专利名称：兰属地生兰种子无菌播种育苗方法
技术领域：
本发明涉及一种兰属地生兰种子无菌播种育苗的方法。
技术背景根据刘仲健、陈心启等编著的《中国兰属植物》 一书记载，全世界约有兰属(OwZ)W/wm)植物68种，依生活习性分为地生、附生、腐生三类。 其中腐生种类研究不多，国内外对碧玉兰、虎头兰、大雪兰、黄蝉兰等附 生种类的组织培养技术研究较早，无菌播种育苗技术也比较成熟。莲瓣兰、 豆瓣兰、春兰、春剑等地生种类使用常规兰属附生兰种子无菌播种技术， 播种后种子几乎不能萌发，国内外研究者对兰属地生兰种子无菌播种技术 进行了一些改良，包括对种子进行超声波震荡、NaOH或KOH浸泡、剪破 种皮等处理后接种，改进培养基配方，优化培养条件等，但种子萌发率也 常不足1%甚至更低。 发明内容本发明的目的是解决目前兰属地生兰种子无菌播种萌发率低的问题，提 供一种提高兰属地生兰种子无菌播种萌发率的方法。本发明是这样实现的在常规兰属地生兰种子无菌播种育苗的过程中， 包括无菌播种、无菌实生苗培养、炼苗步骤，在种子无菌播种后增加低温 黑暗预培养步骤，目的在于模仿兰属地生兰原生地环境，利用低温黑暗让 兰属地生兰种子完成后熟过程以促迸萌发。本发明的具体内容为(1)无菌播种采取6 9成熟(根据各个种从授粉到蒴果成熟开裂的 时间确定)且尚未开裂的蒴果，切去残留花被、合蕊柱及过长果柄，表面 用75%酒精擦拭干净，转入超净工作台上，以0.1% HgCl2中浸泡消毒15~20 分钟，无菌水清洗4 5次，然后剖开蒴果取出种子，撒播于播种培养基上， 培养基配方为1/4MS (大量、微量元素均改为MS培养基的1/4，其余成分
不变，下同)+6-BA0.1~l mg.L" +NAA 1 5 mg,L"+活性炭2 g.L"+椰乳100 mL丄"；(2)预培养播种后将种子连同培养容器置于低温黑暗条件下进行预培养，预培养温度为0 10°C ，时间为2~6个月；(3)无菌实生苗培养完成预培养后，将种子连同培养容器移入光照培养室培养，待种子萌发形成根状茎后，转接入增殖培养基，使根状茎快速增殖，培养基配方为1/4MS+6-BA 0.1 0.5 mg丄"+NAA 0.5~2 mg丄"+活性 炭2g，L"，分批挑选生长健壮的根状茎转入分化培养基，使芽大量分化， 培养基配方为l/4MS+6-BA2~5 mg.I/1 +NAA0.5~1 mg丄-1，然后将分化出的 小苗转入生根壮苗培养基，培养基配方为1/4MS+6-BA 0.1 0.5 mg-L" +NAAl~4mg'L''+香蕉泥50~150g L '，所有培养基pH为5.4~5.8，光照培 养室温度为22土3。C，光照强度25 30pmohm《s"，光照时间14h'd";(4)炼苗将生长良好的无菌实生苗转移到15 25 "C的炼苗棚中培 养15天后，逐渐揭开瓶盖，过渡2~3天，然后取出组培苗，洗净培养基， 以水苔包裹根部，10 15株为一丛，合栽于9cmX9cm(口径X高)营养钵中，初期注意遮光保温保湿，5个月后即可移栽到普通兰花栽培基质中。本发明所提供的方法使兰属地生兰种子无菌播种平均萌发率比现有技 术提高10倍以上，大幅度提高了兰属地生兰播种育苗的效率，找到了一种 实生苗培育的有效方法，具有操作简单、育苗周期短、实用性强、利于规 模化生产等优点，并为兰属地生兰杂交选育新品种打下坚实基础。
具体实施方式
