专利名称：猪精液冷冻保存管及其猪精液冷冻保存方法
技术领域：
本发明涉及一种猪精液冷冻保存管及其猪精液冷冻保存方法。
背景技术：
在我国，猪是最主要的饲养家畜，猪肉产量约占全国肉类总量的
70%。随着人民生活水平的提高，国内外市场对商品猪的要求，已逐渐 从数量转化到质量(如肉质等)。猪的育种方向也从主要着眼于生长 速度与瘦肉率的提高，转变为改善猪肉的品质，提高肉的风味。传统 的选育方式世代间隔时间长，已不能适应市场需求，而采用猪冷冻精 液技术，可充分利用优良种畜，縮短良种选育世代间隔时间，快速建 立新的适合市场要求的种猪和商品猪杂交繁育体系。同时，近千年的 饲养史，己在我国形成了数百种各具特色的地方品种，这是一份非常 宝贵的财产，但近年国外猪种的引进杂交，已使我国有相当数量的地 方品种灭绝或面临灭绝，而采用猪精液及胚胎冷冻保存技术可有效保 存我国地方猪种质资源，具有不可估量的社会意义和效益。
虽然草食家畜精液超低温(-196。C)冷冻保存技术已在现代化畜牧 生产、种质资源保存中发挥着重要作用。但猪冷冻精液一直难以在生 产中大范围推广应用，其原因有两个， 一是猪精子细胞质膜中胆固醇 与磷脂比率显著低于草食动物，在冷冻过程中精子膜的离子通透性增 强，脂类物质流失，导致冻精活率低、受胎率低。二是猪一次配种的精 液量大(约为50毫升)，使用传统的冷冻精液剂型如安瓿(约1 2 毫升)、颗粒(约0. 5毫升)、细管(约0. 25毫升)，每次配种均需 解冻相当数量(约10 20支)的冻精，不仅操作烦琐，而且受精效果 也大受影响。
发明内容
针对以上问题，本发明的目的是提供一种能提高冷精活率的猪精 液冷冻保存管及其猪精液冷冻保存方法。
一种猪精液冷冻保存管，包括保存管，其特征在于保存管为双 层管，双层管的两容器开口相反。本发明所述的双层管是指在中央柱 形容器外还设有一圈环形容器的管。
一种猪精液冷冻保存方法，包括
a、 采精并用等温的BTS (Beltsville thawing solution)稀释 液稀释一倍，
b、 在15。C条件下平衡2小时，然后1000转离心10分钟，
c、 离心后去除精清，精子沉淀用冷却稀释液稀释，使精子密度 为2X109个/毫升。稀释后的精液在5'C条件下平衡2小时，
d、 然后再用冷冻稀释液1:1稀释，使精子的最终密度为1X109 个/毫升，
其特征在于将以上步骤处理的冷冻稀释后的精液装入本发明的 猪精液冷冻保存管的环形容器中，然后将猪精液冷冻保存管插入液氮 上，熏蒸数分钟后，直接投入液氮中长期保存。
本发明是通过利用两容器开口相反的双层管，即在中央柱形容器 外还设有一圈开口相反的环形容器的双层管实现的。所以，在冷冻过 程中能增加精液与液氮的接触面积，加快精液冷冻速率，降低冷冻对 精子的损伤，提高冷精活率；还具有成本低，操作便当，功效高，保 证受胎率等优点。
图1是本发明的一种猪精液冷冻保存管结构示意图， 图2是图1的右视图。
图中管体l、环形容器2、柱形容器3。
具体实施方式
以下结合附图和实施例进行详述
图中的猪精液冷冻保存管为圆柱形双层管，即双层管为圆柱形管。 使用时，只要将提取的猪精液装入双层管形成的环形容器2中，并将
双层管插入液氮中，就可以增加冷冻过程中精液与液氮的接触面积， 加快精液冷冻速率，降低冷冻对精子的损伤，提高冷精活率。为了便 于制造，降低成本，双层管用塑料材料制成。为了满足猪一次人工授 精剂量，最大限度地简化操作次数，提高功效，降低人工成本，确保 受胎率，双层管的环形容器2的容积为5 15 ml。 本发明的方法实施例如下
1、猪精液预处理。选择繁殖力高、体格健壮的金华种公猪，采用手握法采精。收集精子丰富部分，经4层灭菌纱布过滤去除胶体后，
立即测精液量，并检查精子活率，收集精子活率在75%以上的精液约 150毫升，用等温的BTS (Beltsville thawing solution)稀释液稀释 一倍。在15"C条件下平衡2小时，然后1000转离心10分钟。
2、 精液冷却处理。将预处理的猪精液离心后去除精清，精子沉淀 用冷却稀释液稀释，使精子密度为2Xl(T个/毫升。稀释后的精液在5 'C条件下平衡2小时。冷却稀释液的配方为100毫升稀释液中含80 毫升11%的乳糖和20毫升卵黄。
3、 精液冷冻处理。将冷却处理后的精液再用冷冻稀释液1:1稀释， 使精子的最终密度为1X109个/毫升。然后将精液装入本发明的猪精液 冷冻保存管的环形容器(2)中，每管装5 10毫升，置于液氮面上3 厘米，熏蒸20分钟后，直接投入液氮中长期保存。
