(图3b)中4是升的hGCD水平。峰值水平在给药后1小时是显著的。图4是条形图，图示了口服给予表达FSH的植物细胞的大鼠血清中提升的FSH水平。峰值水平在给药后IO分钟是显著的。图5是显示蛋白质印迹分析的照片，分析表明了来源于表达GCD的细胞的脱水/冻干提取物和新鲜细胞提取物的GCD水平。优选实施方案的描述本发明是用于粘膜或肠(例如口服)给予生物活性大分子的方法和组合物，所述生物活性大分子可用于诊断、美容、预防或治疗目的。参考附图和后附描述可更好地理解本发明的原则和实施。在详细解释本发明的至少一个实施方案之前，要理解的是，本发明未将其应用限于在以下描述中陈述的或实施例例举的细节。本发明可以有其它实施方案，或者能够以多种方式实施或进行。另外，要理解的是，本文使用的用语和术"^吾用于描述目的，不应^皮看作限制性的。基于植物生产的生物药品目前已上市，植物源治疗蛋白的临床实验正在进行中。但是，鉴于成本效率、收率和活性，由植物培养基或生物质回收产物阻碍了这些重组蛋白的大规模商品化应用。先前已提出例如通过以下的最小或没有进一步回收给予治疗蛋白(参见例如美国专利申请20O40175440、2003013588和20030084484)。但是，迄今为止，还没有提供实际转运重组蛋白至循环和靶器官或组织(即其中靶器官不是胃肠道的一部分)的实验证据。在简化本发明以便实施时，本发明人揭示，给予表达重组蛋白的植物细胞可用于系统给予治疗性、诊断性和预防性大分子(例如蛋白、寡核苷酸如反义寡核苷酸等)。如在下文和以下的实施例部分所阐述，本发明人能够表明，口服给予表达葡糖脑苷脂酶(GCD)的胡萝卜细胞培养物导致在喂饲其的小鼠肝脏中累积活性酶(参见图1,实施例1)。另外，向垂体切除大鼠口服给予表达人生长激素(hGH)、FSH和hGCD的植物细胞显示出向循环和外周器官成功传递蛋白，以ELSIA测定为证(参见实施例2-4)。因此，本发明首次提供了植物细胞可用作系统、粘膜或肠传递生物活性生物分子(例如蛋白)的有效载体的证据。因此，按照本发明的一个方面，提供一种向有需要的受试者系统传递生物活性形式的生物活性重组生物分子的方法。本发明该方面的方法如下实施在4直物细胞中表达生物活性重组生物分子；向受试者肠(例如口月l)或粘膜给予治疗有效量的表达生物活性外源重组生物分子的细胞，由此向受试者系统传递生物活性形式的生物活性重组蛋白。本文使用的表述"系统传递，，指经血液循环提供给机体的器官(内部或外部)。本文使用的表述"重组生物分子"指使用重组DNA技术在本发明的植物细胞中外源表达(mRNA或蛋白水平)的多核苦酸、寡核苦酸、多肽或肽(例如较大多肽的肽片段)。可按照本发明技术重组表达的蛋白实例包括但不限于原核蛋白、真核蛋白(例如哺乳动物、植物)、嵌合蛋白、病毒蛋白和肽。具体实例包括但不限于抗体(例如抗龋齿)、激素、生长因子、蛋白酶、胞外基质蛋白(例如胶原蛋白)、酶、传染性法氏囊病病毒的病毒蛋白VPII、人干扰素(3、人凝血因子、人X因子、人溶酶体酶、人葡糖脑苷脂酶、人a半乳糖苷酶和乙酰胆碱酯酶与高甘露糖蛋白[例如人Cox-2、人EGF、人子宫组织纤溶酶原激活物(tPA)、人DNA酶I、重组gpl20、人组织纤溶酶原激活物、人甲状腺球蛋白(hTG)、人CD4和人纤溶酶原)]。要认识到的是，可使用本发明的教导传递其它生物分子，例如涉及基因沉默的寡核苷酸(例如反义寡核香酸、dsRNA、核酶、DNA酶等)。本文使用的表述"生物活性，，指重组蛋白的固有生物活性(例如酶活性、结合活性)，其优选不限于激发用于接种加强的免疫应答。本文使用的表述"有需要的受试者"指可由本发明获益(例如临床上、审美上)的多细胞生物(例如猪、例如哺乳动物、例如人)。本文使用的表述"植物细^/'指表达生物活性重组(外源)生物分子的全抹、其部分(例如叶、根、果实、种子)或由其分离的细胞(同质或异质细胞群)。本文使用的表述"分离的植物细胞，，指来源于解体的植物细胞组织或植物细胞培养物的植物细力包。本文使用的表述"植物细胞培养物"指任意类型的天然(天然存在的)植物细胞、植物细胞系和遗传修饰过的植物细胞，它们未被组装形成完整植林，使得植林的至少一个生物结构不存在。任选地，本发明该方面的植物细胞培养物可包含特定类型的植物细胞或多种不同类型的植物细胞。应当指出的是，任选地，以特定类型的植物细胞为特征的植物培养物最初可来源于多种不同类型的该植物细胞。本发明的植物细胞包含完整细胞膜和/或细胞壁，表明为了传递生物活性分子在给予前不需要有意破坏这些结构。因此，优选至少30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%的给予细胞包含基本完整的细胞膜和/或细^;壁。本发明的植物细胞来源于植物(或其部分)，优选可食用植物，其可经受遗传修饰，以便在其中表达重组蛋白。可按照本发明的该方面使用的植物实例包括但不限于苔藓、藻类、单子叶或双子叶植物以及其它植物。实例包括但不限于叶类作物、油类作物、苜蓿、烟草、番茄、香蕉、胡萝卜、莴苣、玉米、黄瓜、瓜、马铃薯、葡萄和白三叶草。任选地，植物细胞可为任意类型的植物细胞，例如植物根细胞(即来源于、得自或最初基于植物根的细胞)，更优选为选自芽菜细胞、姜细胞、辣才艮细胞和胡萝卜细胞的植物根细胞。按照目前已知的本发明优选配置，植物细胞来源于胡萝卜或烟草(参见以下实施例部分的实施例2-4)。要认识到的是，起源于根以外结构的植物细胞可用发根农杆菌(^groZ)G"erz'wmr/n'zoge"asO转化，诱导发根细胞发育(参见例如Strobel等的美国专利第4,588,693号)，如下文进一步描述。因此，如上文所迷和以下实施例部分的详述，植物根细胞可为发才艮农杆菌(Jgra6a"eWwwr/z&oge"es)转化的才艮细月包。按照本发明的该方面优选使用悬浮培养物，但也可使用愈伤组织培养物。通过将表达生物活性重组蛋白的核酸序列连接入适于植物表达的核酸构建物中，实现在上述植物细胞培养物的细胞中表达本发明该方面的生物活性重组蛋白。另外，通过连接驱动植物基因过表达的核酸序列，实现在上述植物细胞培养物的细胞中表达本发明该方面的生物活性蛋白。这种核酸构建物包含顺式作用调节区，例如用于在细胞中以组成型或诱导型方式引导多核苷酸序列转录的启动子序列。启动子对转化的植物/细胞可为同源的或异源的。或者，这种核酸构建物包含在植物基因附近^皮插入到植物基因组中的增强子/启动子元件(即敲入)。启动子可为能够在宿主细胞(例如植物细胞和植物)中驱动所连接序列高水平转录的植物启动子或非植物启动子。启动子可为组成型的或诱导型的。例如但非限制性的，诱导型启动子可为在植物、植物组织或植物细胞的机械性基因活化(MGA)后促进溶酶体酶核苷酸序列表达或表达增加的启动子。组成型植物启动子的实例包括但不限于CaMV35S和CaMV19S启动子、FMV34S启动子、甘蔗杆状病毒启动子、CsVMV启动子、拟南芥ACT2/ACT8肌动蛋白启动子、拟南芥泛素UBQ1启动子、大麦叶硫堇BTH6启动子、水稻力几动蛋白启动子、rbcS、叶绿素a/b结合蛋白的启动子、Adhl、NOS和HMG2或其修饰物或衍生物。诱导型启动子是由特定刺激如应力条件诱导的启动子，所述应力条件包括例如光、温度、化学物质、干旱、高盐度、渗压震扰、氧化剂条件或在致病性情况下。通常，启动子在植物收获前被诱导，因此被称为收获前启动子。诱导型收获前启动子的实例包括但不限于来源于豌豆rbcS基因的光诱导型启动子；得自苜蓿rbcS基因的启动子；在干旱中有活性的启动子DRE、MYC和MYB;在高盐度和渗压应力下有活性的启动子INT、INPS、prxEa、Hahspl7.7G4和RD21,以及在致病应力下有活性的启动子hsr203J和str246C。诱导型启动子还可为诱导型收获后启动子，例如诱导型MeGA.启动子(美国专利第5,689,056号)。用于快速诱导MeGATM启动子的优选信号是收获植物后的局部伤口。本发明的核酸构建物还可包含编码信号肽的额外核S吏序列，其允许在需要时将按读框与其融合的重组蛋白转运至植物中的亚细胞器。植物细胞亚细胞器的实例包括但不限于白色体、叶绿体、有色体、线粒体、核、过氧化物酶体、内质网和液胞。用于转染或转化本发明宿主细胞的表达载体可按照本领域技术人员已知的方法另外修饰，以增强或优化植物和植物细胞中的异源基因表达。这类修饰包括但不限于突变DNA调节元件，以增强启动子强度或改变目标蛋白，以及优化密码子选择。通过改变密码子选择构建合成基因描述于例如PCT专利申请93/07278。核酸构建物可为例如质粒、杆粒、噬菌粒、粘粒、噬菌体、病毒或人工染色体。优选地，本发明的核酸构建物是质粒载体，更优选地为二元载体。表述"二元载体"指表达载体，其携带Ti质粒的修饰过的T区；能够在大肠杆菌和农杆菌细胞中复制，并通常在两个边界区之间含用于植物转化的报告基因。适于本发明的二元载体包括pBI21H、pBI121、pGA482、pGAH、pBIG、pBI101(Clonetech)、pPI(参见以下实施例部分的实施例5)或其修饰物。要认识到的是，在某些情况下，活性多肽的生产包括一系列事件，从多肽表达开始，其后是翻译后修饰，例如糖基化、二聚化、曱基化和硫酸化、羟化。尽管植物能够在正确的位置糖基化人蛋白，但完整加工过的复杂植物聚糖的组成与哺乳动物N-联聚糖不同。植物聚糖不具有在动物聚糖中常见的末端唾液酸残基或半乳糖残基，并经常含具有的键在哺乳动物中一般不存在的木糖或果糖残基(Jenkins等，14NatureBiotech.975-981(1996);Chrispeels和Faye,载于transgenicplants99-114页(Owen,M.和Pen,J.编辑,Wiley&Sons,N.Y.1996;Russell240Curr.Top.Microbio.Immunol.(1999》本发明的核酸构建物可用于稳定或瞬时转化植物细胞。在稳定转化中，本发明的核酸分子被整合入植物基因组中，因而其表现出稳定和固有的性状。在瞬时转化中，核酸分子由转化的细胞表达，但没有整合入基因组中，因而表现出特定蛋白的瞬时表达。有多种将外源基因导入单子叶和双子叶植物中的方法(Potrykus,I.(1991).AnnuRevPlantPhysiolPlantMolBiol化205-225;Shimamoto,K.