专利名称：满天星花卉的快速育成方法
技术领域：
本发明涉及一种满天星花卉新品种的快速育成方法，属于生物技术领域。
背景技术：
满天星(Gypsophila paniculata L.)又名霞草、丝石竹、六月雪，系石竹科丝石竹属草本植物。满天星茎枝纤细，分枝繁茂，无数小白花着生在众多纤细小枝上，犹如繁星点点，极富立体感，可作为各种花束或花篮插花的陪衬，具有独特的魅力，是世界上最流行的鲜切花配花之一。
近几年来由于花卉市场的迅速发展，满天星种植面积大幅度上升，种苗的需求量也随之加大。现市场上种植的满天星种苗大多从国外引进，但经过多年栽培后，品种退化严重，导致植株矮小，花径变小，重瓣率降低，花期不一，畸形花增多。在满天星的切花栽培与新品种选育过程中发现满天星发生芽变或枝变的机率比较高，其中不乏有观赏性较好的变异，且满天星多为一株或一枝发生突变。如果采用常规的种子繁育方法，则较难将筛选的优良性状固定下来，且育成新品种的周期较长。尤其对芽变满天星，其种子大多发育不正常，采收后发芽率极低，且后代易发生分离。
在满天星规模化生产方面，已有的报道多为以茎尖作为外植体进行组织培养。在组织培养研究方面，未有以优良性状枝条进行组培，快速育成满天星新品种的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能保持和固定满天星花团大、色白、重瓣多、枝硬等优良种性的满天星花卉新品种的快速育成方法。
本发明通过如下的技术方案实现一种满天星花卉的快速育成方法，其特征在于经过下列步骤 1)品种优良性状的筛选在植株的盛花期，选择生长健壮、无病虫害、无畸形、花型与株型优美的芽变枝条； 2)外植体的选择在选定的发生芽变的开花枝上分离出嫩茎或/和茎尖作为外植体； 3)外植体灭菌将分离出来的嫩茎或/和茎尖放在洗衣粉水中浸泡3～5min后，用自来水冲洗干净，置于超净工作台内，用浓度为0.15％的Hgcl2溶液灭菌20～25min， 4)再转至浓度为3％、并加入适量吐温的次氯酸钠溶液中消毒15～20min，取出在无菌水中漂洗3～4次； 5)诱导培养将经过上述消毒灭菌处理后的嫩茎或/和茎尖在无菌条件下接种于下列诱导培养基中 MS基本培养液 6-苄胺基嘌呤6-BA 1.5～2.0mg/L 萘乙酸NAA 0～0.1mg/L 蔗糖 30000～40000mg/L 琼脂 5500～6500mg/L PH5.6～6.2 在培养温度为22±2℃，光照时间为8～10h/d，光照强度为2000～2500Lx的环境条件下培养15～20d，在嫩茎的节间或/和茎尖的顶部直接生成不定芽； 6)增殖培养在无菌条件下，将上述诱导出的不定芽分切后转入下列增殖培养基中 MS基本培养液 6-苄胺基嘌呤6-BA 0.3～0.6mg/L 腺嘌呤Ad 0.5～1.0mg/L 萘乙酸NAA 0～0.1mg/L 蔗糖 30000～40000mg/L 琼脂 5500～6500mg/L pH5.5～5.8 在培养温度为22±2℃，光照时间为8～10h/d，光照强度为2000～2500Lx的环境条件下，增殖培养18～23d； 7)继代培养将上述增殖培养的不定芽在无菌条件下按节切成茎段，接入与步骤5)相同的增殖培养基中，在与步骤5)相同的培养环境下进行继代培养，继代周期为15～20d，得无根不定芽； 8)生根培养将增殖苗上部1cm长的茎尖切下，插入下列生根培养基中 1/2MS基本培养液 萘乙酸NAA 0.2～0.5mg/L 吲哚乙酸IAA 0.1～0.3mg/L 蔗糖 