专利名称：一种pH 2.5～6.5范围内有高活性的β-甘露聚糖酶MAN5A及其基因和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明涉及一种pH 2. 5 6. 5范围内有高活性的P -甘露聚糖酶MAN5A及其基因和应用。
背景技术：
植物细胞壁主要由纤维素、半纤维素及木质素等物质构成。甘露聚糖是植物半纤维素的重要组分，是由P-l，4-D-甘露糖连接而成的线状多聚体，在多糖的侧链上主要有葡萄糖基、乙酰基和半乳糖基等取代基团。甘露聚糖具有高亲水性，在单胃动物的消化道内大量吸水，增加了消化道内容物的黏度，抵抗胃肠蠕动，直接影响动物对营养物质的消化吸 收。^ -甘露聚糖酶-mannanase EC3. 2. I. 78)是一种水解甘露聚糖的内切水解酶，以内切方式降解甘露糖主链￠-1,4糖苷键，释放出短的￠-1,4甘露寡糖。虽然甘露聚糖的完全酶解需要P -甘露聚糖酶、^ -甘露糖苷酶、P -葡糖苷酶、a-半乳糖苷酶和脱乙酰酶的协同作用，但其中￠-甘露聚糖酶是主要发挥作用的酶，在饲料中得到比较广泛的应用。在饲料中加入3 -甘露聚糖酶能分解3 -甘露聚糖，使之转化为甘露低聚糖，从而降低
甘露聚糖的抗营养作用，提高饲料利用率，促进畜禽生长，减轻环境污染。另外，￠-甘露聚糖酶分解3 -D-甘露聚糖生成的甘露低聚糖还是一类重要的功能性寡糖，具有一定的免疫原性，能刺激机体的免疫应答，并与病毒和毒素结合，减缓抗原的吸收，能调节肠道菌群，干扰病原菌定植，促进肠道有益菌群增殖，提高动物的生产性能，长期使用可防止沙门菌和肉毒杆菌等致病菌感染及在肠道的定植和繁殖，减少抗生素的添加量。近年来，随着豆类产品(豆柏等)在动物饲料中的广泛应用，甘露聚糖的抗营养作用也越来越受到重视，在饲料中添加酶制剂是解决这一问题的主要途径。近年来，随着甘露寡糖生理功能的发现，绿色饲料的兴起以及人们环保意识的增强，对￠-甘露聚糖酶的研究和利用已进入了一个新的阶段。￠-甘露聚糖酶已被广泛应用于食品、医药、饲料、造纸、纺织印染、石油开采、精细化工及生物技术等诸多领域，是一种新型的工业酶，具有很大的潜在应用价值。而在饲料中应用的甘露聚糖酶，主要在单胃动物的胃和小肠内发挥作用，因此饲料中使用的P -甘露聚糖酶需要具备以下特征第一、最适PH在酸性，同时在整个酸性和中性的pH范围内又能维持较高活性，确保其可以更好的在动物肠道内发挥作用；第二、对动物胃、胰蛋白酶具有较好的抗性，确保其在动物肠道内可以稳定的存在，而不被蛋白酶降解；第三、良好的热稳定性，同时在常温下又具有高活性等综合性质，确保其在制粒加工的过程中不容易失活，而在动物体温39°C左右能够很好的发挥作用；最后，容易发酵生产，成本低廉。因为饲料用酶仅是众多饲料添加剂中的一类，决定了其添加成本必须十分低廉。￠-甘露聚糖酶广泛存在于细菌、放线菌、真菌、植物、动物等生物中。细菌来源的甘露聚糖酶主要是酸偏中性的甘露聚糖酶。其分子量多在35 55kDa之间，最适反应作用温度为50 70°C。目前研究最多的是芽孢杆菌，除嗜碱性芽孢杆菌的最适作用PH达到9. 0以上，大多最适反应pH在5. 5 8.0之间。真菌的￠-甘露聚糖酶一般呈酸性，分子量大约在45 55kDa，最适作用pH为4. 0 6. 0，最适作用温度为55 75°C。相对细菌而言，真菌来源的P -甘露聚糖酶最适反应pH值、pH稳定性都偏低,耐热性比细菌差。目前国内夕卜，虽然许多3 -甘露聚糖酶被克隆分离及性质测定，但这些酶的性质特征，均存在一些缺陷，例如，PH作用范围不合适，热稳定性差，表达量低等，均不能满足实际应用的需要。因此人们希望能够找到一种新的能够满足实际应用需求的3 -甘露聚糖酶，从而能够进一步推广该￠-甘露聚糖酶在饲料、食品、医药等行业中应用。本发明从云南锡矿的酸性废水中分离的Penicillium sp. WNl菌株中得到了一个新的￠-甘露聚糖酶基因，其编码的甘露聚糖酶具有以下几个优点宽的PH作用范围良好的热稳定性、高比活、强的蛋白酶抗性、容易发酵生产。所有这些优点都意味着本发明的新的甘露聚糖酶在饲料、食品、医药等行业中，与现有￠-甘露聚糖酶相比，将会更有应用价值
发明内容