等(1989).Fertiletransgenicriceplantsregeneratedfromtransformedprotoplasts.Nature(1989)风274-276)。将外源DNA稳定整合入植物基因组DNA中的主要方法包括两种主要方案(i)《并萝介爭的差^脊移。参见Klee，H.J.等，(1987).ArmuRevPlantPhysiol38，467-486;Klee，H.J.和Rogers,S.G.(1989).CellCultureandSomaticCellGeneticsofPlants,第6巻,MolecularBiologyofPlantNuclearGenes,2-25页,J.Schell和L.K.Vasil编辑,AcademicPublishers,SanDiego,CaL;和Gatenby,A.A.(1989).RegulationandExpressionofPlantGenesinMicroorganisms,93-112页，PlantBiotechnology,S.Kung和C.J.Arntzen编辑,ButterworthPublishers,Boston,Mass。这在根细胞用作宿主细胞时特别有利。ZW」凝承。参见例如Paszkowski，J.等，(1989).CellCultureandSomaticCellGeneticsofPlants,第6巻，MolecularBiologyofPlantNuclearGenes，52-68页，J.Schell和L.K.Vasil编辑，AcademicPublishers,SanDiego，CaL;和Toriyama,K.等，(1988).Bio/Technol6，1072-1074(用于将DNA直接t聂取入原生质体中的方法)。另参见Zhang等，(1988).PlantCellR印7,379-384;和Fromm,M.E.等，(1986)Stabletransformationofmaizeaftergenetransferbyelectroporation.Nature379,791-793(通过短暂电击植物细胞诱导的DNA摄取)。另参见Klein等，(1988).Bio/Technology6,559-563;McCabe，D.E.等，(1988).Stabletransformationofsoybean(Glycinemax)byparticleacceleration.Bio/Technology6,923-926;和Sanford,J.C.(1990).Biolisticplanttransformation.PhysiolPlant79，206-209(通过粒子轰击将DNA注射入植物细胞或组织中)。另参见Neuhaus，J.M.等，(1987).TheorApplGenet75,30-36;和Neuhaus,J.M.禾口Spangenberg，G.C.(1990).PhysiolPlant79,213-217(使用微量移液管系统)。参见美国专利第5,464,765号(细胞培养物、胚或愈伤组织的玻璃纤维或碳化硅晶须转化)。另参见DeWet,J.M.J.等，(1985)."Exogenousgenetransferinmaize(Zea謹;asOusingDNA-treatedpollen,"ExperimentalManipulationofOvuleTissue,G.P.Chapman等编辑，Longman,NewYork-London,197-209页；和Ohta,Y,(1986).High-E伍ciencyGeneticTransformationofMaizebyaMixtureofPollenandExogenousDNA.ProcNatlAcadSciUSAS3,715-719(将DNA与发育中的花粉直接温育)。农杆菌介导的系统包括使用含整合入植物基因组DNA中的限定DNA节段的质粒载体。接种植物组织的方法依据植物物种和农杆菌传递系统而变。广泛使用的方法是叶碟法，该方法可用为启动全林分化提供良好来源的任意组织外植体实施(Horsch,R.B.等，(1988)."Leafdisctransformation."PlantMolecularBiologyManual爿5，1-9,Kl而erAcademicPublishers,Dordrecht)。补充方法使用组合真空浸润的农杆菌传递系统。农杆菌系统对建立转基因双子叶植物尤其有用。有多种方法将DNA直接转移入植物细胞中。在电穿孔中，原生质体短暂暴露于强电场，打开小孔使DNA进入。在微注射中，使用微量移液器以机械方法将DNA直接注射入细胞中。在微粒轰击中，DNA吸附在诸如硫酸镁晶体或镇颗粒的微弹上，微弹物理被加速入细胞或植物组织中。尽管目前优选稳定转化，^旦本发明还设想了例如叶细胞、分生细胞或全抹的瞬时转化。但是，在此情况下要采取措施，以排除病毒序列或用于调节目的的选择基因(例如抗生素抗性)。瞬时转化可通过上述的任意直接DNA转移法或通过使用改良植物病毒的病毒感染实施。业已表明对植物宿主转4t有用的病毒包括花椰菜花叶病毒(CaMV)、烟草花叶病毒(TMV)和杆状病毒(BV)。使用植物病毒转化植物描述于例如美国专利第4，855，237号(菜豆金色花叶病毒，BGMV);EPA67,553(TMV);日本公告申请号63-14693(TMV);EPA194,809(BV);EPA278,667(BV);和Gluzman,Y.等，(1988).CommunicationsinMolecularBiology:ViralVectors,ColdSpringHarborLaboratory,NewYork,172-189页。在包括植物的许多宿主中表达外源DNA的假病毒颗粒的应用描述于WO87/06261。用于在植物中引入和表达非病毒外源核酸序列的植物RNA病毒的构建阐述于以上参考文献以及Dawson，W.O.等，(1989).Atobaccomosaicvirus-hybridexpressesandlosesanaddedgene.Virology772,285-292;French,R.等，(1986)Science1294-1297;和Takamatsu,N.等,(1990).ProductionofenkephalinintobaccoprotoplastsusingtobaccomosaicvirusRNAvector.FEBSLett，，73-76。如果转化病毒是DNA病毒，则本领域技术人员可对病毒本身实施适宜的修饰。或者，可首先将病毒克隆入细菌质粒中，以易于构建具有外源DNA的期望病毒载体。然后可由质粒中切除病毒。如果病毒是DNA病毒，则可将细菌复制起点连接至病毒DNA，然后由细菌复制该病毒DNA。DNA的转录和翻译将产生壳体化病毒DNA的外壳蛋白。如果病毒是RNA病毒，则病毒一般作为cDNA被克隆，并插入到质粒中。然后使用质粒制备所有的植物遗传构建物。然后由质粒的病毒序列转录RNA病毒，接着翻译病毒基因，以产生壳体化病毒RNA的外壳蛋白。用于在植物中导入和表达非病毒外源核酸序列(例如包含在本发明构建物中的那些)的植物RNA病毒的构建陈述于以上参考文献以及美国专利第5,316,931号。在一个实施方案中，4是供用于插入的植物病毒核酸，其包含病毒核酸的天然外壳蛋白编码序列的缺失、非天然(外源)植物病毒外壳蛋白编码序列和非天然启动子，优选为非天然外壳蛋白编码序列的次基因组启动子，并能够在植物宿主中表达，包装重组植物病毒核酸，通过重组植物病毒核酸确保宿主的系统性感染。或者，可通过在其中插入非天然核酸序列使天然外壳蛋白编码序列不可转录，使得产生非天然蛋白。重组植物病毒核酸构建物可包含一个或多个额外的非天然次基因組启动子。每个非天然次基因组启动子都能够在植物宿主中转录或表达邻近基因或核酸序列，彼此以及与次基因组启动子不能重组。另外，重组植物病毒核酸构建物可包含一个或多个顺式作用调节元件，例如增强子，其结合反式作用调节物，并调节位于其下游的编码序列的转录。如果包含一个以上的核酸序列，则可将非天然核酸序列插入到天然植物病毒次基因组启动子或天然和非天然植物病毒次基因组启动子附近。非天然核酸序列在次基因组启动子控制下于宿主植物中被转录或表达，以生产目标产物。在第二个实施方案中，如在第一个实施方案中一样提供重组植物病毒核酸构建物，只是将天然外壳蛋白编码序列放置在其中一个非天然外壳蛋白次基因组启动子附近，而不是在非天然外壳蛋白编码序列附近。在第三个实施方案中，提供重组植物病毒核酸构建物，其包含邻近其次基因组启动子放置的天然外壳蛋白基因和插入到病毒核酸构建物中的一个或多个非天然次基因组启动子。插入的非天然次基因组启动子能够在植物宿主中转录或表达邻近基因，彼此和与天然次基因组启动子不能重组。非天然核酸序列可邻近非天然次基因组植物病毒启动子插入，使得所述序列在;欠基因组启动子控制下在宿主植物中被转录或表达，以产生目标产物。在第四个实施方案中，如在第三个实施方案中一样提供重组植物病毒核酸构建物，只是天然外壳蛋白编码序列被非天然外壳蛋白编码序列替代。病毒载体被表达的由上文所述重组植物病毒核酸构建物编码的外壳蛋白壳体化，以产生重組一直物病毒。重组植物病毒核酸构建物或重组植物病毒用于感染适宜的宿主植物。重組植物病毒核酸构建物能够在宿主中复制，在宿主内系统性传播，并在宿主中转录或表达一个或多个外源基因(分离的核酸)，以生产目标蛋白。在另一个实施方案中，转化载体包含病毒来源的序列，其包含RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)、次基因组启动子和/或部分或完整的移动蛋白序列，其中将所有以上核酸片段克隆入二元载体中。(Gleba等，CurrentOpinioninPlantBiology2004,7:182-188)。除了上述以外，本发明的核酸分子还可被导入到叶绿体基因组中，由此能够进行叶绿体表达。将外源核酸序列导入叶绿体基因组中的技术是已知的。该技术涉及以下步骤。首先，化学处理才直物细胞，以便将每个细胞的叶绿体数减少至约1。然后，经粒子轰击将外源核酸导入到细胞中，目的是将至少一个外源核酸分子导入到叶绿体中。能够经同源重组整合入叶绿体基因组中的外源核酸由本领城一般技术人员选择，这可通过叶绿体固有的酶容易地实施。为此，除了目标基因以外，外源核酸还包含至少一个来源于叶绿体基因组的核^列。