30000～40000mg/L 琼脂 5500～6500mg/L pH5.5～5.8 在与步骤5)的继代培养相同的环境条件下培养7～10天，即有白色根系形成； 9)移栽成活取出健壮、苗色浓绿的有根小苗，洗去附着于根上的培养基，移栽至珍珠岩的基质内，栽后浇足水，前期保持85％的相对湿度，以后逐渐降低湿度和增加光照，同时进行常规病虫害防治，成活率可达95％以上，经25～35天过渡，长至3cm～4cm高，根系生出大量须根时，移栽至红土∶腐质土＝2∶1的土中，20～25天后即得可定植于田间栽培的满天星种苗。
10)种苗性状鉴定将定植种苗按常规的切花栽培措施进行管理，对新品种各个时期的种性进行观察与记录。新品种一致保持花团大、色白、重瓣多、枝条硬等优良种性的稳定性。新品种定名为“云星23”进行推广种植。
所述步骤3)的外植体灭菌所用洗衣粉水的浓度为常规浓度，添加的吐温量也为常规量，以达到消毒、灭菌为宜。
本发明具有下列优点和效果采用上述方案，即利用组织培养技术对满天星开花性状优良枝条的嫩茎或茎尖进行快速增殖后，不仅能保持和固定满天星花团大、色白、重瓣多、枝硬等优良种性，而且能有效缩短育种周期，使获得的特异无性系达到了一致性和稳定性，快速育成了可大面积推广使用的满天星花卉新品种“云星23”的种苗，实现了优质种苗的规模化、标准化和工厂化生产，解决了常规种子繁育体系很难将满天星种苗发生的具有优良性状的芽变固定或保持下来的难题。同时还解决了常规繁育体系生产的种苗亲本来源复杂，种苗质量不稳定的又一难题。通过本发明，使种苗来源单一，易于控制，繁殖速度快，20d为一个周期，繁殖倍数达3～5，选取1个嫩茎或茎尖进行快速繁殖，年生产量可达几十万株，同时易于标准化、工厂化操作，有效地提高了种苗质量。本发明利用组织培养技术在培养室内实现周年生产，节约了土地资源，提高了经济效益，克服了种苗无法周年进行生产的难点。本发明对满天星种苗生产技术流程中的关键环节进行优化整合，采用低激素配比的培养基进行生产，避免变异株的产生，由于满天星喜欢冷凉的环境和较高的光强，在培养温度为22±2℃，光照强度2000～2500Lx的环境条件下，所生产的增殖苗和生根苗，苗相健壮、节间短而粗壮、叶色浓绿，质量优，移栽成活率高达95％以上。
具体实施例方式 为了更好地说明本发明的实质内容，下面给出本发明的实施例，但本发明的内容并不仅限于这些。
实施例1 1)芽变新品种的筛选在云南省昆明市呈贡县宝丰的满天星切花种植基地内，对处于盛花期的满天星进行观察与筛选，选出原满天星品种G3中的一枝花大、色白、花朵数多、花型优美的重瓣新品种的芽变枝条，其花朵数是普通花朵数的1.3倍、花瓣数为普通花瓣的1.5倍、花瓣长度是普通花瓣的2倍； 2)外植体的选择在上述芽变的开花枝条上，采集枝条上3～5个嫩茎和茎尖作为外植体； 3)外植体灭菌将选取的嫩茎和茎尖切成2cm的茎段，在常规浓度的洗衣粉水中浸泡3分钟，用自来水冲洗干净后，置于超净工作台内，以0.15％的Hgcl2溶液中灭菌20min，再转至4％的次氯酸钠溶液加吐温2～3滴消毒15min，最后取出在无菌水中漂洗3次； 4)诱导培养将经过上述消毒灭菌后的嫩茎和茎尖在无菌条件下接种于装有下列诱导培养基的培养瓶中 MS基本培养液 6-苄胺基嘌呤(6-BA) 2.0mg/L 萘乙酸(NAA) 0.1mg/L 蔗糖 40000mg/L 琼脂 6000mg/L PH 5.8 在培养温度为22±2℃，光照时间8h/d，光照强度2500Lx的环境条件下，培养15d后，嫩茎的侧芽及茎尖的顶芽可直接生成不定芽，每个茎段可生成4～6个芽。