本发明的目的是提供一种pH 2.5 6.5范围内有高活性的￠-甘露聚糖酶MAN5A。本发明的另一目的是提供编码上述￠-甘露聚糖酶的基因。本发明的另一目的是提供包含上述￠-甘露聚糖酶基因的重组载体。本发明的另一目的是提供包含上述￠-甘露聚糖酶基因的重组菌株。本发明的另一目的是提供制备上述￠-甘露聚糖酶的方法。本发明的另一目的是提供上述￠-甘露聚糖酶的应用。本发明首先所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种性质优良的适合于在饲料、食品、医药等行业中应用的新的￠-甘露聚糖酶。本发明分离筛选出一种生产上述pH 2. 5 6.5范围内有高活性的￠-甘露聚糖酶MAN5A的嗜酸真菌青霉WNKPenicillium sp.)，于2011年8月11日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所，100101)，其保藏号为CGMCC No. 5131。本发明提供了一种P -甘露聚糖酶MAN5A，其氨基酸序列如SEQ ID NO. I MKSAILILPF LSHLAVSQTA NWGQCGGENW NGDTTCNPGffYCSYLNPffYS QCVPGSGSSS60SSTTLSTVVS SQTSSIRTTS ATSTLAASAS TTAGSLPSAS GTSFVIDGKKGYFAGTNSYff120LPFLTNNADV DLVMGHLQQS GLKILRVffGF NDVNAVPSSDTVffFQLLANG QQTINTGSDG 180LQRLDYVVKS AEAHGIKLII NFVNNWDDFG GMNAYVQNYGGNQTSffYTNN AAQDAYKTYI240KTVISRYIGS SAIFAffELAN EPRCKGCGTD VIYNWAQSTS QYIKSLEPGRMVCI ⑶ EGMG300
LSVDSDGSYP FGYSEGNDFE KTLAIPTIDF GTIHLYPSQff GETDSffGSSffITAHGQACKN360AGKPCLLEEY GSTSLCSSEA PffQTTAISSV AADLFffQffGD TLSTGQSAHDEYSIFYGS SD420YTCLVTDHVS AIDSA435其中，该酶全长435个氨基酸，N端20个氨基酸为其预测的信号肽序列“MKSAILILPF LSHLAVSQTA”。因此，成熟的P -甘露聚糖酶MAN5A的理论分子量为44. 7kDa，其氨基酸序列如SEQ ID NO. 2 ·
NWGQCGGENW NGDTTCNPGff YCSYLNPffYS QCVPGSGSSSSSTTLSTVVS SQTSSIRTTS 60ATSTLAASAS TTAGSLPSAS GTSFVIDGKK GYFAGTNSYff LPFLTNNADVDLVMGHLQQS120GLKILRVffGF NDVNAVPSSD TVffFQLLANG QQTINTGSDGLQRLDYVVKS AEAHGIKLII 180NFVNNWDDFG GMNAYVQNYG GNQTSffYTNN AAQDAYKTYIKTVISRYIGS SAIFAffELAN 240EPRCKGCGTD VIYNWAQSTS QYIKSLEPGR MVCI⑶EGMG LSVDSDGSYPFGYSEGNDFE300KTLAIPTIDF GTIHLYPSQff GETDSffGSSff ITAHGQACKN AGKPCLLEEYGSTSLCSSEA360PffQTTAISSV AADLFffQffGD TLSTGQSAHD EYSIFYGSSD YTCLVTDHVSAIDSA415该￠-甘露聚糖酶MAN5A同时具有非常广的作用pH范围，最适pH为5. 5，在pH
2.5-6. 5范围内，酶活能维持80%以上；最适温度为65°C，在30 70°C间能维持55%以上的酶活性；在65°〇处理30min，保持28. 3%的酶活性；具有极好的抗胃蛋白酶和胰蛋白酶处理能力；同时高密度发酵酶活性高，易于工业化生产。该酶的性质非常适合在饲料、食品等行业中应用。这种具有宽的PH作用范围和宽的温度作用范围性质的￠-甘露聚糖酶未曾有过报道。本发明还提供了编码上述pH 2. 5 6. 5范围内有高活性的P -甘露聚糖酶MAN5A的基因。