另外，外源核酸包含选择标记，其通过顺序选择步骤用于使技术人员确定在这种选择后所有或基本所有的叶绿体基因组拷贝都包含外源核酸。关于此技术的进一步详述可见于美国专利第4,945,050和5,693,507号，它们通过引用结合到本文中。因此，多肽可由叶绿体的蛋白表达系统生产，并整合入叶绿体的内膜中。不管使用什么方法，在转^f匕后都发生植物繁殖。在此情况下实施微型繁殖，以包括初始组织培养；并实施组织培养物增殖，以获得足够的细胞用于进一步使用。植物细胞培养方法在本领:喊众所周知。培养条件(例如培养基、温度、气体环境、生物反应器)可按照使用的植物细胞和表达的蛋白调整，以获得最佳表达。通常，〗吏用任意常规植物培养基在标准植物细胞培养条件下实施培养。要认识到的是，植物培养基既包括水性培养基，也包括脱水浓缩培养基，可将水加入到脱水浓缩培养基中，以产生用于培养植物细胞的水性培养基(参见例如美国专利第6，020，169和6,589,765号)。可按照本发明使用的植物培养基的实例包括但不限于以下众所周知的培养基Anderson(Anderson,InVitro14:334，1978;Anderson,Act.Hort,112:13,1980)、Chee和Pool(Sci.Hort.32:85,1987)、CLC/Ipomoea(CP)(Chee等，J.Am.Soc.Hort.Sci.117:663,1992)、Chu(N6)(Chu等，ScientiaSinic.18:659，1975;Chu,Proc.Symp.PlantTiss.Cult"Peking43，1978)、DCR(Gupta和Durzan,PlantCellRep.4:177,1985)、DKW/Juglans(Driver和Kuniyuki，HortScience19:507,1984;McGranahan等,载于Bonga和Durzan编辑，CellandTissueCultureinForestry,MartinusNijhoff,Dordrecht,1987)、DeGreef和Jacobs(DeGreef和Jacobs,PlantSci.Lett.17:55,1979)、Eriksson(ER)(Eriksson，Physiol.Plant.18:976,1965)、Gamborg的B-5(Gamborg等,Exp.CellRes.50:151,1968)、Gresshoff和Doy(DBM2)(Gresshoff和Doy，ZPflanzenphysiol.73:132,1974)、Heller(Heller,Ann.Sci.Nat.Bot.Biol.Veg,11thSer.14:1，1953)、Hoagland(Hoagland和Arnon,Circular347,Calif.Agr.Exp.Stat,Berkeley,1950)、Kao和Michayluk(Kao和Michayluk,Planta126:105,1975》Linsmaier禾口Skoog(Linsmaier和Skoog,Physiol.Plant.18:100,1965)、Litvay(LM)(Litvay等，PlantCellRep.4:325,1985)、McCown的木本植物培养基(Lloyd和McCown,Proc.Int.PlantProp.Soc.30:421,1981)、Murashige和Skoog及其多种众所周知的改良(Murashige和Skoog,Physiol.Plant.15:473,1962)、Nitsch和Mtsch(Nitsch禾口Nitsch，Science163:85,1969)、Quoirin和Lepoivre(Quoirin等，C,R.Res.Sta.CultFruitMar.,Gembloux93,1977)、Schenk和Hildebrandt(Schenk和Hildebrandt,Can.J.Bot.50:199,1972)、White(White,TheCultivationofAnimalandPlantCells,RonaldPress,NY,1963)等。这些植物培养基有许多可作为例如脱水0分末化)培养基和脱水的基础盐混合物由Sigma(St.Louis,Mo.)和其它供应商处商购。优选地，使用高收率一次性植物培养装置实施培养，已表明该装置对在培养物中生产生物活性肽和多肽有效(参见pCTIL/2005/000228,其通过引用结合到本文中)。该装置尽管基本上是一次性的，但特征在于具有能够收获至少一部分含细胞培养基的可重复使用的收获出口，由此能使所用装置继续用于一个或多个随后的连续培养/收获周期。在工业环境中，可通过提供例如无菌罩以相对低的成本确保在收获当中和之后收获出口无菌性的显著高水平，在无菌罩中，可对装置实施所有必需的连接和分拆维护。当装置最终确实被污染时，那么以相对较少的经济损失将其废弃。这类装置可廉价生产，即便对50或100升或更大生产体积的培养也是如此。此外，进行多次培养/收获周期的能力在经济上是有利的，甚至进一步降低了每个装置的实际成本。这些装置组可经济地排列，组中的装置数量可控，以密切匹配要求的产量。因此，通过将多个装置加入组中，还可以相对简单和经济的方式实现由中试植物生物反应器向大规模生产的过渡。此外，与典型的不锈钢生物^应器相比，每个装置的相对低的生产体积连同没有固体搅拌器产生相对高的收率。因此，可使用用于在至少一个周期(长度如在PCTIL/2005/000228中所述，该文献通过引用结合到本文中)中无菌培养和收获细胞的一次性装置，实现符合本发明的植物细胞培养。这种装置具有带顶端和底端的可灭菌的一次性容器，该容器可至少部分地装载适宜的无菌生物细胞培养基和/或无菌接种物和/或无菌空气和/或需要的其它无菌添加剂，该容器具有(i)用于由容器去除过量空气和/或废气的出气口；(ii)用于将接种物和/或培养基和/或添加物引入容器中的进料口；特征在于还具有(iii)可重复使用的收集器，其包括用于在需要时能收获至少期望的一部分含细胞培养基的流量控制器，由此能使该装置继续用于至少再一个连续培养/收获周期，其中先前收获周期余下的含细胞培养基保留物可用作接种物，用于下一个其中提供培养基和/或需要的添加物的培养和收获周期。任选地，一次性容器是透明的和/或半透明的。还任选地，所述装置还具有进气口，用于通过第一个进口将无菌气体以气泡的形式导入到培养基中，其中进气口可连接至适宜的气体供应。优选地，进气口在培养过程中一次以上地用于导入无菌气体。更优选地，进气口用于持续地导入无菌气体。任选地，经进气口于不同时间和/或以不同浓度引入多种不同气体。优选地，收集器包括基本防止污染物经收集器进入容器中的防污。任选地，容器是非刚性的。优选地，容器由非刚性塑料材料制备。更优选地，所述材料选自聚乙烯、聚^5灰酸酯、聚乙烯和尼龙的共聚物、PVC和EVA。任选地，容器由一层以上的层叠材料制备。还任选地，通过沿着预先确定的焊缝熔焊两片适宜的材料形成容器。优选地，进气口包括由进口延伸至容器内部在其底端或接近其底端的位置的进气管。还优选地，至少一个进气口包括至少一个进气管，该进气管可连接至适宜气体供应源，并连通多个次级进气管，每个次级进气管都经其中适宜的进口延伸至容器内的位置，用于将无菌空气以气泡的形式导入到培养基中。更优选地，所述装置具有基本上箱形的几何构型，具有总长度、高度和宽度。最优选地，高长比介于约1至约3之间，优选约1.85。任选地，高宽比介于约5至约30之间，优选约13。优选地，装置具有基本跨过装置深度的支撑孔，这些孔适于使装置能被支撑在适宜的支杆上。任选地，装置还具有用于支撑所述装置的支撑结构。优选地，支撑结构包括一对相对的框架，每个框架都具有由多个基本平行的垂直支撑件间隔的上支撑件和下支撑件，垂直支撑件相配地连接至上支撑件和下支撑件。更优选地，多个垂直支撑件由在上支撑件和下支撑件的每个纵向末端处的至少一个垂直支撑件组成。还更优选地，框架由可松开地或整体地连接至所述框架的多个间隔杆彼此分隔。还更优选地，间隔杆适当i也定位，4吏得装置可相对容易地插入和移出支撑结构。任选地，每个框架的下部支撑件都包括至少一个下部支撑，该下部支撑适于接受和支持装置底端的相应部分。优选地，每个下部支撑均为朝着相对框架方向由每个下部支撑件伸出的相配形状的突出物形式。任选地，框架各自具有至少一个朝着相对框架方向由各个框架伸出的中间分隔物(interpartitioner),用于逆着装置的侧壁推向预定位置，使得相对的各对中间分隔物有效减少装置在预定位置的宽度。优选地，中间分隔物包括适宜的基本垂直部件，用适宜的上部支柱和下部支柱以朝着相对框架的方向将其与上部和下部支撑件分隔。任选地，支撑结构可具有多个回转脚轮，用于运输所迷装置。任选地，至少一些气泡具有约lmm至约10mm的平均直径。还任选地，至少一些气泡具有约4mm的平均直径。任选地，容器具有安装在出气口上的适宜滤器，用于大体上防止污染物经出气口引入到容器中。优选地，容器还具有安装在进料口上的适宜的滤器，用于大体上防止污染物经进料口引入到容器中。还优选地，存在包括U型流体收集器的污染物防护器，其中U型流体收集器的一个臂通过适宜的无菌连接件无菌安装在收集器的外部出口上。优选地，收集器位于容器底端的底部。还优选地，收集器位于容器底端的底部附近，使得在每个收获周期结束时余下的含细胞培养基自动保留在容器底端，一直到收集器平面以下的水平。任选地和优选地，余下的含细胞培养基至少部分地由容器底部距收集器的距离d2决定。优选地，余下的含细胞培养基占培养基和接种物初始体积的约0.5%至约45%。更优选地，余下的含细胞培养基占培养基和接种物初始体积的约10%至约20%。更伊C选地，余下的含细胞培养基占培养基和接种物初始体积的约0.5%-2%。任选地，底端基本上是凸起的。还任选地，底端基本上是截顶锥形的。优选地，容器具有约5升至约200升、优选约50升至约150升、优选约IOO升的内部可填充体积。任选地，所述装置还具有适宜的连接物，用于将所述装置连接至适宜的支撑结构。优选地，连^l秦物具有一圈优选整体连接至容器顶端的适宜材料。一获得表达上述重组蛋白的植物细胞，就将它们给予给受试者。本发明的细胞可以自身(例如悬浮液或脱水的)给予给受试者，或者在它们与适宜载体或赋形剂混合时在药物组合物中给予给受试者。本文使用的"药物组合物"指本文描述的一种或多种活性成分与其它化学组分(例如生理学上适宜的载体和赋形剂)的制剂。