在诱导培养基的配比方面，设计了几组6-苄胺基嘌呤(6-BA)浓度逐渐升高的培养基，范围大致在0.4mg/L～2.0mg/L，结果发现随着6-苄胺基嘌呤(6-BA)浓度的升高，幼嫩茎尖需先生成愈伤组织，再由愈伤组织脱分化形成不定芽，同时形成的芽体矮小，扁平，有时几株芽连成一片，叶片皱缩、卷曲且畸形，说明随着6-苄胺基嘌呤(6-BA)浓度的升高，其优良种性发生变异的机率大大提高，不利于品种的稳定； 5)增殖培养在无菌条件下，将上述诱导出的不定芽分切后转入下列增殖培养基中， MS基本培养液 6-苄胺基嘌呤(6-BA)0.4mg/L 腺嘌呤(Ad)0.6mg/L 萘乙酸(NAA) 0.1mg/L 蔗糖 40000mg/L 琼脂 6500mg/L pH5.8 在培养温度为22±2℃，光照时间8h/d，光照强度2500Lx的环境条件下，增殖培养18d，每个不定芽可增殖成3～5个芽，芽体高度约为2cm～3cm； 6)继代培养将上步骤的增殖不定芽在无菌条件下按节切成2cm茎段，接入与上步骤同样的增殖培养基中，并在相同的培养环境下进行继代培养，得到大量的无根不定芽，继代周期为15d，繁殖倍数3； 7)生根培养增殖基数达到繁殖基数时，将增殖苗上部1cm长的茎尖切下，插入到下列的生根培养基中 1/2MS基本培养液 萘乙酸(NAA) 0.3mg/L 吲哚乙酸(IAA) 0.2mg/L 蔗糖40000mg/L 琼脂6000mg/L pH 5.8 并在与继代培养相同的环境条件下培养7天后，切口稍膨大并出现白色突起，形成根原基，10天后陆续有白色根系形成，生根率达98％，根数达5～8条，愈伤组织少； 通过比较试验，发现NAA0.1mg/L～1.0mg/L+IAA0.2mg/L时均能生根，但以NAA为0.3mg/L+NAA为0.2mg/L时，生根效果较好，不仅根系分布均匀，且根的数量及根粗适中，过渡成活率高； 8)移栽成活自瓶内取出高约1.5cm的健壮、苗色浓绿的有根小苗，洗去附着于根上的培养基，移栽至珍珠岩的基质内，栽后浇足水，前期保持85％的相对湿度，以后逐渐降低湿度和增加光照，常规病虫害防治，成活率可达95％以上，经25天过渡，长至3cm～4cm高，根系生出大量须根时，可移栽至红土∶腐质土＝2∶1的营养袋内，再过15天即可定植于田间栽培。
9)新品种性状鉴定将过渡苗定植于田间，按常规的切花管理措施进行栽培与管理，3～4个月即可见花。到盛花时对花朵的大小、颜色、花瓣数以及花型、株型、产量等特征进行统计，结果表明，通过本发明所得到的无性系植株均能延续芽变枝的优良种性，其开花整齐，花型特征一致、稳定。通过本发明仅经过一代的筛选，就能将新品种“云星23”的优良种性固定和保持下来，为满天星新品种的育成开辟了一条快捷的途径。
实施例2 1)芽变新品种的筛选在云南省昆明市呈贡县宝丰的满天星切花种植基地内，对处于盛花期的满天星进行观察与筛选，选出原满天星品种G3中的一枝花大、色白、花朵数多、花型优美的重瓣新品种的芽变枝条，其花朵数是普通花朵数的1.3倍、花瓣数为普通花瓣的1.5倍、花瓣长度是普通花瓣的2倍； 2)外植体的选择在上述芽变的开花枝条上，采集枝条上3～5个嫩茎和茎尖作为外植体； 3)外植体灭菌将选取的嫩茎和茎尖切成2cm的茎段，在常规浓度的洗衣粉水中浸泡5分钟，用自来水冲洗干净后，置于超净工作台内，以0.15％的Hgcl2溶液中灭菌25min，再转至4％的次氯酸钠溶液加吐温2～3滴消毒20min，最后取出在无菌水中漂洗4次； 