综上所述，本发明方法的要点是将猪精液预处理和精液冷却处 理后的冷冻稀释后的精液装入本发明的猪精液冷冻保存管的环形容器 中，然后将猪精液冷冻保存管插入液氮上，熏蒸数分钟后，直接投入 液氮中长期保存。
为了检测本发明效果，浙江省金华种猪场提取了依次按照本发明 实施例一的步骤处理保存的猪精液和传统处理保存在麦管中的猪精液 各0.25毫升，置于52。C水浴锅中20秒解冻，在显微镜下检测精力活 力，其中本发明处理保存的猪精液解冻后精子活率为37. 1%，麦管处 理保存的猪精液解冻后活率为35.9%。
为了满足猪一次人工授精剂量，每根猪精液冷冻保存管装5 15 毫升冷冻稀释后的猪精液。为提高处理保存效果，将装有冷冻稀释猪 精液的猪精液冷冻保存管插置于液氮面上3厘米，熏蒸20分钟后，再
直接投入液氮中长期保存。
显然，本发明中的BTS稀释液配方为每升稀释液含37克葡萄糖、 6克柠檬酸钠、0.75克氯化钾、1.25克碳酸氢钠、1.25克乙二胺四醋 酸、100000单位青霉素和100毫克链霉素，冷却稀释液配方为100 毫升稀释液含80毫升11%的乳糖和20毫升卵黄，冷冻稀释液配方 为冷却稀释液中添加4%甘油和0.5%十二醇硫酸钠。
权利要求
1、一种猪精液冷冻保存管，包括保存管，其特征在于保存管为双层管，双层管的两容器开口相反。
2、 根据权利要求1所述的猪精液冷冻保存管，其特征在于用塑 料材料制成。
3、 根据权利要求1或2所述的猪精液冷冻保存管，其特征在于 双层管为圆柱形管。
4、 根据权利要求3所述的猪精液冷冻保存管，其特征在于双层管的环形容器(2)的容积为5 15 ml。
5、 根据权利要求1或2所述的猪精液冷冻保存管，其特征在于 双层管的环形容器(2)的容积为5 15 ml。
6、 一种猪精液冷冻保存方法，包括a、 采精并用等温的BTS (Beltsville thawing solution)稀释 液稀释一倍，b、 在15"C条件下平衡2小时，然后1000转离心10分钟，c、 离心后去除精清，精子沉淀用冷却稀释液稀释，使精子密度为 2X109个/毫升。稀释后的精液在5。C条件下平衡2小时，d、 然后再用冷冻稀释液1:1稀释，使精子的最终密度为1X109 个/毫升，其特征在于将以上步骤处理的冷冻稀释后的精液装入本发明的 猪精液冷冻保存管的环形容器(2)中，然后将猪精液冷冻保存管插入 液氮上，熏蒸数分钟后，直接投入液氮中长期保存。
7、 根据权利要求6所述的猪精液冷冻保存的方法，其特征在于 每根猪精液冷冻保存管装5 15毫升冷冻稀释后的猪精液。
8、 根据权利要求6或7所述的猪精液冷冻保存的方法，其特征在于将装有冷冻稀释猪精液的猪精液冷冻保存管插置于液氮面上3厘米，熏蒸20分钟后，再直接投入液氮中长期保存。
9、 根据权利要求8所述的猪精液冷冻保存的方法，其特征在于 BTS稀释液配方为每升稀释液含37克葡萄糖、6克柠檬酸钠、0.75克 氯化钾、1.25克碳酸氢钠、1.25克乙二胺四醋酸、100000单位青霉 素和100毫克链霉素，冷却稀释液配方为100毫升稀释液含80毫升 11%的乳糖和20毫升卵黄，冷冻稀释液配方为冷却稀释液中添加4 %甘油和0. 5%十二醇硫酸钠。
10、 根据权利要求6或7所述的猪精液冷冻保存的方法，其特征 在于BTS稀释液配方为每升稀释液含37克葡萄糖、6克柠檬酸钠、 0.75克氯化钾、1.25克碳酸氢钠、1.25克乙二胺四醋酸、IOOOOO单 位青霉素和IOO毫克链霉素，冷却稀释液配方为IOO毫升稀释液含 80毫升11%的乳糖和20毫升卵黄，冷冻稀释液配方为冷却稀释 液中添加4%甘油和0. 5%十二醇硫酸钠。
全文摘要
本发明涉及一种猪精液冷冻保存管及其猪精液冷冻保存方法。一种猪精液冷冻保存管，包括保存管，其特征在于保存管为双层管，双层管的两容器开口相反。猪精液冷冻保存方法的要点是将猪精液预处理和精液冷却处理后的冷冻稀释后的精液装入本发明的猪精液冷冻保存管的环形容器中，然后将猪精液冷冻保存管插入液氮上，熏蒸数分钟后，直接投入液氮中长期保存。具有在冷冻过程中能增加精液与液氮的接触面积，加快精液冷冻速率，降低冷冻对精子的损伤，提高冷精活率；还具有成本低，操作便当，功效高，保证受胎率等优点。
文档编号C12M1/00GK101200688SQ200710156398
公开日2008年6月18日 申请日期2007年10月30日 优先权日2007年10月30日
发明者俞颂东 申请人:华坚青;俞颂东