药物组合物的用途是利于将化合物给予给生物体。本文使用的术语"活性成分"指表达重组蛋白的细胞，其负责预期的生物效应。如在以下实施例部分的实施例5中所论述的，本发明的细胞可被脱水(例如含10%以下的水)，因为它们在脱水时仍保留生物活性。优选地，重组生物分子不是脱水细胞制备物中的透明带糖蛋白、GnRH、LHRH、LH和LDH。在下文，表述"生理可接受的载体"和"药物可接受的载体"可互换使用，指对生物体不引起显著刺激且不废除所给予化合物的生物活性和特性的载体或稀释剂。佐剂包括在这些表述之内。优选地，所用载体是非免疫原性载体，再优选地，其不刺激肠道淋巴组织。在本文中，术语"赋形剂"指加入到药物组合物中的惰性物质，以进一步利于活性成分的给予。赋形剂的非限制性实例包括碳酸4丐、磷酸钙、多种糖和淀粉类型、纤维素衍生物、明胶、植物油和聚乙二醇。药物的配制和给予才支术可见于最新版的"Remington'sPharmaceuticalSciences,"MackPublishingCo.,Easton,PA,该文献通过引用整体结合到本文中。适宜的给药途径例如可包括粘膜和肠。本文使用的表述"肠给药"指通过胃肠道的任意部分给药，例如直肠给药、结肠给药、肠给药(近端或远端)和胃给药。优选地，肠给药指口服给药。按照本发明使用的药物组合物因此可用一种或多种包括赋形剂和助剂的生理可接受载体以常^见方式配制，所述载体有利于将所述活性成分加工入药物可用的制剂中。适当制剂取决于选择的给药途径。对于口服给药，可通过将活性化合物与本领域众所周知的药物可接受载体混合容易地配制。这种载体能将药物组合物配制为由患者口服摄入的片剂、丸剂、糖锭剂、胶嚢剂、液体剂、凝胶剂、糖浆剂、浆剂、悬浮剂等。口服使用的药物制剂可如下制备使用固体赋形剂，任选地研磨所获混合物，并加工颗粒混合物，在根据需要加入适宜的助剂后，获得片剂或糖锭剂芯。适宜的赋形剂具体地为填充剂，例如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纤维素制备物，例如玉米淀粉、小麦淀粉、稻淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄芪树胶、曱基纤维素、羟丙基曱基纤维素和羧曱基纤维素钠；和/或生理可接受的聚合物，例如聚乙歸吡咯烷酮(PVP)。如果有需要，可加入崩解剂，例如交联的聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或海藻酸或其盐，例如海藻酸钠。提供具有适宜包衣的糖锭剂芯。为此，可使用浓缩的糖溶液，其任选地可包含阿拉伯胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆凝胶、聚乙二醇、二氧化钛、漆溶液和适宜的有机溶剂或溶剂混合物。可将染料或色素加入到片剂或糖锭剂包衣中，用于标识或表征活性化合物剂量的不同组合。可口服使用的药物组合物包括由明胶制备的拼装(push-fit)胶嚢，以及由明胶和增塑剂(例如甘油或山梨醇)制备的密封软胶嚢。拼装胶嚢可包含与填充剂(例如乳糖)、粘合剂(例如淀粉)、润滑剂(例如滑石或硬脂酸镁)以及任选的稳定剂混合的活性成分。在软胶嚢中，活性成分可溶解或悬浮在适宜的液体中，例如脂油、液体石蜡或液体聚乙二醇。另外，可加入稳定剂。所有口服给药制剂都应为适于选定给药途径的剂量。粘膜传递的实例包括但不限于口传递、咽传递、食道传递、直肠传递和阴道传递。优选地，粘膜传递的部位是经口。经口的粘膜传递可通过舌下传递或颊传递实施，舌下传递是通过衬于口底的粘膜进行的活性剂的系统性传递，颊传递是通过衬在颊内的粘膜(颊粘膜)进行的活性剂传递。对口粘膜传递特别有用的制剂包括但不限于嗽口水、牙周条、泡沫剂、香口胶、口服喷雾剂、锭剂、食物、牙膏和胶嚢。特别优选的制剂是香口胶。制剂例如香口胶可为低或高水分，有糖或无糖，含蜡或不含蜡，低卡路里(通过高碱或低卡路里填充剂)，和/或可含牙科药剂。要认识到，在此情况下，由于所给予细胞的膜和/或壁的机械破坏，本发明的活性成分可被释放到口中，在局部起作用(例如用于治疗或诊断龋齿)。本发明的活性成分(即植物细胞)还可被嚢化或包封，以由粘膜制剂产生延迟的释^L。可使用得到活性剂的部分或完整嚢化的任意标准技术。这些技术包括但不限于喷雾干燥、喷雾冷冻、流化床包衣和凝聚。这些嚢化技术可单独地用于单步骤方法或以任意组合用于多步骤方法。聚、也产生部分嚢化的固定或吸附以及包封到挤出复合物中。活性成分上的包衣或嚢化材料的量还可以控制其由香口胶释放的时间长度。一般来说，包衣水平越高和活性成分量越低，释放就越慢。配制延迟释放制剂的方法和材料是本领域已知的。例如，PCT专利申请公布号WO00/35298教导在香口月交中配制延迟释放制剂的方法和材料。本发明的活性剂(即来源于特定果实细胞培养物的活性剂)可以不同方式配制，并经相同载体给药。例如，活性成分可被嚢化，用于在相同载体中快速释放、适中释》丈和緩慢释放。而且，可将本发明的活性剂加入到胶涂层中，用于快速释放，还可加入到有或没有嚢化的胶芯中，用于緩慢释放。通过增加调味剂水平以及加入其它调味剂组分，例如薄荷醇和薄荷醇衍生物、柠檬烯、香齐酮、异薄荷醇、桉油醇、薄荷酮、蒎烯(pynene)、樟脑和樟脑衍生物以及单萜天然产物、单碎衍生物和倍半碎烯(sesquaterpene)，包括丁子香歸和可巴烯，可实现较快吸收。制剂可包含增强活性物质通过粘膜并进入血液中的透性的其它物质。这些物质的实例包括但不限于23-月桂酰醚、抑肽酶、氮酮、苯扎氯铵、氯化鲸蜡基吡啶镜、渙化鯨蜡基三曱铵、环糊精、硫酸葡聚糖、月桂酸、月桂酸/丙二醇、溶血磷脂酰胆碱、薄荷醇、甲氧基水杨酸甲酯、甲基油酸酯、油酸、磷脂酰胆碱、聚氧乙烯、聚山梨醇酯80、EDTA钠、甘氨胆酸钠、甘氨脱氧胆酸钠、月桂基^L酸钠、水杨酸钠、牛磺胆酸钠、牛磺脱氧胆酸钠、亚砜和多种烷基糖苷。其它修饰也可以影响活性剂进入粘膜中的释放速率。在硬碱可产生较慢释放的情况下，软碱的结构修饰物可产生更快的释放。加入碱性物质如碳酸氬钠或氢氧化钠可使唾液稍微碱性，这可增加药物的瓶/舌p及收进入血流。制剂的形状和大小也可影响本发明活性剂的释放。例如，具有大表面积的扁平条胶在咀嚼时可更快地将活性剂由胶释放到唾液中，而圆形或方块可更緩慢地释放药物和活性剂。香口胶的制片公开于英国专利公布号1,489,832、美国专利第4，753，805号、EP专利公布号0221850以及意大利专利公布号1,273,487。这些专利公开了加入到香口胶中并随后制片的活性剂。还可以向制剂中加入着色剂。本发明设想的着色剂包括食品级染料。优选加入到糖浆中的成膜剂包括曱基纤维素、明胶、羟丙基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素等及其组合。按照一个优选的实施方案，本发明的果实细胞培养物以无色浓缩物提供。应当指出的是，表达本发明的重组生物分子的植物细胞可配制成单位剂型(例如口服单位剂型)。治疗有效量的确定完全属于本领域技术人员的能力范围，尤其是在依据本文提供的详细公开内容的情况下。对于在本发明方法中使用的任意制剂，开始可由体外和细胞培养测定估计剂量或治疗有效量。例如，可在动物模型中配制达到期望的浓度或滴度的剂量。该信息可用于更准确地确定在人中的有用剂量。本文所述活性成分的毒性和疗效可通过标准药学方法在体外、在细胞培养物或实验动物中确定。由这些体外和细胞培养物测定以及动物研究获得的数据可用于配制一系列人用剂量。所述剂量可根据使用的剂型和使用的给药途径变化。确切的制剂、给药途径和剂量可由个体医师基于患者的病情选择。(参见例如Fingl，E.等，(1975),"ThePharmacologicalBasisofTherapeutics,"第1章，第1页》剂量和给药间隔可单独调整，以提供活性成分的足量血浆或脑水平，诱导或抑制生物效应(即最小有效浓度，MEC)。每个制备物的MEC将有所不同，但可由体外^:据估计。达到MEC必需的剂量取决于个体特征和给药途径。；险测测定可用于确定血浆浓度。根据要治疗的病症的严重性和响应性，给药可为单次或多次给予，疗程可持续几天至几周，或直至实现治愈或实现病症减轻。当然，要给予的组合物的量取决于要治疗的受试者、侵袭的严重性、给药方式、主治医师的判断等。如果有需要，本发明的组合物可在包装或分配装置中提供，例如FDA批准的药盒，其可含一个或多个含活性成分的单位剂型。所述包装例如可包含金属或塑料箔，例如泡罩包装。包装或分配装置可附带给药说明书。包装或分配装置还可附带管理药品生产、使用或销售的政府机关规定形式的通知书，该通知书反映了政府机关对人或兽医给药的组合物形式的批准。例如，这种通知书可包括美国食品和药品管理局批准用于处方药物的标签或批准的产品插页。还可制备配制在药物可接受载体中的含本发明制剂的组合物，放置在适宜的容器中，并标注用于指定病症的治疗，如上文进一步的详述。如所述给药的重组蛋白可用于众多治疗剂、诊断剂和化妆品中。因此，例如，上述教导内容可用于治疗其中给予本发明的生物分子在治疗上可能有益的任意疾病(即慢性的或急性的)或病症。例如，本发明人已表明GCD在喂祠所述酶的小鼠肝脏中累积，提示其在高歇病治疗中的应用。义'^^4一包括但不限于慢性炎性疾病和急性炎性疾病。甜教拟w颠颠过敏的实例包括但不限于i型过敏、n型过敏、m型过敏、iv型过敏、速发过敏、抗体介导的过敏、免疫复合物介导的过敏、T淋巴细胞介导的过敏和DTH。I型或速发过壽文，例如哮喘。II型过敏包括但不限于风湿病、类风湿性自身免疫病、类风湿性关节炎(KrennV.等，HistolHistopathol2000年7月；15(3):791)、脊推炎、关节强硬性脊推炎(JanVoswinkel等,ArthritisRes2001;3(3):189)、系统性疾病、系统性自身免疫病、系统性红斑狼齊(EriksonJ.等，ImmunolRes1998;17(l陽2):49)、硬化症、系统性硬化(RenaudineauY.等，ClinDiagnLabImmunol.1999年3月；6(2):156);ChanOT.