该酶的全基因序列如SEQ ID NO. 3所示atgaagtccg caatcctcat cctccccttc ctgtcccatc tagccgtttc ccaaacggca60aattggggtc agtgtggtgg cgaaaactgg aatggagata ccacctgcaa tcccggctgg120tactgctcgt atctgaaccc atggtatagc cagtgtgttc caggctcggg ctcgtcttcg180tcttcaacga ctttatcaac tgtcgtatct tcacagacat cctccatccg cactaccagc240gctaccagca cattagctgc tagtgcctct actactgccg gctctcttcc tagtgctagt300ggcactagct tcgtgattga cggtaaaaag gggtactttg ctggtacaaa ttcgtactgg360cttcccttcc tcacgaacaa tgccgatgtt gacttggtaa tgggccattt gcagcagtcg420ggtctaaaga tcttacgggt ctggggattc aacgatgtca acgctgtacc cagctccgac480acagtctggt ttcagcttct cgcaaacggt cagcagacaa tcaacacggg ctctgacggg540·ctacagcgtc ttgactatgt cgtgaagtca gctgaagccc atggtatcaa gctgatcatc600aactttgtga ataactggga tgactttggc ggtatgaacg cctacgttca gaattatggt660ggcaatcaga ccagttggta cacaaataac gcagcacaag acgcgtataa gacatatatc720aagacggtca ttagccggta catcgggtct tctgccatct ttgcatggga attagcaaat780gaaccgcgct gcaagggatg tggcaccgat gtcatttaca attgggccca gtctacaagc840cagtatatca agtcgcttga accgggccgt atggtgtgca ttggagatgg taagtcgcat900acttgcttca caaaagtatc cactggtgag ctttactaac gttcgtactt gatagagggc960atgggtttga gcgttgactc ggatggcagc tatccctttg gatactctga aggaaatgat1020tttgaaaaga ctttggccat ccccacaatc gattttggaa caatccattt atacccgagt1080caatgtgagt caaagacctt cacctcttat gatgaccaaa gactaacaca tccaaatcag1140ggggcgagac ggattcctgg ggctcatcct ggatcacagc ccacggccaa gcctgcaaga1200acgccggcaa accatgtctc ctcgaagagt atggttcaac tagtctctgt agctccgagg1260ctccctggca gacaaccgct ataagctccg ttgccgcgga tttgttctgg cagtggggtg1320atacattgag tactggacag tctgcacatg acgagtacag catcttctat ggtagtagtg1380at tacacct g cttggtgacg gat cat gt ta gtgcaat t ga ctcggcttga1430
本发明通过PCR的方法分离克隆了 pH 2. 5 6. 5范围内有高活性的P -甘露聚糖酶MAN5A的基因man5A，DNA全序列分析结果表明，^ -甘露聚糖酶MAN5A结构基因man5A全长1430bp，含有2个内含子，+881 955bp，+1085 1141bp，为其内含子序列，cDNA长1308bp，其 cDNA 序列如 SEQ ID NO. 4 所示atgaagtccg caatcctcat cctccccttc ctgtcccatc tagccgtttc ccaaacggca60aattggggtc agtgtggtgg cgaaaactgg aatggagata ccacctgcaa tcccggctgg120tactgctcgt atctgaaccc atggtatagc cagtgtgttc caggctcggg ctcgtcttcg180