4)诱导培养将经过上述消毒灭菌后的嫩茎和茎尖在无菌条件下接种于装有下列诱导培养基的培养瓶中 MS基本培养液 6-苄胺基嘌呤(6-BA) 1.5mg/L 蔗糖 30000mg/L 琼脂 5500mg/L PH 6.2 在培养温度为22±2℃，光照时间8h/d，光照强度2000Lx的环境条件下，培养20d后，嫩茎的侧芽及茎尖的顶芽可直接生成不定芽，每个茎段可生成4～6个芽； 5)增殖培养在无菌条件下，将上述诱导出的不定芽分切后转入下列增殖培养基中， MS基本培养液 6-苄胺基嘌呤(6-BA) 0.6mg/L 腺嘌呤(Ad) 1.0mg/L 蔗糖 30000mg/L 琼脂 5500mg/L pH 5.5 在培养温度为22±2℃，光照时间8h/d，光照强度2000Lx的环境条件下，增殖培养23d，每个不定芽可增殖成3～5个芽，芽体高度约为2cm～3cm； 6)继代培养将上步骤的增殖不定芽在无菌条件下按节切成2cm茎段，接入与上步骤同样的增殖培养基中，并在相同的培养环境下进行继代培养，得到大量的无根不定芽，继代周期为20d，繁殖倍数5； 7)生根培养增殖基数达到繁殖基数时，将增殖苗上部1cm长的茎尖切下，插入到下列的生根培养基中 1/2MS基本培养液 萘乙酸(NAA)0.5mg/L 吲哚乙酸(IAA) 0.1mg/L 蔗糖 30000mg/L 琼脂 5500mg/L pH 5.5 并在与继代培养相同的环境条件下培养7天后，切口稍膨大并出现白色突起，形成根原基，10天后陆续有白色根系形成，生根率达98％，根数达5～8条，愈伤组织少； 8)移栽成活自瓶内取出高约1.5cm的健壮、苗色浓绿的有根小苗，洗去附着于根上的培养基，移栽至珍珠岩的基质内，栽后浇足水，前期保持85％的相对湿度，以后逐渐降低湿度和增加光照，常规病虫害防治，成活率可达95％以上，经25天过渡，长至3cm～4cm高，根系生出大量须根时，可移栽至红土∶腐质土＝2∶1的营养袋内，再过15天即可定植于田间栽培。
本发明经对实施例1进行试验研究，其结果报告如下 1.供试材料上述实施例1的满天星芽变新品种。
2.试验结果表1给出不同激素配比对外植体的诱导情况。
从表1中可得出，诱导培养基的激素配比为6-BA 0.4mg/L+Ad0.6mg/L+NAA0.1mg/L时，变异率最低，不定芽生长良好而健壮。
规模化生产中，应以种苗的质量为追求目标，要求种苗的低(无)变异性。较高浓度的BA可以提高增殖系数，但不定芽的分化呈丛生状态，生长多不正常，因此在不同的生产阶段，宜适当控制激素的浓度，在保证增殖率的同时保证种苗的质量。在培养效果相差不太大的情况下，激素用量的选择宜低不宜高。
因此在满天星云星23芽变新品种的增殖过程中，尽量采用低激素配比的培养基进行扩繁，防止激素的累加效益，使新品种的优良种性稳定下来，达到一致性。
表1不同激素配比对外植体的诱导情况
满天星“云星23”芽变新品种生根培养基的调配结果见表2。
表2不同生长素浓度对满天星云星23芽变新品种生根和成活的影响
从表2可见，在NAA0.1～1.0mg/L+IAA0.2mg/L的培养基上，均会长根，但以NAA0.3mg/L+IAA0.2mg/L时的生根效果最好，不仅根系分布均匀，且根的数量及根长适中，过渡成活率高；生长素浓度过高则根系短粗，附着于疏松的愈伤组织上，易脱落，过渡成活率低。满天星云星23在南方周年都可种植。
权利要求
1、一种满天星花卉新品种“云星23”的快速育成方法，其特征在于经过下列步骤
A、芽变筛选在植株的盛花期，选择生长健壮、无病虫害、无畸形、花型与株型优美的芽变枝条；