等,ImmunolRev1999年6月；169:107)、腺性病、腺性自身免疫病、胰腺自身免疫病、糖尿病、I型糖尿病(ZimmetP.DiabetesResClinPract1996年10月；34增刊:S125)、曱状腺病、自身免疫性曱状腺病、格雷夫氏症(OrgiazziJ.EndocrinolMetabClinNorthAm2000年6月；29(2):339)、曱状腺炎、自发性自身免疫性甲状腺炎(Braley-MullenH.和YuS，JImmunol2000年12月15日；165(12):7262)、桥本曱状腺炎(ToyodaN.等，NipponRinsho1999年8月；57(8):1810)、粘液水肺、特发性粘液水肿(MitsumaT.NipponRinsho.1999年8月；57(8):1759)、自身免疫性生殖疾病、卵巢疾病、卵巢自身免疫病(GarzaKM.等，JReprodImmunol1998年2月；37(2):87)、自身免疫性抗精子不育(DiekmaiiAB.等，AmJReprodImmunol.2000年3月；43(3):134)、反复流产(TincaniA.等，Lupus19卵；7增刊2:S107_9)、神经退化性疾病、神经疾病、自身免疫性神经疾病、多发性硬化(CrossAH.等，JNeuroimmuno12001年1月1日；112(1-2):1)、阿尔茨海默病(OronL.等，JNeuralTransm增刊1997;49:77)、重症肌无力(InfanteAJ.AndKraigE,IntRevImmunol1999;18(l-2):83)、运动神经病(KornbergAJ.JClinNeurosci.2000年5月；7(3):191)、格林-巴利综合征、神经病和自身免疫性神经病(KusunokiS.AmJMedSci.2000年4月；319(4):234)、肌无力病、兰伯特伊顿二氏重症肌无力综合征(TakamoriM.AmJMedSci.2000年4月；319(4):204)、副肿瘤性神经系统疾病、小脑萎缩、副肺瘤性小脑萎缩、非副肿瘤性僵人综合征、小脑萎缩、进行性小脑萎缩、脑炎、Rasmussen脑炎、肌萎缩性侧索硬化、Sydeham舞蹈病、GillesdelaTourette综合征、多内分泌腺疾病、自身免疫性多内分泌腺疾病(AntoineJC.和HonnoratJ.RevNeurol(Paris)2000年1月；156(1):23);神经病、免疫障碍神经病(dysimmuneneuropathies)(Nobile-OrazioE.等，ElectroencephalogrClinNeurophysiolSuppl1999;50:419);神经性肌强直、获得性神经性肌强直、先天性肌发育不全(VincentA.等，AnnNYAcadSci.1998年5月13日；841:482)、心血管疾病、心血管自身免疫疾病、动脉粥样硬化(MatsuuraE.等，Lupus.1998;7增刊2:S135)、心肌梗塞(VaaralaO.Lupus.1998;7增刊2:S132)、血栓形成(TincaniA.等，Lupus1998;7增刊2:S107-9)、肉芽肿病、Wegener肉芽肿病、动脉炎、Takayasu动脉炎和Kawasaki综合征(PraprotnikS.等，WienKlinWochenschr2000年8月25日；112(15-16):660);抗VIII因子自身免疫病(Lacroix-DesmazesS.等，SeminThrombHemost.2000;26(2):157);血管炎、坏死性小血管炎、显微镜下多血管炎、Churg和Strauss综合征、肾小球肾炎、免疫缺乏病灶坏死性肾小球肾炎、新月体性肾小球肾炎(NoelLH.AnnMedInterne(Paris).2000年5月；151(3):178);抗磷脂抗体综合征(FlamholzR.等，JClinApheresis1999;14(4):171);心力衰竭、心力衰竭中的激动剂样卩肾上腺素受体抗体(WallukatG.等，AmJCardiol.1999年6月17曰；83(12A):75H)、血小板减少性紫癜(MocciaF.AnnItalMedInt.1999年4-6月；14(2):114);溶血性贫血、自身免疫性溶血性贫血(EfremovDG.等，LeukLymphoma1998年1月；28(3-4):285)、胃肠疾病、胃肠道自身免疫病、肠病、慢性炎性肠病(GarciaHerolaA.等，GastroenterolHepatol.2000年1月；23(1):16)、脂泻病(LandauYE.和ShoenfeldY.Harefliah2000年1月16日；138(2):122)、肌肉系统自身免疫病、肌炎、自身免疫性肌炎、Sjogren综合征(FeistE.等，IntArchAllergyImmunol2000年9月；123(1):92);平滑肌自身免疫病(ZauliD.等,BiomedPha薩cother1999年6月；53(5-6):234)、肝病、肝自身免疫病、自身免疫性肝炎(MannsMP.JHepatol2000年8月；33(2):326)和原发性胆汁性肝硬化(StrassburgCP.等，EurJGastroenterolHepatol.1999年6月；11(6):595)。IV型或T细胞介导的过敏包括但不限于类风湿性病、类风湿性关节炎(TischR，McDevittHO.ProcNatlAcadSciUSA1994年1月18日；91(2):437)、系统性疾病、系统性自身免疫病、系统性红斑狼疳(DattaSK.，Lupus1998;7(9):591)、腺病、腺自身免疫病、胰腺病、胰腺自身免疫病、1型糖尿病(CastanoL.和EisenbarthGS.Ann.Rev.Immunol.8:647);甲状腺病、自身免疫性曱状腺病、高歇病(SakataS.等，MolCellEndocrinol1993年3月；92(1):77);卵巢疾病(GarzaKM.等，JReprodImmunol1998年2月；37(2):87)、前列腺炎、自身免疫性前列腺炎(AlexanderRB.等，Urology1997年12月；50(6):893)、多腺性综合征、自身免疫性多腺性综合征、I型自身免疫性多腺性综合征(HaraT.等，Blood.1991年3月1日；77(5):1127)、神经疾病、自身免疫性神经疾病、多发性硬化、神经炎、视神经炎(SoderstromM.等，JNeurolNeurosurgPsychiatry1994年5月；57(5):544)、重症肌无力(OshimaM.等，EurJImmunol1990年12月；20(12):2563)、僵人综合征(HiemstraHS.等，ProcNatlAcadSciUSA2001年3月27日；98(7):3988)、心血管疾病、Chagas病中的心脏自身免疫性(Cunha-NetoE.等，JClinInvest1996年10月15日；98(8):1709)、自身免疫性血小板减少性紫癜(SempleJW.等，Blood1996年5月15日；87(10):4245)、抗T辅助淋巴细胞自身免疫性(CaporossiAP.等，ViralImmunoll998;11(1):9)、溶血性贫血(SallahS.等,AnnHematol1997年3月；74(3):139)、肝病、肝自身免疫病、肝炎、慢性活动性肝炎(FrancoA.等，ClinImmunolImm腦pathol1990年3月；54(3):382)、胆汁性肝硬变、原发性胆汁性肝硬变(JonesDE.ClinSci(Colch)1996年11月；91(5):551)、肾病、自身免疫性肾病、肾炎、间质性肾炎(KellyCJ.JAmSocNephrol19卯年8月；1(2):M0)、结締组织病、耳病、自身免疫性结締组织病、自身免疫性耳病(YooTJ,等,CellImmunol1994年8月；157(1):249)、内耳病(GloddekB.等，AnnNYAcadSci1997年12月29曰；830:266)、皮月夫病(skindisease)、皮肤病(cutaneousdisease)、真皮病、大疱皮肤病、寻常天疱疮、大疱性类天疱疮和落叶型天疱疮。延迟型过敏的实例包括但不限于接触性皮炎和药瘆。和细胞毒性T淋巴细胞。T辅助淋巴细胞介导的过敏的实例包括但不限于Thl淋巴细胞介导的过敏和Th2淋巴细胞介导的过敏。包括但不限于心血管疾病、类风湿病、腺病、胃肠病、皮肤病、肝病、神经病、肌肉疾病、肾病、与生殖相关的疾病、结締组织疾病和系统性疾病。自身免疫性心血管疾病的实例包括但不限于动脉粥样硬化(MatsuuraE.等，Lupus.1998;7增刊2:S135)、心肌梗塞(VaaralaO.Lupus.1998;7增刊2:S132)、血栓形成(TincaniA.等，Lupus1998;7增刊2:S107-9)、Wegener肉芽肿病、Takayasu动脉炎、Kawasaki综合征(PraprotnikS.等，WienKlinWochenschr2000年8月25日；112(15-16):660)、抗VIII因子自身免疫病(Lacroix-DesmazesS.等，SeminThrombHemost.2000;26(2):157)、坏死性小血管炎、显微镜下多血管炎、Churg和Strauss综合征、免疫缺乏性病灶坏死性和新月体性肾小球肾炎(NoelLH.AnnMedInterne(Paris).2000年5月；151(3):178)、抗磷脂综合征(FlamholzR.等，JClinApheresis1999;14(4):171)、抗体诱导的心力衰竭(WallukatG.等,AmJCardiol.1999年6月17日；83(12A):75H)、血小板减少性紫癜(MocciaF.AnnItalMedInt.1999年4-6月；14(2):114;SempleJW.等，Blood1996年5月15日；87(10):4245)、自身免疫性溶血性贫血(EfremovDG.等，LeukLymphoma1998年1月；28(3-4):285;SallahS.等,AnnHematol1997年3月；74(3):139)、Chagas病中的心脏自身免疫性(Cunha-NetoE.等，JClinInvest1996年10月15曰；98(8):1709)和抗T辅助淋巴细胞自身免疫性(CaporossiAP.等，ViralImmunol1998;11(1):9)。