tcttcaacga ctttatcaac tgtcgtatct tcacagacat cctccatccg cactaccagc240gctaccagca cattagctgc tagtgcctct actactgccg gctctcttcc tagtgctagt300ggcactagct tcgtgattga cggtaaaaag gggtactttg ctggtacaaa ttcgtactgg360cttcccttcc tcacgaacaa tgccgatgtt gacttggtaa tgggccattt gcagcagtcg420ggtctaaaga tcttacgggt ctggggattc aacgatgtca acgctgtacc cagctccgac480acagtctggt ttcagcttct cgcaaacggt cagcagacaa tcaacacggg ctctgacggg540ctacagcgtc ttgactatgt cgtgaagtca gctgaagccc atggtatcaa gctgatcatc600aactttgtga ataactggga tgactttggc ggtatgaacg cctacgttca gaattatggt660ggcaatcaga ccagttggta cacaaataac gcagcacaag acgcgtataa gacatatatc720aagacggtca ttagccggta catcgggtct tctgccatct ttgcatggga attagcaaat780gaaccgcgct gcaagggatg tggcaccgat gtcatttaca attgggccca gtctacaagc840cagtatatca agtcgcttga accgggccgt atggtgtgca ttggagatga gggcatgggt900ttgagcgttg actcggatgg cagctatccc tttggatact ctgaaggaaa tgattttgaa960aagactttgg ccatccccac aatcgatttt ggaacaatcc atttataccc gagtcaatgg1020ggcgagacgg attcctgggg ctcatcctgg atcacagccc acggccaagc ctgcaagaac1080gccggcaaac catgtctcct cgaagagtat ggttcaacta gtctctgtag ctccgaggct1140ccctggcaga caaccgctat aagctccgtt gccgcggatt tgttctggca gtggggtgat1200acattgagta ctggacagtc tgcacatgac gagtacagca tcttctatgg tagtagtgat1260tacacctgct tggtgacgga tcatgttagt gcaattgact cggcttga1308其中，信号肽的碱基序列为 “atgaagtccgcaatcctcatcctccccttcctgtcccatctagccgtttcccaaacggca，，成熟蛋白理论分子量为44. 7kDa，该酶属于糖基水解酶第5家族。将P -甘露聚糖酶基因man5A的cDNA序列及推导出的氨基酸序列在GenBank中进行BLAST比对发现，与 Talaromyces stipitatus ATCC 10500 (XP002480621)来源的一个预测蛋白内切-1，4-3 -甘露糖苷酶具有最高的氨基酸序列一致性，一致性达82%。与做过功能验证的来源于Aspergillus fumigatus (ACH58410)的内切P -甘露聚糖酶最高一致性为58*%。说明MAN5A是一种新的甘露聚糖酶。本发明还提供了包含上述甘露聚糖酶基因man5A的重组载体，优选为pPIC9-man5A。将本发明的P _甘露聚糖酶基因插入到表达载体合适的限制性酶切位点之间，使其核苷酸序列可操作的与表达调控序列相连接。作为本发明的一个最优选的实施方案，优选为将￠-甘露聚糖酶基因插入到质粒PPIC9上的EcoR I和NotI限制性酶切位点之间，使该核苷酸序列位于AOXl启动子的下游并受其调控，得到重组酵母表达质粒pPIC9_man5A。本发明还提供了包含上述￠-甘露聚糖酶基因的重组菌株，优选为重组菌株GS115/man5A。本发明还提供了一种制备pH 2. 5 6. 5范围内有高活性的P -甘露聚糖酶MAN5A的方法，包括以下步骤I)用上述重组载体转化宿主细胞，得重组菌株；2)培养重组菌株，诱导重组￠-甘露聚糖酶MAN5A的表达；以及3)回收并纯化所表达的￠-甘露聚糖酶MAN5A。