B、植体的选择在选定的发生芽变的开花枝上分离出嫩茎或茎尖作为外植体；
C、植体灭菌将分离出来的嫩茎或茎尖放在洗衣粉水中浸泡3～5min后，用自来水冲洗干净，置于超净工作台内，用浓度为0.15％的Hgcl2溶液，灭菌20～25min，再转至浓度为3％、并加入适量吐温的次氯酸钠溶液中消毒15～20min，取出在无菌水中漂洗3～4次；
D、诱导培养将经过上述消毒灭菌后的嫩茎或茎尖在无菌条件下接种于下列诱导培养基中
MS基本培养液
6-苄胺基嘌呤(6-BA) 1.5～2.0 mg/L
萘乙酸(NAA) 0～0.1 mg/L
蔗糖 30000～40000 mg/L
琼脂 5500～6500 mg/L
PH 5.6～6.2
在培养温度为22±2℃，光照时间8～10h/d，光照强度2000～2500Lx的环境条件下培养15～20d后，在嫩茎的节间或茎尖的顶部直接生成不定芽；
E、增殖培养在无菌条件下，将上述诱导出的不定芽分切后转入下列增殖培养基中
MS基本培养液
6-苄胺基嘌呤(6-BA) 0.3～0.6 mg/L
腺嘌呤(Ad) 0.5～1.0 mg/L
萘乙酸(NAA) 0～0.1 mg/L
蔗糖 30000～40000 mg/L
琼脂 5500～6500 mg/L
pH 5.5～5.8
在培养温度为22±2℃，光照时间8～10h/d，光照强度2000～2500Lx的环境条件下，增殖培养18～23d；
F、继代培养将上述增殖培养的不定芽在无菌条件下按节切成茎段，接入同样的增殖培养基中，在相同的培养环境下进行继代培养，得无根不定芽，继代周期为15～20d，繁殖倍数为3～5倍；
G、生根培养将增殖苗上部1cm长的茎尖切下，插入下列生根培养基中
1/2MS基本培养液(大量元素减半)
萘乙酸(NAA) 0.2～0.5 mg/L
吲哚乙酸(IAA)0.1～0.3 mg/L
蔗糖 30000～40000 mg/L
琼脂 5500～6500 mg/L
pH 5.5～5.8
在与上述继代培养相同的环境条件下培养7～10天，即有白色根系形成；
H、移栽自培养瓶内取出高约1.5cm的健壮、苗色浓绿的有根小苗，洗去附着于根上的培养基，移栽至珍珠岩的基质内，栽后浇足水，前期保持85％的相对湿度，以后逐渐降低湿度和增加光照，同时进行常规病虫害防治，成活率可达95％以上，经25～35天过渡，长至3cm～4cm高，根系生出大量须根时，移栽至红土∶腐质土＝2∶1的营养袋内，20～25天后即得可定植于田间栽培的满天星花卉新品种“云星23”的种苗。
全文摘要
本发明提供一种满天星花卉新品种的快速育成方法，经过芽变筛选、植体的选择、植体灭菌、诱导培养、增殖培养、继代培养、生根培养、移栽成活，得花团大、色白、重瓣多、枝硬等优良种性的满天星花卉新品种“云星23”的种苗。使种苗来源单一，易于控制，繁殖速度快，移栽成活率高达95％以上，在培养室内即可实现周年生产，节约了土地资源，提高了经济效益，为满天星优质新品种的育成开辟了一条快捷的途径，有效降低了新种苗培育周期和成本。本发明同时对满天星种苗的组培快繁体系进行了研究和完善，繁种效率高，种苗质量好，实现了满天星种苗的规模化、标准化和工厂化生产。
文档编号C12N5/04GK101396002SQ20081005894
公开日2009年4月1日 申请日期2008年9月23日 优先权日2008年9月23日
发明者杨春梅, 屈云慧, 赵培飞, 吴丽芳, 霞 黎, 蒋亚莲, 倩 张 申请人:云南省农业科学院花卉研究所