自身免疫性类风湿性病的实例包括但不限于类风湿性关节炎(KrennV.等，HistolHistopathol2000M;15(3):791;TischR，McDevittHO.ProcNatlAcadSciunitsSA1994年1月18日；91(2):437)和强直性脊柱炎(JanVoswinkel等，ArthritisRes2001;3(3):189)。自身免疫性腺病的实例包括但不限于胰腺病、I型糖尿病、曱状腺病、高歇病、曱状腺炎、自发性自身免疫性曱状腺炎、桥本甲状腺炎、特发性粘液水肿、卵巢自身免疫、自身免疫性抗精子不育、自身免疫性前列腺炎和I型自身免疫性多腺性综合征。疾病包括但不限于胰腺自身免疫病、1型糖尿病(CastanoL.andEisenbarthGS.Ann.Rev.Immunol.8:647;ZimmetP.DiabetesResClinPract1996年10月；34增刊:S125)、自身免疫性甲状腺病、高歇病(OrgiazziJ.EndocrinolMetabClinNorthAm2000年6月；29(2):339;SakataS.等，MolCellEndocrinol1993年3月；92(Y)J-1)、自发性自身免疫性曱状腺炎(Braley-MullenH.和YuS，JImmunol2000年12月15日；165(12):7262)、桥本曱状腺炎(ToyodaN.等，NipponRinsho1999年8月；57(8):1810)、特发性粘液水肿(MitsumaT.NipponRinsho,1999年8月；57(8):1759)、卵巢自身免疫(GarzaKM,等，JReprodImmunol1998年2月；37(2):87)、自身免疫性抗精子不育(DiekmanAB.等，AmJReprodImmunol.2000年3月；43(3):134)、自身免疫性前列腺炎(AlexanderRB.等，Urology1997年12月；50(6):893)和I型自身免疫性多腺性综合征(HaraT.等，Blood.1991年3月1日；77(5):1127)。自身免疫性胃肠病的实例包括但不限于慢性炎性肠病(GarciaHerolaA.等，GastroenterolHepatol.2000年1月；23(1):16)、月旨泻病(LandauYE.和ShoenfeldY.Harefliah2000年1月16日；138(2):122)、结肠炎、回肠炎和克罗恩病。例如但不限于寻常天疱疮、大疱性类天疱疮和落叶型天疱疮。自身免疫性肝病的实例包括但不限于肝炎、自身免疫性慢性活动性肝炎(FrancoA.等，ClinImmunolImmunopathol1990年3月；54(3):382)、原发性胆汁性肝硬变(JonesDE.ClinSci(Colch)1996年11月；91(5):551;StrassburgCP.等，EurJGastroenterolHepatol.1999年6月；11(6):595)和自身免疫性肝炎(MannsMP.JHepatol2000年8月；33(2):326)。自身免疫性神经病的实例包括但不限于多发性硬化(CrossAH.等，JNeuroimmuno12001年1月1日；112(1-2):1)、阿尔茨海默病(OronL.等，JNeuralTransmSuppL1997;49:77)、重症肌无力(InfanteAJ.AndKraigE,IntRevImmunol1999;18(l-2):83;OshimaM.等，EurJImmunol1990年12月；20(12):2563)、神经病、运动神经病(KornbergAJ.JClinNe腦ci.2000年5月；7(3):191);格林-巴利综合征和自身免疫性神经病(KusunokiS.AmJMedSci.2000年4月；319(4):234)、肌无力病、兰伯特伊顿二氏重症肌无力综合征(TakamoriM.AmJMedSci.2000年4月;319(4):204);副肿瘤性神经疾病、小脑萎缩、副月中瘤性小脑萎缩和僵人综合征(HiemstraHS.等，ProcNatlAcadSciunitsSA2001年3月27日；98(7):3988);非副肿瘤性僵人综合征、进行性小脑萎缩、脑炎、Rasmussen脑炎、肌萎缩性侧索硬化、Sydeham舞蹈病、GillesdelaTourette综合征和自身免疫性多内分泌腺疾病(AntoineJC.和HonnoratJ.RevNeurol(Paris)2000年1月；156(1):23);免疫障碍神经病(Nobile-OrazioE.等，ElectroencephalogrClinNeur叩hysiolSuppl1999;50:419);获得性神经性肌强直、先天性肌发育不全(VincentA.等，AnnNYAcadSci,1998年5月13日；841:482)、神经炎、一见神经炎(SoderstromM.等，JNeurolNeurosurgPsychiatry1994年5月；57(5):544)和神经退化疾病。自身免疫性肌肉疾病的实例包括但不限于肌炎、自身免疫性肌炎和原发性Sjogren综合征(FeistE.等，IntArchAllergyImmunol2000年9月；123(1):92)以及平滑肌自身免疫病(ZauliD.等，BiomedPharmacother1999年6月；53(5-6):234)。自身免疫性肾病的实例包括但不限于肾炎和自身免疫性间质性肾炎(KellyCJ.JAmSocNephrol1990年8月；1(2):140)。与生殖相关的自身免疫病的实例包括但不限于反复流产(TincaniA.等，Lupus1998;7增刊2:S107-9)。自身免疫性结締组织疾病的实例包括但不限于耳病、自身免疫性耳病(YooTJ.等，CellImmunol1994年8月；157(1):249)和自身免疫性内耳病(GloddekB.等，AnnNYAcadSci1997年12月29日；830:266)。自身免疫性系统性疾病的实例包括但不限于系统性红斑狼瘠(EriksonJ.等，ImmunolRes1998;17(l-2):49)和系统性硬化(RenaudineauY.等，ClinDiagnLabImmunol.1999年3月；6(2):156);ChanOT.等，ImmunolRev1999年6月；169:107)。传染遂疾病传染性疾病的实例包括但不限于慢性传染性疾病、亚急性传染性疾病、急性传染性疾病、病毒疾病、细菌疾病、原生动物疾病、寄生虫疾病、真菌疾病、支原体疾病和朊病毒疾病。与移植物移植相关的疾病的实例包括但不限于移植排斥、慢性移植排斥、亚急性移植排斥、过急性移植排斥、急性移植排斥和移植物抗宿主病。变应性疾病的实例包括但不限于哮喘、荨麻瘆(hives)、风渗(urticaria)、花粉变态反应、尘螨变态反应、毒液变态反应、化妆品变态反应、乳汁变态反应、化学品变态反应、药物变态反应、昆虫咬伤变态反应、动物鳞屑变态反应、有刺植物变态反应、毒漆变态反应和食物变态反应。癌症的实例包括但不限于癌症、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病。癌性疾病的具体实例包括〗旦不限于骨髓性白血病，例如慢性骨髓性白血病、急性骨髓性白血病伴成熟、急性早幼粒细胞性白血病、急性非淋巴细胞白血病伴嗜碱细胞增加、急性单核细胞白血病、急性粒-单核细胞白血病伴嗜酸粒细胞增多；恶性淋巴瘤，例如Birkitt氏非霍奇金淋巴瘤；淋巴细胞白血病，例如急性成淋巴细胞(lumphoblastic)白血病、慢性淋巴细胞白血病；骨髓增殖性疾病，例如实体瘤良性脑膜瘤、唾腺混合瘤、结肠腺瘤；腺癌，例如小细胞肺癌、肾癌、子宫癌、前列腺癌、膀胱癌、卵巢癌、结肠癌、肉瘤、月旨肉瘤、粘液样瘤、滑膜肉瘤、横紋肌肉瘤(肺泡)、骨外粘液样软骨肉瘤、Ewing肿瘤；其它癌症，包括睾丸和卵巢无性细胞瘤、成视网膜细胞瘤、Wilms肺瘤、成神经细胞瘤、恶性黑素瘤、间皮瘤、乳癌、皮肤癌、前列腺癌和卵巢癌。本申请设想的其它疾病包括激素和生长因子缺陷；矮小综合征、器官(例如肾脏)衰竭(EPO)缺陷等。正如所述，以上教导内容还可用于it断应用。因此，重组蛋白可为能够在靶器官中累积的诊断蛋白，并还可含有适于体内成像的可检测标记(例如GFP)。本发明的诊断蛋白/试剂的实例是抗体或其抗原结合片段。抗体可为双链或单链。在检验以下无限制意图的实施例时，本发明的其它目标、优势和新特征对本领域一般技术人员将变得显而易见。另外，本文叙述并在以下权利要求部分中要求保护的本发明的多个实施方案和方面的每一个都可在以下实施例中得到实验支持。实施例现在将参考以下实施例连同以上描述以非限制性方式阐述本发明。一般来说，本文使用的命名法和本发明使用的实验室方法包括分子学、生物化学、微生物学和重组DNA技术。在文献中完整地解释了这些技术。参见例如"MolecularCloning:AlaboratoryManual"Sambrook等，(1989);"CurrentProtocolsinMolecularBiology"I-III巻，Ausubel,R.M.编辑，(1994);Ausubel等，"CurrentProtocolsinMolecularBiology",JohnWileyandSons,Baltimore,Maryland(1989);Perbal,"APracticalGuidetoMolecularCloning",JohnWiley&Sons,NewYork(1988);Watson等,"RecombinantDNA",ScientificAmericanBooks,NewYork;Birren等(编辑)"GenomeAnalysis:ALaboratoryManualSeries",1-4巻，ColdSpringHarborLaboratoryPress,NewYork(1998);在美国专利第4,666,828、4,683,202、4,801,531、5,192,659和5,272,057号中陈述的方法；"CellBiology:ALaboratoryHandbook",I-III巻，Cellis,丄E.编4辱，(1994);"CurrentProtocolsinImmunology"I-III巻，ColiganJ.E.