其中，所述宿主细胞为毕赤酵母(Pichia pastoris)细胞、啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)细胞或多型汉逊酵母(Hansenula poIymorpha)细胞，优选将重组酵母表达质粒转化毕赤酵母细胞(Pichic pastoris) GSl 15，得到重组菌株GSl 15/man5A。本发明还提供了上述pH 2. 5 6. 5范围内有高活性的P -甘露聚糖酶MAN5A的应用，优选该酶在水解￠-甘露聚糖以及其在饲料、食品和医药工业领域的应用。运用基因工程手段来产业化生产PH作用范围广的甘露聚糖酶产品还未见报道。本发明提供了一个新的￠-甘露聚糖酶基因，其编码的￠-甘露聚糖酶具有强嗜酸性，作用PH范围广，较好的耐热性和抗蛋白酶能力，可应用于饲料、食品、医药等工业。根据本发明的技术方案可以实现利用基因工程手段生产性质优良适合工业应用的￠-甘露聚糖酶。
图lman5A在毕赤酵母中表达的P -甘露聚糖酶MAN5A的SDS-PAGE分析，1，分子量标准；2，纯化的重组P -甘露聚糖酶。图2本发明重组P -甘露聚糖酶MAN5A的最适pH值。图3本发明P -甘露聚糖酶MAN5A的pH稳定性。图4本发明P -甘露聚糖酶MAN5A的最适反应温度。图5本发明P -甘露聚糖酶MAN5A的热稳定性。
本发明分离筛选出一种生产上述pH 2. 5 6. 5范围内有高活性的￠-甘露聚糖酶MAN5A的嗜酸真菌青霉WNl (Penicillium sp.)，于2011年8月11日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所，100101)，其保藏号为CGMCC No. 5131。
具体实施例方式试验材料及一般实验方法I、菌株及载体菌株Penicillium sp. WNl分离于云南锡矿的酸性废水；毕赤酵母(Pichia pastoris GS115)为本实验室保存；毕赤酵母表达载体pPIC9及菌株GS115购自于 Invitrogen 公司。2、酶类及其它生化试剂内切酶购自TaKaRa公司，连接酶购自Invitrogen公司。燕麦木聚糖购自Sigma公司，其它都为国产试剂(均可从普通生化试剂公司购买得到)。3、培养基(I)产酶培养基将30g/L麦麸，30g/L玉米芯粉，30g/L豆柏，5g/L魔芋粉，5g/L(NH4)SO4,1g/L KH2PO4,0. 5g/L MgSO4 7H20，0. 01g/L FeSO4 7H20，0. 2g/LCaCl2 加入去离子水中，121 °C，15磅条件下灭菌处理20min ；(2)大肠杆菌培养基LB (126蛋白胨、0.5%酵母提取物、126NaCI，pH 7.0)；(3) BMGY 培养基；I %酵母提取物，2 % 蛋白胨，I. 34% YNB，0. 000049 < Biotin, I %甘油(v/v)；(4) BMMY培养基除以0. 5 %甲醇代替甘油，其余成份均与BMGY相同，pH4. 0。说明以下实施例中未作具体说明的分子生物学实验方法，均参照《分子克隆实验指南》(第三版)J-萨姆布鲁克一书中所列的具体方法进行，或者按照试剂盒和产品说明书进行。实施例I 提取 Penicillium sp WNl 基因组 DNA本发明从云南锡矿的酸性废水中分离的真菌WN1。根据形态及ITS序列鉴定为Penicillium属，命名为WNl (Penicillium sp.)。该菌株于2011年8月11日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(北京市朝阳区北辰西路I号院3号，中国科学院微生物研究所，100101)，其保藏号为CGMCC No. 5131。将青霉WNl经马铃薯汁培养基培养后，接种于诱导培养基中((NH4)2SO4 5g/L，KH2PO4 lg/L，MgSO4 7H20 0. 5g/L，FeSO4 7H20 0. Olg/L, CaCl2 0. 2g/L，魔芋粉 0. 5%，豆柏1%，1.5%琼脂糖，pH5.0)平板上，30°C培养5 6d，测定其产￠-甘露聚糖酶的活性。经测定该菌为高产3-甘露聚糖酶菌株。将马铃薯汁培养基培养3天的菌丝体，12, OOOrpm离心IOmin,收集的菌丝体加入已高温灭菌的研钵中，用液氮迅速研磨至粉末，然后将研磨好的菌体转移至一个新的，装有15ml CTAB裂解液50mL离心管中，轻柔上下倒置混匀，置于70°C水浴锅保温3h，每隔20min，上下倒置轻柔混匀一次，以便充分裂解菌体。