实施例l:(1)播种采取7个月果龄的莲瓣兰蒴果，切去残留花被、合蕊柱及过长果柄，表面用75%酒精擦拭干净，转入超净工作台上，以0.P/。HgCl2 中浸泡消毒15分钟，无菌水清洗5次，然后剖开蒴果取出种子，撒播于播 种培养基上，培养基配方为1/4MS (大量、微量元素均改为MS培养基的 1/4，其余成分不变，下同)+6-BA0.1 mg丄"+NAA 3 mg七"+活性炭2g.L"+椰乳lOOmL.U1;(2) 预培养播种后将种子连同培养容器置于4'C恒温黑暗条件下预 培养3个月；(3) 无菌实生苗培养完成预培养后，再将种子连同培养容器移入光 照培养室培养，3个月后种子陆续萌发，待种子萌发形成根状茎后转接入增殖培养基，使根状茎快速增殖，培养基配方为1/4MS+6-BA 0.25 mg-L—1 +NAA 2 mg，L"+活性炭2 g丄人分批挑选生长健壮的根状茎转入分化培养 基，使芽大量分化，培养基配方为1/4MS+6-BA4 mg七"+NAA 1 mgl/1， 然后将分化出的小苗转入生根壮苗培养基，培养基配方为1/4MS+6-BA0.1 mg.L—1 +NAA 1 mg.L"+香蕉泥150 g七"，所有培养基pH为5.4 5.8，光照 培养室温度为22±3°C，光照强度25 30 |imol'nf2*s"，光照时间14 1vd"， 播种1年后抽样统计种子萌发率为12.7%;(4) 出瓶炼苗将生长良好的无菌实生苗转移到20 25 "C的炼苗棚 中培养15天后，逐渐揭开瓶盖，过渡2 3天，然后取出组培苗，洗净培 养基，以水苔包裹根部，10 15株为一丛，合栽于9 cmX9 cm(口径X高) 营养钵中，初期注意遮光保温保湿，5个月后即可移栽到普通兰花栽培基 质中，炼苗成活率为95%。实施例2:采取6个月果龄的豆瓣兰蒴果，种子无菌播种后置2 8°C自然变温黑 暗条件下培养5个月，其它步骤按实施例1的方法进行，抽样统计种子萌 发率为25.5%。实施例3:采取6.5个月果龄的春兰X春剑杂交蒴果，种子播种后置7'C恒温黑暗 条件下培养4个月，其它步骤按实施例1的方法进行，抽样统计种子萌发 率为21.4%。
权利要求
1、一种兰属地生兰种子无菌播种育苗的方法，包括无菌播种、无菌实生苗培养、炼苗步骤，其特征在于种子无菌播种后增加低温黑暗预培养步骤。
2、 根据权利要求1中所述兰属地生兰种子无菌播种育苗的方法，其特 征在于采用发育到6 9成熟的蒴果内种子进行无菌播种。
3、 根据权利要求1中所述兰属地生兰种子无菌播种育苗的方法，其特 征在于低温黑暗条件下预培养温度为0~10°C ，时间为2~6个月。
4、 根据权利要求1中所述兰属地生兰种子无菌播种育苗的方法，其特 征在于无菌播种、无菌实生苗培养阶段使用的基本培养基为1/4MS。
5、 根据权利要求1中所述兰属地生兰种子无菌播种育苗的方法，其特 征在于兰属地生兰的种类为莲瓣兰、豆瓣兰、春兰、春剑。
全文摘要
本发明提供了一种兰属地生兰种子无菌播种育苗的方法，包括无菌播种、无菌实生苗培养、炼苗步骤，其特征在于种子无菌播种后增加低温黑暗预培养步骤。目的是通过模仿兰属地生兰原生地环境，利用低温黑暗让兰属地生兰种子完成后熟过程以促进萌发。本发明使兰属地生兰种子无菌播种平均萌发率比现有技术提高10倍以上，具有简单实用、育苗周期短、利于规模化生产等优点，并为兰属地生兰杂交选育新品种打下坚实基础。
文档编号C12N5/04GK101124892SQ200710066230
公开日2008年2月20日 申请日期2007年9月25日 优先权日2007年9月25日
发明者和加卫, 和寿星, 燕 李, 李兆光, 泽 杨, 杨少华, 薛润光 申请人:云南省农业科学院高山经济植物研究所