编辑，(1994);Stites等(编辑)，"BasicandClinicalImmunology"(第8版)，Appleton&Lange，Norwalk,CT(1994);Mishell和Shiigi(编辑)，"SelectedMethodsinCellularImmunology",W.H.FreemanandCo.,NewYork(1980);可用的免疫测定广泛描述于专利和科学文献，参见例如美国专利第3,791,932、3,839,153、3,850,752、3，850，578、3,853,987、3,867,517、3，879，262、3,901,654、3,935,074、3,984,533、3,996,345、4,034,074、4,098,876、4,879,219、5，0U,771和5,281,521号；"OligonucleotideSynthesis"Gait,M丄编辑，(1984);"NucleicAcidHybridization"Hames，B.D.和HigginsS丄编丰辱，(1985);"TranscriptionandTranslation"Hames,B.D.和HigginsS丄编辑，(1984);"AnimalCellCulture"Freshney，R丄编辑，(1986);"ImmobilizedCellsandEnzymes"IRLPress,(1986);"APracticalGuidetoMolecularCloning"Perbal,B.,(1984)和"MethodsinEnzymology"1-317巻,AcademicPress;"PCRProtocols:AGuideToMethodsAndApplications"，AcademicPress,SanDiego,CA(1990);Marshak等，"StrategiesforProteinPurificationandCharacterization-ALaboratoryCourseManual"CSHLPress(1996);所有这些文献都通过引用结合，如同其在本文完整陈述一样。其它一般性参考文献在整个本文件中提供。其中的方法被i人为是本领域众所周知的，提供它们是为了方<更读者。其中包含的所有信息都通过引用结合到本文中。实施例1在口應^f4^go>^裙,A勿應举祟參W小葳^f遂^邦gcz)^初动參，#并々^發才法'/、篇,BALB/C雌性小鼠,7-8周。潜絲雄备《:^^在^^建一将cDNA编码GCD(ATTC克隆#65696,SEQIDNO.3-4)亚克隆入含拟南齐04ra&Wojw^决a/z'a加)石威性内切几丁质酶基因的ER-靶向信号和烟草几丁质酶A的液泡靶向信号的质粒中。在可读框的5'末端，质粒含花椰菜花叶病毒的35S启动子，后接烟草花叶病毒(TMV)co翻译增强子元件。在3'末端，插入根癌农杆菌04gra/za"en'wmfwme/acz'e"s)的章鱼石威合酶终止子序列。由中间体载体取出表达盒，并连接入二元载体中。卡那霉素抗性由nos启动子驱动的NPTII基因赋予。辨,A勿應^捧必,》Sf—使用农杆菌转化胡萝卜细胞悬浮培养物。简单地讲，农杆菌用以上含GCD的载体通过电穿孔转化，并使用30mg/ml巴龙霉素选择。胡萝卜细胞用农杆菌转化，并使用在液体培养基中的60mg/ml巴龙霉素选择。将转化的胡萝卜细胞接种在固体选择培养基中，使得由单个细胞形成愈伤组织。鉴定并选择高蛋白表达系。进一步扩增愈伤组织，并转移至液体培养基。if迎蛋^l伊遂浙;tGC7)对于蛋白质印迹，通过SDS-PAGE分离蛋白提取物，转移至硝化纤维膜(AmershamLifeScience),并使用抗-GCD抗体(1:6500稀释)和过氧化物酶缀合的山羊抗兔HRP二抗(l:15,000稀释，Sigma)检测GCD。^i參《^器哞放义一选定愈伤组织的悬浮培养物在含4.4g/1MSD培养基(Duchefa,Holland)、9.9mg/1盐酸硫胺素(Duchefa,Holland)、30g/1蔗糖和0.1mg/12，4-二氯苯氧基乙酸(Sigma)的Murashige和Skoog(MS)液体培养基中培养。悬浮细胞培养物在振摇的Erlenmeyer培养瓶中栽培，用于接种IO升聚乙烯生物反应器，接着放大至IOO升聚乙烯生物反应器。栽培遗传修饰的细胞，用于在生物反应器中的重复的生长循环。口厲發秀一过夜饥饿小鼠(14-16小时)，然后将得到的植物细胞材料置于动物笼中。在2小时后，撤走植物材料，向动物给予它们的正常铜料。在又l、2、4和18小时后处死动物。取出每只动物的肝脏，冷冻在液氮中，储存于-70。C,直至分析。y^i欢袢^W教备用0.9%NaCl清洗每个肝组织样品，并用ULTRA-TURRAXT25基本型IKA-WERKE匀浆器，以低速(11,000-13,0001/分钟)用匀浆緩冲液(60mM磷酸盐柠檬酸盐、1.5%TritonX-IOO、1mMPMSF)(每克组织5ml緩冲液)在冰上匀化45-60秒。样品于4。C以lO，OOOg离心IO分钟。收集上清液，并分成等份，冷冻于-70。C,用于进一步的分析。伴#溏夯濰活^溯〖定使用对硝基苯-P-D-吡喃葡糖苷(Sigma)作为底物测定prGCD的酶活性。测定緩冲液含60mM磷酸盐-柠檬酸盐緩冲液pH-5.5、0.15%TritonX画IOO、0.125%牛磺胆酸钠。测定使用30、12或6^il样品在5.5ml总体积中以3个稀释度进行，与测定緩冲液温育，并加入底物至4mM终浓度。每15分钟取出970pl每种样品，并将30pi的5NNaOH加入到每种样品中。依据以401nm的吸光度检测的产物(对硝基苯；pNP)形成速率检测活性(Friedman,1999)。絲使用表达GCD的胡萝卜培养物，以便测试按照本发明教导内容产生和给予的重组蛋白在靶器官中的累积。由图l显而易见，肝脏中的GCD活性峰值在喂饲后2小时可见(酶活性增加30%)。该活性在喂饲后4小时回复至正常水平。控參t纽i^^-(/^i^口應传迷i垂脊仿餘义葳在不表达内源生长激素的垂体切除大鼠中检验植物细胞通过胃肠道系统传递重组hGH的能力，使hGH水平分析更简单和精确。錄才法控#细應教#~使用诱导型RNA依赖性RNA聚合酶增强的稳定细胞表达系统，生产产hGH的烟草BY-2细胞。该系统被啦支成两种质粒。第一种质粒携带处于35S启动子控制之下的阻抑子-LacI基因和潮霉素选择标记，后接IRES(内部核糖体整合位点)。在第二种质粒中，侧翼为天然前导序列和ER滞留信号的植物密码子优化的hGH基因(SEQIDNO.l-2)在诱导型RNA依赖性RNA聚合酶的次基因组启动子控制下被克隆。另外，所述质粒含RNA依赖性RNA聚合酶(得自TVCV-烟草脉明病毒)、IRES-NPTII选择标记基因和阻断病毒复制机器的LacI结合位点。向携带两种质粒的细胞加入20mMIPTG,诱导GH表达。表达水平介于50-700吗/g鲜重之间。对喂飼hGH(GenBank登录号P01241)的大鼠血清和器官中的hGH使用ELSIA进行重组hGH摄取的测定。两组n=4大鼠一垂体切除的SpragueDawley喂饲(l)天然BY2细胞(-烟草BY-2细胞，由Nagata,Toshiyuki;Hasezawa，Seiichiro编辑；Inz',DirkSpringer2004);和(2)表达GH的BY2细胞(By2Icon阻抑子(B5.1+21450)GHsNatER系18，用IPTG诱导)。大鼠随意喂饲仅植物细胞达24小时(无大鼠饲料)。在24小时后，麻醉大鼠并收集血液，此后处死大鼠，收集其器官进行hGH摄取检测。收集的器官包括肌肉、肝脏和脾脏。由血液分离血清。所有器官都保持于-70。C,直至分析。通过ELISA检测血清和器官中的hGH水平(人生长激素酶免疫测定测试试剂盒BioCheck,Inc.目录号BC-1033)。潜果喂饲表达GH的BY2细胞的4只大鼠中有1只表现出显著提升的血清hGH水平。喂祠表达GH的BY2细胞的4只大鼠中有2只在它们的肌肉中具有显著提升的GH水平。所有其它大鼠(对照、喂饲BY2原初细胞)在血清或肌肉中都没有可检测的GH水平，与它们的垂体切除表型一致。结果示于图2，并归纳于以下的表l。力<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table>实施例3控參餘/rGCD口應传迷發义^如在以上实施例1中所述，检验植物细胞通过消化系统传递重组hGCD以便将重组蛋白摄取入机体中的能力。絲、辦賴發才法义^:使用10-11周的12只SpragueDawley雌性大鼠。口麽發秀过夜饥饿小鼠(14-16小时)，然后将得到的植物细胞材料(随意，10g/大鼠)置于动物笼中。在2小时后，撤走植物材料，向动物给予它们的正常饲料。在又1、2、4和24小时后处死动物(每个时间点3只动物)。取出每只动物的肝脏和脾脏，冷冻在液氮中，储存于-7(TC,直至分析。^^屋;^^遂逾欢^##:如在实施例1中所述一样。潜耒使用表达GCD的胡萝卜培养物，以便测试按照本发明教导内容产生和口服给药的重组蛋白在靶器官中的累积。由图3a和3b显而易见，在肝脏和脾脏组织中观察到GCD增加，GCD活性峰值在喂饲后1小时可见(脾脏酶活性增加26%,肝脏酶活性增加44%)。该活性在喂饲后4小时回复至正常水平。口厲传迷j垂傳械义薦在单次口服(PO)给药植物细胞材料后，检查植物细胞通过胃肠道传递FSH至血液的能力。《j^^在^游建一将具有其天然信号的FSHoc和(3链的编码DNA亚克隆入质粒中，该质粒含花椰菜花叶病毒的35S启动子，该启动子后接烟草花椰菜花叶病毒(TMV)co翻译增强子。在3'末端，插入根癌农杆菌(Xgro/2acter/iW7fw附e/ac/era)的章鱼碱合酶终止子序列。由中间体载体取出表达盒，并连接入二元载体中。FSHP链具有由nos启动子驱动的NPTII基因赋予的卡那霉素抗性，FSHot链具有由nos启动子驱动的aphIII基因赋予的潮霉素抗性。教#/籴。逸^脊必;^》\^一使用农杆菌转化胡萝卜细胞悬浮培养物。简单地讲，农杆菌用以上FSH(3载体通过电穿孔转化，并使用30mg/ml巴龙霉素选择。胡萝卜细胞用农杆菌转化，并使用在液体培养基中的60mg/ml巴龙霉素选4奪。将转化的胡萝卜细胞接种在固体选择培养基中，使得由单个细胞形成愈伤组织。鉴定并选择高蛋白表达系。