4°C、12，OOOrpm离心lOmin，吸取上清至新的离心管中，加入等体积的氯仿抽提，室温放置5min,4°C、12，OOOrpm离心lOmin。取上清再加入等体积的酹/氯仿抽提，室温放置5min, 4°C、12，OOOrpm离心lOmin。以便尽量除去杂蛋白，再取上清加入等体积异丙醇，于室温静置5min后，4°C下IOOOOrpm离心lOmin。弃上清，沉淀用70%的乙醇洗涤两次，真空干燥，加入适量TE溶解，置于_20°C备用。实施例2嗜酸真菌Penicillium sp WNl ^ -甘露聚糖酶编码基因man5A的克隆根据已发表的￠-甘露聚糖酶基因保守序列设计合成了兼并引物Man5Pl，Man5P2 (见表I)。以Penicillium sp. WNl总DNA为模板进行PCR扩增。PCR反应参数为95°C、5min ;94°C、30sec，50 45°C、30sec，72°C、30sec，12 个循环(其中每个循环后复性温度下降 I0C ) ;94°C、30min，45°C、30sec，72°C、30sec，30 个循环；72°C>IOmin0 得到一约170bp片段，将该片段回收后送三博生物技术有限公司测序。根据测序得到的核甘酸序列设计TAIL-PCR引物uspl, usp2, usp3 ；dspl, dsp2,dsp3(见表I)。通过TAIL-PCR得到已知基因序列的侧翼序列，扩增得到产物回收后送三博生物技术有限公司测序。测序正确的片断经拼接后获得全长基因，核苷酸序列如SEQ IDNO. 3所示。表I. ￠-甘露聚糖酶基因克隆的简并引物及TAIL-PCR特异性引物
权利要求
1.一种pH 2. 5 6. 5范围内有高活性的￠-甘露聚糖酶MAN5A，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO. I或SEQ ID NO. 2所示。
2.—种pH 2. 5 6. 5范围内有高活性的￠-甘露聚糖酶基因man5A，其特征在于，编码权利要求I所述的P -甘露聚糖酶MAN5A。
3.根据权利要求2所述的pH2. 5 6. 5范围内有高活性的P -甘露聚糖酶基因man5A，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO. 3或4所示。
4.包含权利要求2或3所述P-甘露聚糖酶基因man5A的重组载体。
5.根据权利要求4所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体为pPIC9-man5A。
6.包含权利要求2或3所述P-甘露聚糖酶基因man5A的重组菌株。
7.根据权利要求6所述的重组菌株，其特征在于，所述重组菌株为毕赤酵母。
8.一种制备pH 2. 5 6. 5范围内有高活性的￠-甘露聚糖酶MAN5A的方法，其特征在于，包括以下步骤 1)用权利要求4的重组载体转化宿主细胞，得重组菌株； 2)培养重组菌株，诱导重组P-甘露聚糖酶MAN5A的表达；以及 3)回收并纯化所表达的￠-甘露聚糖酶MAN5A。
9.权利要求I所述pH2. 5 6. 5范围内有高活性的P -甘露聚糖酶MAN5A的应用。
10.嗜酸真菌Penicilliumsp. WN1，其特征在于，其保藏编号为CGMCC No. 5131。
全文摘要
本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明涉及一种pH 2.5～6.5范围内有高活性的β-甘露聚糖酶MAN5A及其基因和应用。本发明提供了一种新的β-甘露聚糖酶MAN5A，其具有如SEQ ID NO.1或2所示氨基酸序列，且本发明还提供了编码上述β-甘露聚糖酶MAN5A的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3或4所示，以及包含该基因的重组载体和重组菌株及其应用。本发明提供的pH 2.5～6.5范围内有高活性的β-甘露聚糖酶MAN5A具有强嗜酸性，作用pH范围广，较好的耐热性和抗蛋白酶能力，可作应用于饲料、食品、医药等工业。根据本发明的技术方案可以实现利用基因工程手段生产性质优良适合工业应用的β-甘露聚糖酶。
文档编号C12N9/42GK102978187SQ20111026249
公开日2013年3月20日 申请日期2011年9月6日 优先权日2011年9月6日
发明者张王照, 邵娜, 张健康, 朱世琴, 董玲丽, 姜小伟 申请人:北京卫诺恩生物科技有限公司