进一步扩增愈伤组织，并转移至液体培养基。然后用携带FSHa链的质粒再转化细胞，并如上使用100mg/ml潮霉素选择。使用蛋白质印迹和ELISA测定评价表达水平，选择最佳表达系。这些表达水平为l隱20iug/g鲜重。动參一口麽發秀一通过经口管饲给予3只11周龄大鼠(200g)10ml/kg植物胡萝卜细胞。在给药前以及给药后10、20、30、60、120和240分钟取血样，使用BioCheckInc的试剂盒通过ELISA检测FSH浓度。絲如在图4中所示，在给药后IO分钟FSH血清水平增加至少5倍，此后它们回复至基线。实施例5劣"f^辨,A^^4这^^^奎WGCD辨水^和浮丝测定本发明的植物细胞在脱水后保持活性的能力。冻干如在实施例1中所述生产的几百克表达GCD的胡萝卜细胞，并测试其特异性蛋白表达和活性(参见以上的实施例1和3)。袭席浙賴务一用1ml提取患处液pH=7.2(20mM磷酸盐緩冲液pH=7,2、20mMEDTA、20mML-抗坏血酸、1%TritonX-100)提取50mg脱水细胞。遞df冷#伊遂浙定GCD4^—对于蛋白质印迹，通过SDS-PAGE分离蛋白提取物，转移至硝化纤维膜(AmershamLifeScience),并使用抗-GCD抗体(1:6500稀释)和过氧化物酶缀合的山羊抗兔HRP二抗(l:15,000稀释)(Sigma)检测GCD。潜,图5显示了冻干植物细胞对新鲜细胞中的GCD表达。蛋白载量基于通过Bradford进行的总蛋白检测。如所示，在脱水制备物中的GCD表达水平类似于新鲜制备物中的GCD表达水平。检测裂解物中的总蛋白，并评价冻干和新鲜细胞裂解物中的活性GCD量。结果示于以下表2。总蛋白mg/mlGCD浓度iug/ml冻干细月包2.5822.010新鲜细月包2.7992.505因此，显然，本发明的脱水制备物保持其生物活性。总之，以上结果首次表明了非分离的植物表达的重组蛋白穿过胃肠道移动并在内脏器官累积的能力。要认识到的是，为明晰起见而在单独实施方案背景下描述的本发明的某些特征还可以在单个实施方案中组合才是供。相反地，为简化起见而在单个实施方案背景下描述的本发明的多种特征也可单独地或以任意适宜的子组合提供。尽管已描述了本发明及其具体实施方案，但显然，许多改变、修改和变更对本领域技术人员显而易见。因此，预期包括所有这些改变、修改和变更，它们落在随附权利要求的精神和广泛范围内。本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请以及GenBank登录号都通过引用整体结合到本说明书中，其程度如同每个单独的出版物、专利或专利申请或GenBank登录号具体地和单独地被指出通过引用结合到本文中。另外，本申请中引用或标出的任意参考文献都不应被理解为认可这些参考文献可用作本发明的现有技术。权利要求1.一种将生物活性形式的生物活性重组生物分子系统传递给有需要的受试者的方法，所述方法包括经口或粘膜给予受试者治疗有效量的植物细胞，所述植物细胞表达外源生物活性重组生物分子，由此将生物活性形式的生物活性重组生物分子系统传递给所述受试者。2.—种将生物活性形式的生物活性重组生物分.子局部传递给有需要的受试者的方法，所述方法包括经口或粘膜给予受试者治疗有效量的植物细胞，所述植物细胞表达外源生物活性重组生物分子，由此将生物活性形式的生物活性重组生物分子局部传递给所述受试者。3.权利要求1或2的方法，其中所述植物细胞包含基本完整的细胞壁。4.权利要求1或2的方法，其中所述植物细胞包含基本完整的细胞膜。5.权利要求1或2的方法，其中所述植物细胞包含基本完整的细胞壁和细胞膜。6.权利要求1或2的方法，其中所述植物细胞作为分离的细胞给予。7.权利要求1或2的方法，其中所述植物细胞作为脱水的植物细胞给予。8.权利要求1或2的方法，其中所述重组生物分子是多核苷酸或多肽。9.权利要求1或2的方法，其中所述重组生物分子是多肽。10.权利要求1或2的方法，其中所述重组生物分子选自治疗性生物分子、诊断性生物分子和药妆品。11.权利要求7的方法，其中所述脱水的植物细胞还包含赋形剂。12.权利要求1或2的方法，其中所述植物细胞包括苜蓿植物细胞。13.权利要求1或2的方法，其中所述植物细胞包括烟草植物细胞。14.权利要求1或2的方法，其中所述植物细胞包括得自烟草细胞系的植物细胞。15.权利要求1或2的方法，其中所述植物细胞包括植物根细胞。16.权利要求15的方法，其中所述植物根细胞选自发根农杆菌(v4grokcten'wmn7zzogew&y)转化的才艮细胞、芽菜细胞、姜细胞、辣才艮细胞和胡萝卜细胞。17.权利要求15的方法，其中所述植物根细胞是胡萝卜细胞。18.权利要求1或2的方法，其中所述重组生物分子选自原核蛋白、真核蛋白、嵌合蛋白和病毒蛋白。19.权利要求18的方法，其中所述病毒蛋白是传染性法氏嚢病病毒的病毒蛋白VPII。20.权利要求18的方法，其中所述真核蛋白是人干扰素卩。21.权利要求18的方法，其中所述真核蛋白是人凝血因子。22.权利要求18的方法，其中所述真核蛋白是人X因子。23.权利要求18的方法，其中所述真核蛋白是人高甘露糖蛋白。24.权利要求18的方法，其中所述真核蛋白是人溶酶体酶。25.权利要求18的方法，其中所述真核蛋白是人葡糖脑苷脂酶。26.权利要求18的方法，其中所述真核蛋白是人oc半乳糖苷酶。27.权利要求18的方法，其中所述真核蛋白是人生长激素。28.权利要求18的方法，其中所述真核蛋白是FSH。29.权利要求18的方法，其中所述真核蛋白是乙酰胆碱酯酶。30.权利要求1或2的方法，其中所述重组生物分子在所述受试者中是非免疫原性的。31.—种药物组合物，所述药物组合物包含作为活性成分的植物细胞和药物可接受的载体，所述植物细胞表达外源生物活性的重组生物分子。32.权利要求31的药物组合物，其中所述药物可接受的载体是非免疫原性载体。33.权利要求31的药物组合物，其中所述药物可接受的载体不刺激肠相关的淋巴组织。34.—种用于在受试者中局部传递生物活性生物分子的单位剂型，所述单位剂型包含治疗有效量的表达外源生物活性生物分子的植物细月包。35.权利要求34的单位剂型，所述单位剂型配制用于口服给药。36.权利要求34的单位剂型，所述单位剂型配制用于粘膜给药。37.权利要求34的单位剂型，其中所述植物细胞包括脱水植物细胞。38.—种用于在受试者中系统传递生物活性生物分子的单位剂型，所述单位剂型包含治疗有效量的表达外源生物活性生物分子的植物细力包。39.权利要求38的单位剂型，所述单位剂型配制用于口服给药。40.权利要求38的单位剂型，所述单位剂型配制用于粘膜给药。41.权利要求38的单位剂型，其中所述植物细胞包括脱水植物细胞。42.—种在有需要的受试者中治疗疾病的方法，所述方法包括经肠或粘膜给予受试者治疗有效量的植物细胞，所述植物细胞表达外源生物活性生物分子，由此治疗受试者中的疾病。43.权利要求42的方法，其中所述生物活性生物分子包括重组人葡糖脑苷脂酶蛋白，所述疾病是高歇病。44.权利要求42的方法，其中所述生物活性生物分子包括重组人葡糖脑苦脂酶蛋白，所述疾病是法布里病。45.权利要求42的方法，其中所述生物活性生物分子包括重组人葡糖脑苷脂酶蛋白，所述疾病是癌症。46.权利要求42的方法，其中所述疾病是系统疾病。47.权利要求42的方法，其中所述疾病是慢性疾病。48.权利要求42的方法，其中所述疾病是急性疾病。49.表达外源生物活性生物分子的植物细胞用于生产药物的用途。50.权利要求49的用途，其中所述植物细胞包含基本完整的细胞壁。51.权利要求49的用途，其中所述植物细胞包含基本完整的细胞膜。52.权利要求49的用途，其中所述植物细胞包含基本完整的细胞壁和细胞膜。53.权利要求49的用途，其中所述植物细胞作为分离的细胞给予。54.权利要求49的用途，其中所述植物细胞作为脱水的植物细胞给予。55.权利要求49的用途，其中所述重组生物分子是多核苦酸或多肽。56.权利要求49的用途，其中所述重组生物分子是多肽。57.权利要求49的用途，其中所述重组生物分子是治疗性生物分子、诊断性生物分子和药妆品。58.权利要求54的用途，其中所述脱水的植物细胞还包含赋形剂。59.权利要求49的用途，其中所述植物细胞包括苜蓿植物细胞。60.权利要求49的用途，其中所述植物细胞包括得自烟草的植物细胞。61.权利要求49的用途，其中所述植物细胞包括得自烟草细胞系的才直物细月包。62.权利要求49的用途，其中所述植物细胞包括植物根细胞。63.权利要求62的用途，其中所述植物根细胞选自发根农杆菌(jgra6ac/en'wmn7zzogeway)转化的根细月包、芽菜细胞、姜细胞、辣根细胞和胡萝卜细胞。64.权利要求62的用途，其中所述植物根细胞是胡萝卜细胞。65.权利要求49的用途，其中所述重组生物分子选自原核蛋白、真核蛋白、嵌合蛋白、病毒蛋白。66.权利要求65的用途，其中所述病毒蛋白是传染性法氏嚢病病毒的病毒蛋白VPII。67.权利要求65的用途，其中所述真核蛋白是人干扰素(3。68.权利要求65的用途，其中所述真核蛋白是人凝血因子。69.权利要求65的用途，其中所述真核蛋白是人X因子。70.权利要求65的用途，其中所述真核蛋白是人溶酶体酶。71.权利要求65的用途，其中所述真核蛋白是人葡糖脑苦脂酶。72.权利要求65的用途，其中所述真核蛋白是人ot半乳糖苦酶。73.权利要求65的用途，其中所述真核蛋白是人生长激素。74.权利要求65的用途，其中所述真核蛋白是FSH。75.权利要求65的用途，其中所述真核蛋白是乙酰胆碱酯酶。76.权利要求65的用途，其中所述真核蛋白是高甘露糖蛋白。77.权利要求49的用途，其中所述重组生物分子是非免疫原性的。78.权利要求49的用途，其中所述药物配制用于系统传递。79.权利要求49的用途，其中所述药物配制用于局部传递。全文摘要一种将生物活性形式的生物活性重组生物分子系统传递给有需要的受试者的方法，该方法包括经肠或粘膜给予受试者治疗有效量的植物细胞，所述植物细胞表达外源生物活性重组生物分子，由此将生物活性形式的生物活性重组生物分子系统传递给受试者。文档编号C12N15/82GK101278052SQ200680034239公开日2008年10月1日申请日期2006年7月18日优先权日2005年7月18日发明者E·阿尔蒙,Y·沙尔蒂尔申请人:普罗塔里克斯有限公司